Из числа настоящих многоклеточных животных организмов кишечнополостные являются самыми древними и самыми низкоорганизованными. За длительную историю своего существования они заселили все пространство Мирового океана от северного до южного полюсов, включая самые глубоководные впадины. В настоящее время описано около 9000 видов кишечнополостных, в подавляющей части — обитателей морей. Кишечнополостные характеризуются огромным разнообразием форм {несмотря на удивительную простоту строения) и значительными колебаниями размеров отдельных видов. Есть виды, едва достигающие 1 мм длины (полипы на колониях гидроидов), и имеются виды, достигающие размеров в 2 м (медуза цианея, например, обладает размером зонта в 2 ж и щупальцами, достигающими 30-метровой длины). Отдельные виды кишечнополостных характеризуются незначительной подвижностью, имеются виды вообще неподвижные, прикрепленные животные, например полипы, часто образующие колонии, и, наконец, встречаются виды, являющиеся плавающими подвижными организмами, например медузы. Многие кишечнополостные обладают яркой окраской. К ним, например, относится сифонофора физалия, за разноцветную окраску называемая нередко португальским военным корабликом. Однако наиболее характерным для кишечнополостных является наличие у них стрекательных (крапивных ) желез, состоящих из плосковатой капсулы, наружная, втягивающаяся вовнутрь стенка которой заканчивается спиралевидной тонкой трубкой. Полость капсулы кишечнополостных заполнена ядовитой жидкостью, имеющей обычно весьма сложный состав, различающийся в зависимости от вида наличием отдельных компонентов, обычно характерных для каждого вида. Компонентами яда могут быть талассин, эпине- фрин, норэпинефрин, гистамин, серотонин, кинины, терпеноиды, кислоты, кетоны, спирты, пептиды и т. д. и вещества еще неустановленного строения. Ядовитые железы покрывают всю поверхность тела кишечнополостных, но особенно много их на щупальцах и возле ротового отверстия. Тип кишечнополостные (Coelenterata) подразделяется на ряд классов:              гидроидные
(Hydroroa) (2800 видов), сцифоидные (Scyphoroa) (200 видов),
коралловые полипы (Anthoroa) (6000 видов) (Л. А. Зенкевич, 1968).
Среди разнообразных групп БАВ, обнаруженных в секретах и тканях кишечнополостных (нейротропные, миотропные, кардиостимуляторы, гипотензивные, противомикробные и т. д.), имеются и вещества цитостатического действия. Антинеопласти- ческие вещества, например, выделены из Anthopleura xantho- grammica, Renilla mulleri, Tealis coriacea (Pettit, Day, 1970). Ингибирующее влияние на синтез белка оказывают вытяжки из Corymorpha palma, Clava squamata, Tubularia crocea и других видов кишечнополостных (Davis, 1967). Однако исследования различных видов кишечнополостных на наличие БАВ вообще и БАВ цитостатического действия в частности находятся все еще в зачаточном состоянии. И лишь в отдельных случаях усилия по выделению и идентификации БАВ-цитостатиков доведены до логического завершения: выделены вещества-ингибиторы, установлена их структура, начато их биологическое изучение.
КРАССИН-АЦЕТАТ. Одним из таких соединений является крассин-ацетат. Крассин-ацетат относится к терпенам (дитер- пеновый лактон) и был выделен в 1960 г. (Ciereszko et al.) из мягких кораллов Pseudoplexaura crassa и Pseudoplexaura wage- naarii (Карибское море) в качестве антибиотического БАВ. Крассин-ацетат подавляет рост Entamoeba histolytica, Clostri- dium feseri и Staphylococcus aureus. Описанный первоначально способ извлечения этого БАВ (Ciereszko et al., 1960) заключался в следующем: Plexaura crassa собирают вручную, высушивают при температуре не выше 60°С в течение суток, снимают корковую часть и превращают ее в грубый порошок, применяя любой тип измельчителя. Измельченный порошок коралла экстрагируют н-пентаном (или эфиром) в аппарате Сокслета. Из полученной вытяжки выкристаллизовывается дитерпен — крассин-ацетат, который можно доочистить или хроматографически, или перекристаллизацией, или из этилового эфира, или из смеси четыреххлористого углерода и гексана. Образующиеся кристаллы крассин-ацетата — полициклического терпена — имеют tn„\44—145°С и обладают оптической активностью в растворах. Позднее было установлено, что крассин-ацетат является основным БАВ цитостатического действия, образующимся не только в указанном, но и в других видах карибских кораллов — Pseudoplexaura porosa, Pseudoplexaura flagellosa и Pseudoplexaura crucis (Rice et al., 1970; Weinhei- mer, Matson, 1975).
Изучение свойств крассин-ацетата, его локализации в тканях животного и учет видовой специфики заготавливаемых источников сделали возможным разработку новых методов выделения этого БАВ терпеноидной природы и новых способов его очистки. Так, были предложены новые технологические решения для получения из Pseudoplexaura porosa кристалличе- кого крассин-ацетата, а также две модификации для выделения из коралла препарата в резко различающихся количествах (Rice et al., 1970). С целью получения непосредственно кристаллического высокоочищенного крассин-ацетата собранные кораллы тотчас же измельчают до кусков размером 3—4 см и гомогенизируют в течение 10 с в среде предварительно обеспложенной разбавленной морской воды. После удаления крупных частей из гомогенизата путем процеживания гомогенизат подвергают центрифугированию (3000 g в течение 15 мин) и уделяют супернатант. Остаток разбавляют растворителем примерно в 20 раз и дважды центрифугируют. Оставшийся плотный слой ткани суспендируют 6-кратным количеством разбавленной морской воды, центрифугируют (2000g, 10 мин), декантируя супернатант. Оставшаяся плотноватая масса в этом случае представляется отчетливо разделенной на четыре слоя. Эти слои разделяются технически весьма просто. Поверхностный слой осторожно смывается водой и отбрасывается. Таким же образом суспендируются струей воды следующие (второй и третий) слои, которые собирают отдельно, так как в них содержатся кристаллы БАВ. Четвертый слой, состоящий из остатков скелета коралла, выбрасывается. Сохраняющиеся в виде суспензии второй и третий слои вновь центрифугируют и подвергают аналогичной схеме разделения для образования слоя чистых кристаллов крассин-ацетата. В случае получения небольших количеств крассин-ацетата эти же авторы использовали простую технологическую схему, основанную на использовании системы растворителей при экстракции и очистке (Rice et al., 1970). Свежесобранные кораллы, предварительно измельченные на части длиной до 3 см, трижды экстрагируют 50%-ным петролейным эфиром в метаноле. Далее полученную вытяжку фильтруют через бумажный фильтр, а остаток на фильтре подвергают повторной экстракции. Четвертую по счету реэкстракцию остатка проводят, используя в качестве экстрагента двойное количество от первоначального веса сырья метанола. Полученные вытяжки (4) смешивают и дают отстояться. При этом образуется два слоя: верхний — раствор петролейного эфира и нижний, более тяжелый, — раствор приблизительно 80%-ного метанола в воде. Фазы разделяют (можно с помощью целительней воронки) и промывают: эфирную фазу промывают дважды 80%-ным раствором метанола в воде, а мета- нольную — петролейным эфиром, сливая промывную жидкость в соответствующие фазы вытяжки (метанольную — в мета- нольную часть вытяжки, эфирную — в петролейную). Мета- нольный раствор упаривают до образования маслообразного остатка, добавляют в него промытый водой древесный уголь и фильтруют. К прозрачному фильтру добавляют равный объем теплой воды и оставляют до кристаллизации при комнатной температуре. Повторной перекристаллизацией из небольших
г
объемов метанола удается получить высокочистый крассин-аце-
ТаТ"в случае необходимости наработки больших количеств крассин-ацетата можно использовать следующий способ: собранные кораллы (колонии Plexaura porosa) высушивают, снимают корковую часть и измельчают до порошкообразного состояния. Полученный порошок экстрагируют петролейным эфиром до образования окрашенного раствора (удаление липидов и пигментов). Затем плотный материал высушивают и однократно экстрагируют метанолом (1:5). После упаривания экстракта в него добавляют воду и охлаждают. Выпавший осадок крассин-ацетата очищают повторной перекристаллизацией из водного метанола, получая кристаллический порошок с tnn.l41°C.
Крассин-ацетат может быть извлечен из измельченных кораллов с помощью смеси изопропилового спирта и воды; после удаления изопропанола водный остаток подвергается лио- фильной сушке и последующей очистке (Weinheimer, Matson, 1975). Выделение чистого крассин-ацетата из изопропильно- водной вытяжки в виде кристаллов проводится с применением противоточного распределения, хроматографической очистки, перекристаллизации, вакуумной сушки в зависимости от видовой принадлежности исходного сырья. Так, в случае экстрагирования порошковидно-измельченного коралла Pseudoplexaura porosa полученная изопропанол-водная вытяжка подвергается противоточному распределению между водой и хлористым метиленом; водная фаза затем — противоточному распределению между н-бутанолом и водой и т. д. Обогащенная БАВ хлористо-метиленовая фаза сушится сульфатом магния, выпаривается до остатка в виде вязкого сиропа, который растворяется в метаноле и дважды экстрагируется гексаном. Фракция гексана очищается хроматографически как наиболее насыщенная крассин-ацетатом. В случае использования в виде источника Pseudoplexaura flagellosa лиофилизируется с последующей экстракцией полученного лиофилизированного порошка хлороформом в течение 48 ч. Полученный хлороформный экстракт в дальнейшем упаривается до образования маслоподобного остатка, который подвергается (после растворения) противоточному распределению. В дальнейшем хлороформная вытяжка очищается с помощью хроматографических методов. Для выделения чистого крассин-ацетата из Pseudoplexaura wagena- arii используют экстракцию метанолом, противоточное распределение и колоночную хроматографию, получая во всех случаях кристаллический порошок БАВ.
Крассин-ацетат содержится в кораллах в значительных количествах, накапливаясь в ткани в виде цельных кристаллов. Считается, что минимальное содержание крассин-ацетата составляет не менее 1% от сухого веса коралла или свыше 4%
от веса коркового слоя (10% от суммы органических веществ корковой части) (Rice et al., 1970). Он синтезируется клетками кораллов в процессе пищеварения из углекислого газа или ацетата. Предполагают, что основной функцией этого БАВ в организме животного является предотвращение нападения различных хищников, учитывая токсичные свойства крассин-аце- тата (Ciereszko et al., 1960). Теоретически это предположение вполне логично исходя из значительной концентрации крассин- ацетата в кораллах. Проведенные в текущее десятилетие исследования подтверждают ядовитые свойства крассин-ацетата в отношении различных гидробионтов и лабораторных животных. Крассин-ацетат в эксперименте угнетает также подвижность trahymena pj riformis, а также их рост и развитие (Perkins, Ciereszko, 1973).
Однако наиболее интересным биологическим свойством крассин-ацетата является его способность ингибировать развитие некоторых новообразований, в частности лейкемию Р-388 (Weinheimer, Matson, 1975). Аналогичной антинеопластической активностью обладают и экстракты из тех видов кораллов, из которых выделяют крассин-ацетат. И хотя в опытах на мышах цитостатическое действие крассин-ацетата оценивается как весьма умеренное (эффективная доза, вызывающая 50%-ное ингибирование онконовообразований, составляет 50—130 мг/кг), его открытие послужило стимулом для поиска новых более активных антимитозных БАВ среди других видев кишечнополостных, особенно среди коралловых полипов (кораллов) (Weinheimer, Matson, 1975). И действительно, систематическое исследование коралловых полипов на наличие БАВ цитостатического действия привело к открытию новых видов гидробионтов, продуцирующих полициклические терпены с антинеопластической активностью. В частности, из коралла Sinularia flexibilis (Австралия) были изолированы терпены-цембранолиды — синула- рин, дигидросинуларин и синулариолид, привлекшие внимание исследователей противоопухолевой активностью (Weinheimer et al., 1977). Эти цембранолиды легко извлекаются разбавленным этанолом, их очистка осуществляется с использованием многоэтапного противоточного распределения и колоночной хроматографии. На первой важнейшей фазе очистки цембранолиды концентрируются в хлороформной фазе (система хлороформ—вода). В дальнейшем используют гексан, четыреххлористый углерод и хлороформ (10, 25, 35%) и водный метанол соответственно, БАВ концентрируются в четыреххлористом углероде и хлороформе. Окончательная очистка БАВ осуществляется хроматографически. Синуларин имеет следующие характеристики: tnjI. 150—152°С, [а]^° —127°; эмпирическая формула С20Н30О4. Дигидросинуларин плавится при температуре 110— 112°С и имеет эмпирическую формулу С20Н32О4. Синулариолид был изолирован несколько ранее из другого вида коралла Si-
nularia flexibilis (Tursch et al., 1974). Структурно и стереохимически синуларин весьма похож на крассин-ацетат — цембра- нолид, выделенный из различных видов кораллов Pseudople- каига' (Weinheimer, Matson, 1975). Все три цембранолида — ннуларин, дигидросинуларин и синулариолид — в эксперименте обнаруживают высокую цитостатическую активность: их эффективная доза, вызывающая 50% ингибирования опухолевых клеток in vitro (эпителиальная карцинсма человека и лейкемия Р-388), составляет 0,3 и 0,3; 16 и 1,1; 20 и 7,0 мкг/мл соответственно. В опытах на животных факже подтверждено выраженное цитостатическое действие этих цембранолидов, особенно синуларина (препарат NSC 285 706), в частности в отношении лейкемии Р-388 (Weinheimer et al., 1977).
Несомненный интерес представляют дитерпены, выделенные из других видов кораллов, обитающих в различных регионах Тихого океана. Все эти БАВ являются производными цембрана (цембрена), весьма близкими стереохимически и структурно крассин-ацетату и синуларину. Так, из коралла Nephthea sp. (Маршальские острова) выделены цембранолиды эпоксинефте- нол ацетат и нефтенол в количествах 0,75 и 0,05% соответственно (Schmitz et al., 1974); из коралла Lobophytum cristagall (Индонезия) — цембранолид лобофитолид (Tursch et al., 1974); из коралла Litophyton viridis — дитерпен 2-гидроксинефтенол (Tursch et al., 1975).
Из коралла Sarcophytum glaucum (Xashman et al., 1974) — целая семья структурно близких цембранолидог. имеющих следующие эмпирические формулы: СгоНгвОз; С20Н32О2; С20Н34О2; С20Н30О2. Общее содержание этих циклических дитерпенов, производных цембрана, достигает (в пересчете на сухое вещество животного) 4—5%. Цембранолиды извлекают обычно из высушенных при температуре не выше 60°С или свежесобранных кораллов с помощью различных экстрагентов (петролей- ный эфир, хлористый метилен, бензол, хлороформ, гексан и т. д.). После фильтрации вытяжек очистка и получение чистых терпеноидов производится противоточным распределением или колоночной хроматографией. Перекристаллизованные циклические дитерпены (цембранолиды) являются бесцветными порошками, характеризующиеся четкими индивидуальными температурами плавления. Сравнение их стереохимии и строения показывает большое сходство между отдельными представителями, а также с крассин-ацетатом и синуларином.
ПАЛИТОКСИН. Открытие среди различных кишечнополостных видов, продуцирующих БАВ, характеризующихся выраженной фармакологической активностью, в том числе и обладающих антинеопластическим действием, способствовало интенсификации изучения этого типа гидробионтов, особенно принадлежащих к классу коралловых полипов. Именно из различных видов этого класса и были выделены и крассин-ацетат, и синуларин. Систематические обследования полипов на наличие новых БАВ привели к изолированию исключительно интересного в химическом и фармакологическом отношении соединения, названного учеными палитоксином. Интерес к палитоксину! разумеется, хотя и был в определенной степени связан с историей его открытия и необычайной токсичностью, но обусловлен, главным образом, сложностью его строения и разнообразием вызываемых им фармакологических эффектов, из которых наиболее существенным является антинеопластическое действие, в частности в отношении леикемии Р-388 и асцитной карциномы Эрлиха (Quinn et al., 1974). Являясь одним из наиболее активных природных соединений, обнаруженных среди БАВ морских организмов, палитоксин, напоминая действия некоторых из них в фармакологическом отношении, совершенно химически непохож на изученные до сих пор яды гидробионтов. Прежде всего палитоксин характеризуется значительным молекулярные весом gt;— 3300. Молекулярный вес наиболее сильных из известных морских ядов, например тетродотоксина, сакси- токсина, сурагатоксина, гомарина, аплизиатоксина, составляет меньше 500. Палитоксин нельзя отнести ни к одной из известных структур: пептидам, гликозидам, стероидам и т. д. Его молекула не содержит субъединиц каких-либо моносахаридов или повторяющихся аминокислот (общее содержание азота не превышает 1,7%) (Karlsson, 1973).
Палитоксин выделяют непосредственно из свежесобранных или сохраняемых в органических растворителях животных. Перед извлечением свежесобранные полипы освобождают от минеральных и органических загрязнений (песок, ил и т. д.), помещают в герметически закрывающиеся емкости, заливают этанолом и оставляют при комнатной температуре на 24—28 ч. Затем образовавшийся темно-оранжевого цвета экстракт декантируют, а оставшиеся в емкостях полипы дважды мацери- руют 70%-ным водным этанолом, декантируя слабоокрашенный раствор. Мацерация продолжается каждый раз 2—3 ч. Обработанные таким образом полипы измельчаются в среде 70%-ного водного этанола. Жидкую фракцию отсасывают, а оставшуюся гомогенизированную массу дважды промывают 70%-ным водным этанолом. Этанольные вытяжки и промывные воды объединяют и выпаривают в вакууме при 50°С до полного удаления этанола. Полученный концентрат трижды экстрагируют бензолом и затем дважды 1-бутанолом, насыщенным водой. Объединенные 1-бутанольные экстракты промывают три раза водой, насыщенной 1-бутанолом. Объединяют водные фракции, под вакуумом при 50°С испаряют 1-бутанол и водный раствор пропускают через колонку с полиэтиленом (200 меш). После освобождения на колонке с полиэтиленом от примесей неорганических и органических соединений (промывка осуществляется водой) палитоксин элюируют смесью 50%-ного этанола и
воды. Последующая очистка палитоксина осуществляется с помощью колоночной хроматографии на сефадексе (Moore, Schener, 1971).
Качество очистки (чистота палитоксина) может быть определено биологически в опытах на мышах. Так, LD50 для мышей составляет 40 мкг/кг в случае использования первичного экстракта полипов до хроматографической очистки; после хроматографической очистки экстракта (ДЕАЕ-Sephadex) — 0 4 мкг/кг, после же дополнительной очистки с использованием CM-Sephadex — 0,15 мкг/кг (при внутривенном введении). Исследование полученного таким образом препарата показывает, что он представляет собой индивидуальное вещество. (Теоретически можно допустить, что препарат — это смесь очень близких в структурном отношении соединений или гомологов.) Палитоксин — белый аморфный, гигроскопичный порошок, не образующий кристаллов. Он не растворяется в хлороформе, эфире, ацетоне, весьма слабо растворяется в метаноле и этаноле, но хорошо растворяется в пиридине, диметилсульфоксиде, воде. Для палитоксина не установлена tnn., так как при нагревании до 300°С он, не плавясь, обугливается. Раствор палитоксина в воде оптически равен (~р26°±2). Палитоксин дает отрицательные реакции с нингидрином и реактивом Драгендор- фа (нет окрашивания). Методика хроматографирования на CM-Sephadex позволяет заключить, что его молекула содержит основные группы. После мягкого гидролиза палитоксина в среде 6 н. хлористоводородной кислоты в присутствии нингидрина и хроматографического разделения продуктов гидролиза удается получить слабовыраженную реакцию (фиолетовое окрашивание) . Низкая чувствительность к нингидрину предполагает отличие дающих нингидринную реакцию групп от обычных аминокислот. В то же время продукты гидролиза палитоксина чувствительны к реактиву Нееслера, что указывает на аммонийные группы. Водные растворы палитоксина подобны стероидным сапонинам: при взбалтывании образовывают пену. Исходя из данных ЯМР и элементорганического анализа для палитоксина предложена следующая эмпирическая формула: Ci45H264N4078 (Moore, Schener, 1971). Анализ выявил в молекуле палитоксина хромофорные группы, а-, ^-ненасыщенную амидо-карбонильную группировку и 4, 5 двойные связи.
После того как ученые обнаружили, что продуцентом ядовитого начала, названного палитоксином, является не «смертоносная водоросль» Lumu-make-o Нала, обитающая только в одном из прибрежных районов Гавайских островов, а полип Palythoa vestitus, они вскоре убедились в распространенности этого яда среди других видов этого рода полипов. В частности, было выделено такое же или аналогичное БАВ из Palythoa tuberculosa (Kimura et ah, 1972), одного из весьма распространенных видов кораллов. Впоследствии оказалось, что продукция ядовитого БАВ зависит от пола полипа, времени полового развития и сбора колоний этих животных. Опытным путем было доказано, что палитоксин не одинаково распространен и в тканях животного: наиболее ядовитыми оказались яйцеклетки до периода овуляции. Вообще БАВ в наибольшем количестве содержатся в половых органах животных. Причем самки считаются более ядовитыми (более активными продуцентами БАВ). Стерильные формы и самцы считаются относительно малотоксичными. Гермафродитные формы полипов занимают промежуточное положение (Kimura et al., 1972).
Учитывая наличие «цепей питания» у гидробионтов, можно предполагать значительное распространение палитоксина в Мировом океане. Дело в том, что обитатели коралловых рифов, например различные виды рыб, могут питаться полипами, в том числе и продуцентами палитоксина. В этом случае палитоксин может без изменения находиться в органах пищеварения рыбы- хищницы или, претерпев те или иные изменения, разноситься в разные ткани гидробионта. Сами рыбы могут служить жертвой нападения других организмов и т. д. И действительно, среди обитателей коралловых рифов обнаружено много видов ядовитых рыб, токсичность которых в значительной степени связана с сезонностью и размножением тех или иных токсичных объектов, которые служат источником питания для первых. В частности, в районе островов Рюкю обитает высокотоксичная рыба Alutera Scripta (спинорог). Токсическое вещество спинорога — алутерин — концентрируется исключительно в желудочно-кишечном тракте (Hashimoto et al., 1969). В содержимом кишечника найдены водоросли, минеральные вещества и значительное количество остатков полипа Palythoa tuberculosa. Полученный этанольной экстракцией внутренностей спинорога алутерин обнаружил поразительное сходство с токсином, выделенным из Palythoa tuberculosa. Таким образом, можно считать доказанной возможность диссеминации палитоксина среди по крайней мере хищных обитателей коралловых островов Тихого океана. Учитывая это, а также потенциальные возможности палитоксина как цитостатика, были подробно изучены токсикологические свойства этого БАВ. Оказалось, что палитоксин является подобно многим другим БАВ гидробионтов весьма сильным ядом, введение которого в организм лабораторных животных вызывает картину тяжелейшей интоксикации: падение артериального давления, спазм коронарных сосудов, нарушения дыхания и функций различных органов (Vick, Wiles, 1975). При различных путях введения токсичное действие палитоксина проявляется уже в диапазоне микрограммовых доз. Исключение составляет лишь внутрижелудочное и ректальное введение палитоксина. В этом случае токсичное действие проявляется в дозах, в сотни раз превышающих дозы палитоксина, используемые при других способах введения, что, очевидно, свя-
ЛЕТАЛЬНОЕ ДЕЙСТВИЕ ПАЛИТОКСИНА НА РАЗЛИЧНЫЕ
ВИДЫ ЖИВОТНЫХ ПРИ ВНУТРИВЕННОМ НАЗНАЧЕНИИ
(ПО VICK И WILES, 1975)

Число ОПЫТОВ	LDto, мкг/кг	Колебания в дозе
24	0,078	(0,060-0,090)
32	0,033	(0,026-0,041)
46	0,025	(0,024—0,026)
38	0,11	(0,07 -0,17)
50	0,089	(0,080—0,098)
96	0,45	(0,33 -0,62,)

зано с более медленной абсорбцией БАВ. Это имеет существенное значение в фармакотерапевтическом аспекте. Интересно, что резистентность к токсическому действию палитоксина может быть достигнута предварительным назначением субтоксических или сублетальных доз, а также предварительным введением гидрокортизона (Vick, Wiles, 1975). Сравнительная характеристика токсичного действия палитоксина при различных способах введения различным видам лабораторных животных представлена в табл. 29, 30.
Тем не менее, несмотря на токсичность палитоксина, ученые усилили исследования с целью раскрытия его химической природы, спектра цитостатического действия и биологической роли этого чудовищной силы яда, продуцируемого различными видами полипов. Принимая во внимание накопление палитоксина в половых клетках полипов, зависимость его активности (концентрации) от физиологических циклов воспроизводства и преимущественную сцепленность этого токсина с феноменом феминизма и двуполости (Kimura et al., 1972), можно предполагать участие палитоксина в дифференциации делящихся клеток и формировании пола. Видимо, это биологическое свойство
Таблица 30
СРАВНЕНИЕ ЛЕТАЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ ТОКСИНА НА КРЫС ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ПУТЯХ ВВЕДЕНИЯ (ПО WILES ET AL., 1974)

Способ назначения	LDI0, мкг/кг	Колебания в дозе
Внутренний	0,089	0,080-0,098
Внутримышечный	0,24	0,21 —0,28
Интратрахеальный	0,36	0,23 —0,55
Подкожный	0,40	0,29 —0,54
Интраперитонеальный	0,63	0,44 —0,91
Ректальный	gt;10,0	—
Внутрижелудочный	gt;40,0	—

палитоксина и лежит в основе его ингибирующего рост некоторых новообразований действия. В этом случае действующие на быстро пролиферирующие клетки дозы палитоксина в сотни раз меньше токсичных и летальных доз, что и является базисом для экспериментального изучения палитоксина в качестве ингибитора клеточного деления. БАВ — биологические регуляторы клеточной дифференциации у гидробионтов, очевидно, могут иметь различную химическую природу в зависимости, прежде всего, от видовой принадлежности организмов. Если принять во внимание реальность таковой возможности, то следует признать вполне вероятным наличие рядом с палитоксином близких к нему по строению или же, напротив, отличающихся от него с точки зрения структуры БАВ, участвующих в физиологических процессах дифференцировки клеток и пола организмов у различных видов кишечнополостных. Очевидно, что у близкородственных видов с большим вероятием процессы, сцепленные с диффсренцировкой клеток, могут регулироваться идентичными или близкими по структуре БАВ. Очевидно и то, что в этом случае следует считаться с возможностью существования гомологов палитоксина, несомненно могущих характеризоваться определенным различием фармакологических свойств. И действительно, изучая цитостатическое действие препаратов, полученных из различных видов (в ряде случаев 'весьма близких) полипов, обитающих в районе островов северо-западной части Тихого океана, ученые получили данные, подтверждающие эту мысль: так, например, палитоксин, выделенный из полипов Palythoa sp., обитающих в районе острова Таити, в равных дозах оказывает более токсичное действие на мышей и обладает большей ингибирующей рост асцитной карциномы активностью, чем па- литоксины, выделенные из Palythoa toxica и Palythoa mammilo- sa (Quinn et al., 1974).
Биологические регуляторы роста и дифференциации клеток кишечнополостных, если признать наличие таковой функции у БАВ типа палитоксина и тетродотоксина (подтверждением этому являются наблюдения за удивительной сцепленностью их с половой функцией и с формированием пола, например у полипов: самец — самка — гермафродит — стерильный тип), могут обладать, как показывают эксперименты, и большим различием фармакологических эффектов. Так, этанольному экстракту, полученному из полипа Palythoa psammophilia, свойственна высокая цитостатическая активность в отношении лейкемии Р-388 и он практически не угнетает рост клеток человеческой эпидермальной карциномы. Этанольные же экстракты, полученные из полипов Zoanthus pacificus и «Гавайских полипов», лишь в незначительной степени влияют на течение лейкемии Р-388. Quinn et al. (1974), изучавшие в течение ряда лет антинеопластическое действие различных препаратов палитоксина на лабораторных животных, показали, что уже в дозах
ДЕЙСТВИЕ ПАЛИТОКСИНА ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ ВВЕДЕНИЯ (НЕОПЛАСТИЧЕСКОГО ИНОКУЛЯТА И ПРЕПАРАТА)
(В МОДИФИКАЦИИ ПО QUINN ЕТ AL., 1974)

Доза, мкг/кг	Число	Число	Смерть от	Выживаемость за 30 дней, %
	ДОЗ	животных	интокси кации	выживших	без асцита
Инокулят (в/б) Палитоксин (в/б) 1,08-10-1	20	5		100	100
8,64-10-3	20	5	—	100	80
4,32-Ю-з	20	5	—	20	20
1,73-Ю-з	20	5	—	0	0
Инокулят (в/б) Палитоксин (п/к) 1,3-10-1	20	10		40	30
Инокулят (п/к) Палитоксин (в/б) 1,73-10-1	8	10	1	Средний вес опухоли на
Контроль		10		9-й день назначения палитоксина = 84 мг (от 39 до 119 мг) Средний вес опухоли на
Введение палитокси- на через 4 дня после инокуляции 3,46-10-1	20	8		9-день на контроле 262 до 82^ 75	значения и в = 446 мг (от ,мг) 75
1,73-10-1	—	—	—	28,6	14,3
Минимальные эффективные дозы 5,4-10-2	1	8		37,5	25
5,4-10-2	4(два ра-	8	—	62,5	62,5
3,37-10-1	за в день) 2	10	.2	100	100

5 нг/кг палитоксин вызывает четкое угнетение роста асцитной карциномы Эрлиха.
Экспериментальные данные о цитостатическом действии па- литоксина и этанольных экстрактов из различных полипов приведены в табл. 31—32. Исследовались вытяжки и активные фракции следующих видов полипов: Palythoa psainmophilia, Palythoa tuberculosa, Palythoa vestitus, Palythoa toxica, Zoanthus pacificus, Isaurus elongatus и еще два вида зоангид. Экстракты из полипов получали непосредственно перед определением ци- тостатического действия по упрощенной методике: животные замачивались 95%-ным этанолом при комнатной температуре,
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ЦИТОСТАТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ПАЛИТОКСИНОВ, ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ КОРАЛЛОВ, В ОТНОШЕНИИ КАРЦИНОМЫ ЭРЛИХА (ПО QUINN ЕТ AL, 1974)

Источник	Доза, мкг/кг	Число животных	Смерть от интоксикации	Выживаемость в течение 30 дней, %
				выживших	без асцита
	1,28	5	5
Palythoa	6,4-10-1	5	5	—	—
toxica	3,2-10-i	5	0	100	100
	1,6-10-1	5	0	80	60
	0,8-10-1	5	0	0	0
	1,28	5	5	—	—
	6,4-10-1	5	5	—	—
Palythoa	3,2-10-i	5	1	100	100
mammilosa	l,6-10-i	5	0	80	80
	0,8-10-i	5	0	0	0
	1,28	5	5	—	—
Palythoa	6,4-10-i	5	5	—	—
spp.	3,2-10-1	5	4	100	100
	0,8-10-1	5	0	40	40

повторяя мацерацию после декантации этанольного слоя. Затем этанол удаляли под уменьшенным давлением, оставшийся водный слой экстрагировали хлороформом и фильтровали (или центрифугировали). Остаток высушивали под вакуумом или лиофилизировали и использовали сухой материал как препарат палитоксина. Эту методику модифицировали в случае приготовления вытяжки из Palythoa psammophilia: после мацерации полипов в 95%-ном этаноле животных гомогенизировали в среде 28,5% спирта в течение 10 мин, смешивали гомогенизат с этанольным экстрактом, оставляя на 4 дня при комнатной температуре. Затем, сливая верхний слой, остаток центрифугировали (2000 оборот