БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПГ
В основе биологического тестирования ПГ, до сих пор являющегося широко распространенным методом их обнаружения и оценки, лежит необычайно высокая чувствительность гладкомышечной мускулатуры к действию их различных групп. О том,
насколько малы дозы ПГ, вызывающих ответную реакцию организма, свидетельствуют данные Horton (1972) и Karim (1976). Для воздействия на дно желудка крыс необходимо ПГЕ1 5 нг, ПГЕ2 2 нг, ПГЕго 5 нг, ПГА2 100 нг; на трахею кошки — ПГЕ1
При проведении биологического определения ПГ основное значение имеет тестирование in vivo.
ТЕСТИРОВАНИЕ НА ИЗОЛИРОВАННЫХ ОРГАНАХ. Для биологического определения ПГ широко применяются такие лабораторные животные, как морские свинки, кролики, кошки, крысы, белые мыши, хомяки, причем наиболее чувствительными к действию ПГ являются трахея кошек и морских свинок, дно желудка крыс и хомяков, тонкий кишечник морских свинок и кроликов, ободочная кишка крыс, прямая кишка цыплят, матка рожавших крыс, крольчих, морских свинок, хомяков и др. (Bergstrom et al., 1968). Указанные органы применяют не только с целью тестирования ПГ, но и при изучении их антагонистов и ингибиторов.
ДНО ЖЕЛУДКА. По данным Karim (1976), чувствительность дна желудка к контрактильному действию различных ПГ по сравнению с таковым ПГЕ2 составляет для крыс: Е,—0,3; Fi„—0,07; F2«—0,057; А,—0,011; А2—0,015; В„—0,025; В2—0,01; для хомяков: Et—1; Fi„—0,015; F2a—0,31; Ai—0,0026; A2—0,013; Bi—0,0003; B2—0,0036.
ТОНКИН КИШЕЧНИК. В. Г. Воробьев, Н. Г. Максимова (1974) изучали в лаборатории профессора А. Н. Кудрина влияние ПГЕ2 и nrF2a, полученных нами путем биосинтеза, на гладкую мускулатуру изолированного кишечника морской свинки. ПГЕ2 испытывали в виде раствора в 96%-ном этиловом спирте (5 мкг1мл), ПГЕ2а — в физрастворе (100 мкг/мл). Активность испытуемых образцов сравнивали с препаратом дино- прост F2„ (Upjohn Company), содержащим 250 мкг firF2a в виде трометаминовой соли в 1 мл раствора. Из верхнего отдела тонкого кишечника морских свинок изолировали отрезки длиной
ПГЕ2 проявлялось Сразу же после внесения раствора и было кратковременным (1—3 мин).
nrF2a в концентрации 5-10-11 г/мл кратковременно (1 — 2 мин) повышал тонус кишечной мускулатуры при сохранении спонтанной перистальтики. При последующем нанесении возрастающих концентраций (5-10—11 и 5-10~9 г/мл) увеличение контрактильного действия не наблюдали. Препарат динопрост F2a в тех же концентрациях оказывал аналогичное действие.
После предварительного воздействия каждого из испытанных образцов ПГ специфическое влияние адреналина и ацетил- холина (10-7—10~8 г1мл) на изолированную кишку сохранялось.
МАТКА — один из наиболее чувствительных и эффективно реагирующих на введение ПГ органов. С целью биологического тестирования ПГ чаще всего используют изолированную матку крольчих и крыс.
Г. С. Короза (1974) испытывала четыре фракции ПГ, выделенных нами из семенной жидкости баранов. Эксперименты проводились на изолированной матке рожавших крольчих: действие ПГ исследовали в концентрации МО-6 г/мл на одном и том же отрезке матки (общее количество наблюдений 22). Сравнительный анализ исследованных образцов показал, что все они обладали активностью, отчетливо усиливая периодическую самопроизвольную сократительную деятельность матки крольчих. Так, образец, представляющий собой смесь ПГЕ1 — (50%), ПГЕ2 (38,5%), ПГЕ2а (11,5%), усиливал периодические спонтанные сокращения матки и повышал ее тонус. Амплитуда сокращений под влиянием указанного образца увеличивалось в 5—6 раз. Под влиянием образцов, содержащих ПГ с нативным комплексом сопутствующих веществ (ПГЕ1 — 50%, ГПТ2г1—12%, сопутствующие вещества . - 38%; ПГЕ1 — 80%, nrF2a — 11 %, сопутствующие вещества — 9%; ПГЕ1 — 79,8%, nrF2a — 10,5%, сопутствующие вещества — 10%), увеличивалась амплитуда самопроизвольных сокращений в 2—3 раза, однако повышения тонуса матки при этом не наблюдали.
Действие ПГЕ2 и ПГР2а, полученных нами путем биосинтеза, на изолированную матку морской свинки изучал Н. 3. Жильцов с соавт. (1974). Через 10 с после введения в модифицированный раствор Рингера nrF2a в дозе 0,6 мкг/мл отмечали ритмичные энергичные сокращения, продолжавшиеся от 3 до
МЕЗЕНТЕРИЧЕСКИЕ СОСУДЫ. Manku et al. (1974) показали, что перфузированные мезентерические сосуды в опытах in vitro более чувствительны к действию ПГЕ2, чем все другие изолированные органы и ткани. Для проведения биологического тестирования верхний мезентерический сосудистый слой от
деляют после введения канюли в верхнюю мезентерическую артерию (при эфирном наркозе) и помещают в стеклянную тер- мостатируемую баню при 37°С. Переживающие сосуды перфу- зируют раствором Кребса при той же температуре. Действие пге2 на мезентерические сосуды проявляется в дозах 0,1—¦ 1 нг/мл в виде прессорного эффекта. Чувствительность сосудов к действию ПГЕ1 в 100 раз менее выражена, чем к действию ПГЕ2. nrF2a оказывает в тех же условиях незначительный эффект.
насколько малы дозы ПГ, вызывающих ответную реакцию организма, свидетельствуют данные Horton (1972) и Karim (1976). Для воздействия на дно желудка крыс необходимо ПГЕ1 5 нг, ПГЕ2 2 нг, ПГЕго 5 нг, ПГА2 100 нг; на трахею кошки — ПГЕ1
- нг, ПГЕ2 1 нг, ПГГ2а 50 нг; на тонкий кишечник морских свинок — ПГЕ1 2 нг, ПГЕ2 5 нг.
При проведении биологического определения ПГ основное значение имеет тестирование in vivo.
ТЕСТИРОВАНИЕ НА ИЗОЛИРОВАННЫХ ОРГАНАХ. Для биологического определения ПГ широко применяются такие лабораторные животные, как морские свинки, кролики, кошки, крысы, белые мыши, хомяки, причем наиболее чувствительными к действию ПГ являются трахея кошек и морских свинок, дно желудка крыс и хомяков, тонкий кишечник морских свинок и кроликов, ободочная кишка крыс, прямая кишка цыплят, матка рожавших крыс, крольчих, морских свинок, хомяков и др. (Bergstrom et al., 1968). Указанные органы применяют не только с целью тестирования ПГ, но и при изучении их антагонистов и ингибиторов.
ДНО ЖЕЛУДКА. По данным Karim (1976), чувствительность дна желудка к контрактильному действию различных ПГ по сравнению с таковым ПГЕ2 составляет для крыс: Е,—0,3; Fi„—0,07; F2«—0,057; А,—0,011; А2—0,015; В„—0,025; В2—0,01; для хомяков: Et—1; Fi„—0,015; F2a—0,31; Ai—0,0026; A2—0,013; Bi—0,0003; B2—0,0036.
ТОНКИН КИШЕЧНИК. В. Г. Воробьев, Н. Г. Максимова (1974) изучали в лаборатории профессора А. Н. Кудрина влияние ПГЕ2 и nrF2a, полученных нами путем биосинтеза, на гладкую мускулатуру изолированного кишечника морской свинки. ПГЕ2 испытывали в виде раствора в 96%-ном этиловом спирте (5 мкг1мл), ПГЕ2а — в физрастворе (100 мкг/мл). Активность испытуемых образцов сравнивали с препаратом дино- прост F2„ (Upjohn Company), содержащим 250 мкг firF2a в виде трометаминовой соли в 1 мл раствора. Из верхнего отдела тонкого кишечника морских свинок изолировали отрезки длиной
- см и помещали в аэрируемый раствор Тироде объемом 100 мл. Сократительную деятельность кишки регистрировали на ленте кимографа. Испытуемые образцы веществ, разбавленные раствором Тироде, добавляли в ванночку с отрезком кишки так, что конечная концентрация ПГ находилась в диапазоне 5-10_п— —5-10~9 г/мл. ПГЕ2 вызывал заметное повышение тонуса и усиление перистальтики кишки, причем характер действия ПГ зависел от ее исходного состояния. При наличии спонтанной перистальтики ПГЕ2 вызывал усиление ее при одновременном повышении тонуса. При отсутствии спонтанной перистальтики введение ПГЕ2 приводило только к повышению тонуса без появления перистальтических движений. Контрактильное действие
ПГЕ2 проявлялось Сразу же после внесения раствора и было кратковременным (1—3 мин).
nrF2a в концентрации 5-10-11 г/мл кратковременно (1 — 2 мин) повышал тонус кишечной мускулатуры при сохранении спонтанной перистальтики. При последующем нанесении возрастающих концентраций (5-10—11 и 5-10~9 г/мл) увеличение контрактильного действия не наблюдали. Препарат динопрост F2a в тех же концентрациях оказывал аналогичное действие.
После предварительного воздействия каждого из испытанных образцов ПГ специфическое влияние адреналина и ацетил- холина (10-7—10~8 г1мл) на изолированную кишку сохранялось.
МАТКА — один из наиболее чувствительных и эффективно реагирующих на введение ПГ органов. С целью биологического тестирования ПГ чаще всего используют изолированную матку крольчих и крыс.
Г. С. Короза (1974) испытывала четыре фракции ПГ, выделенных нами из семенной жидкости баранов. Эксперименты проводились на изолированной матке рожавших крольчих: действие ПГ исследовали в концентрации МО-6 г/мл на одном и том же отрезке матки (общее количество наблюдений 22). Сравнительный анализ исследованных образцов показал, что все они обладали активностью, отчетливо усиливая периодическую самопроизвольную сократительную деятельность матки крольчих. Так, образец, представляющий собой смесь ПГЕ1 — (50%), ПГЕ2 (38,5%), ПГЕ2а (11,5%), усиливал периодические спонтанные сокращения матки и повышал ее тонус. Амплитуда сокращений под влиянием указанного образца увеличивалось в 5—6 раз. Под влиянием образцов, содержащих ПГ с нативным комплексом сопутствующих веществ (ПГЕ1 — 50%, ГПТ2г1—12%, сопутствующие вещества . - 38%; ПГЕ1 — 80%, nrF2a — 11 %, сопутствующие вещества — 9%; ПГЕ1 — 79,8%, nrF2a — 10,5%, сопутствующие вещества — 10%), увеличивалась амплитуда самопроизвольных сокращений в 2—3 раза, однако повышения тонуса матки при этом не наблюдали.
Действие ПГЕ2 и ПГР2а, полученных нами путем биосинтеза, на изолированную матку морской свинки изучал Н. 3. Жильцов с соавт. (1974). Через 10 с после введения в модифицированный раствор Рингера nrF2a в дозе 0,6 мкг/мл отмечали ритмичные энергичные сокращения, продолжавшиеся от 3 до
- мин с паузой расслабления 40 с, ПГЕ2 в меньшей дозе (0,4 мкг/мл) вызывал немедленное сокращение рога матки, а в дальнейшем подобные же ритмичные движения.
МЕЗЕНТЕРИЧЕСКИЕ СОСУДЫ. Manku et al. (1974) показали, что перфузированные мезентерические сосуды в опытах in vitro более чувствительны к действию ПГЕ2, чем все другие изолированные органы и ткани. Для проведения биологического тестирования верхний мезентерический сосудистый слой от
деляют после введения канюли в верхнюю мезентерическую артерию (при эфирном наркозе) и помещают в стеклянную тер- мостатируемую баню при 37°С. Переживающие сосуды перфу- зируют раствором Кребса при той же температуре. Действие пге2 на мезентерические сосуды проявляется в дозах 0,1—¦ 1 нг/мл в виде прессорного эффекта. Чувствительность сосудов к действию ПГЕ1 в 100 раз менее выражена, чем к действию ПГЕ2. nrF2a оказывает в тех же условиях незначительный эффект.