Активность антибиотиков — это способность подавлять рост микроорганизмов (бактерий, грибов, простейших). Понятие о росте хорошо энакомо в применении к макроорганизмам (необратимое увеличение о*бъема во времени), но применительно к микроорганизмам необходимо дать особое определение, поскольку в этом случае речь может идти о двух уровнях роста: о росте популяции и о росте единичной клетки. Под ростом популяции мы подразумеваем увеличение числа микроорганизмов во времени, т.^е. увеличение плотности микробной популяции, а под ростом клетки — синтез клеточных компонентов, необходимых единичной клетке, чтобы дать начало двум дочерним клеткам. Очевидно, что рост микробной популяции является результатом роста клеток.
Активность антибиотика определяют как его способность подавлять рост микробной популяции и оценивают или путем непосредственного подсчета числа клеток в единице объема, или с помощью измерения какого-либо параметра культуры, коррелирующего с плотностью популяции, например рассеяния света.
В следующих разделах мы рассмотрим определение только антибактериальной активности, однако те же методы можно использовать и для. определения противогрибковой или антипрото- зонной активности.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИНИМАЛЬНОЙ ПОДАВЛЯЮЩЕЙ

КОНЦЕНТРАЦИИ В ЖИДКОЙ СРЕДЕ
Одним из методов определения активности антибиотиков является определение минимальных концентраций, необходимых для полного подавления роста данной бактерии. Их называют минимальными подавляющими концентрациями (МПК) и определяют следующим образом.

1. Готовят несколько пробирок, содержащих одинаковый объем среды, инокулированной тест-бактерией (от 103 до 106 бактерий в 1 мл).
2. В пробирки добавляют антибиотик в уменьшающихся концентрациях. Обычно используют ступенчатое двукратное разве-

Номер пробирки	6	5	*	3	Z	1
Концентрация рисрампина, мкг/мл	б^-ю~5	зг-ю'5	16-10-5	8-W~s	А- Ю'ь	0

Рис. 2.1. Определение в жидкой среде МПК рифампина в отношении Staphylococcus aureus. Каждая пробирка содержит 5 мл питательной среды, иноку- лированной бактериями в количестве 103 клеток на 1 мл. Числа под каждой пробиркой означают концентрацию рифампина (пробирка 1 не содержит антибиотика и служит контролем роста микроорганизма). МПК соответствует концентрации антибиотика в пробирке 5 (0,00032 мкг/мл).
дение (т. е. если концентрация антибиотика в первой пробирке равна 1 мг/мл, во второй она будет 0,5 мг/мл, в третьей —

0. 25 мг/мл и т. д.). В одну пробирку антибиотик не добавляют, и она является контролем роста бактерии.

3. Культуры инкубируют в термостате при температуре, оптимальной для тест-бактерии, в течение времени, достаточного
   

Рис. 2.2. Одновременное определение МПК рифампина в отношении 12 видов бактерий на плотной среде. Чашка 1 — контрольная и не содержит антибиотика. На чашках 2, 3, 4 в среду добавлен антибиотик в концентрации соответственно 0,02; 0,04; 0,08 мкг/мл. Легко видеть, что разные бактерии обладают разной чувствительностью к антибиотику. При достаточном количестве разведений можно одновременно определить МПК для всех 12 видов бактерий.
для того, чтобы прошло не менее 10—15 генераций (обычно в течение ночи).

4. Пробирки просматривают, чтобы определить, где выросли бактерии: содержимое таких пробирок 'становится мутным. Помутнение указывает на наличие большого количества бактерий (более 107 частиц в 1 мл). Пробирки, в которых антибиотик со-
   

держится в достаточно высоких концентрациях, чтобы подавить рост бактерий, остаются прозрачными (рис. 2.1). МПК соответствует концентрации антибиотика в последней «прозрачной» пробирке.
Особенности метода определения МПК (ступенчатые двукратные разведения антибиотика и визуальное определение роста) таковы, что эта величина является не очень точной. Действительно, сдвиг только на одну пробирку при определении роста вызывает изменение величины МПК на 100%. Тем не менее МПК—очень полезный параметр как для изучения биологических свойств антибиотиков, так и для их клинического применения. Каждый антибиотик и каждый вид бактерий характеризуются при данных условиях определения своей величиной МПК.
Кроме того, разные штаммы одного вида могут несколько различаться по чувствительности к антибиотику и, следовательно, характеризоваться разными МПК.