ПРОСТАГЛАНДИНЫ Е И F

  Простагландины (ПГ) — группа соединений ненасыщенных жирных кислот с очень высокой биологической активностью. Сильно действуя на животных, ПГ могут играть роль возбудителей движения матки и яйцеводов самок при спаривании. Известно, какие трудности приходится преодолевать при разработке эффективной технологии искусственного осеменения овец глубокозамороженным семенем. В отличие от скотоводства, где этот метод широко применяется, в овцеводстве до сих пор не достигнута устойчивая и достаточно высокая результативность использования замороженного семени.
Исследования последних лет показали, что при глубоком
замораживании семени барана живчики сохраняют свою биологическую полноценность и при глубоком введении в шейку матки можно получить процент оплодотворения, приемлемый для практики.
Шейка матки овцы имеет сильно выраженную складчатость, в результате чего ее канал узок и извилист, и практически при искусственном оплодотворении нет возможности глубокого введения семени. При искусственном осеменении овец свежим семенем оплодотворяемость высокая, сохраненным семенем — низкая.
Известно, что в семени барана содержится значительное количество ПГ, в то время как в семени быка они отсутствуют.
Естественно было предположить, что ПГ вызывают глубокое сокращение гладкой мускулатуры шейки матки и канал ее при этом расширяется, что создает условия для быстрого проникновения живчиков к месту оплодотворения. В сохраненном семени, вероятно, ПГ разрушены, что и приводит к резкому снижению результативности.
Нами была поставлена задача изучить динамику содержания ПГ в семени при технологических процессах глубокого замораживания в сравнении со свежим семенем, динамику отдельных видов ПГ, а также выяснить в производственных опытах влияние ПГ на эффективность искусственного осеменения овец глубокозамороженным семенем.
Семя получали от баранов кавказской породы, принадлежащих Центральной станции искусственного осеменения сельскохозяйственных животных ВИЖа.
После предварительной оценки семени на подвижность и концентрацию его разбавляли лактозной средой (на 100 мл воды 12 г лактозы, 5 мл глицерина и 20 мл желтка) или синтетическими средами № 3 (на 100 мл воды сахарозы — 12 г, аминокапроновой кислоты—100 мг, ЭДТУК — 24,8 мг, аденози- да — 50 мг, динатрийглицерофосфата — 200 мг, глицерина — 7,48 г, желтка — 20 мл) и № 2 (на 100 мл воды лактозы — 5,2 г., сахарозы — 5,6 г, ЭДТАЦаСа— 400 мг, креатина — 520 мг, глицерина — 5 мл, желтка — 20 мл).
Разбавленное семя охлаждали замедленным способом в холодильнике в течение 4 ч, т. е. подвергали так называемой «эквилибрации». Сразу же после охлаждения семя быстро замораживали на сухом льду в форме гранул по методу Йагазе и Нива (1964). Семя, которое не эквилибрировали, замораживали таким же методом. Гранулы переносили в сосуд с жидким азотом для хранения.
В опыте использовали ПГ, полученные экстракцией и биосинтезом. Качественный состав ПГ определяли методом тонкослойной хроматографии в закрепленном слое силикагеля G и методом газожидкостной хроматографии.
Активность различных ПГ испытывали на рогах матки сви-
нок и шейках матки крольчих. Сокращение рогов матки записывали с помощью кимографа. Раствор Рингера-Локка готовили по следующей прописи: на 10 л воды: NaCl — 90 г, КС1 — 2 г, СаС12 — 1 г, NaHC03 — 2 г, глюкозы — 10 г.
Опыты по осеменению овцематок глубокозамороженным семенем проводили в совхозах «Невинномысский» и «Беломечет- ский» Ставропольского края в течение трех лет (1973—1975 гг.). В 1973 г. использовали только ПГБгх. В оттаянное семя добавляли ПГ из расчета 50 мкг на овцу и выполняли глубокоцервикальное осеменение, применяя светопроводный расширитель.
В 1974,—1975 гг. испытывали при глубоком замораживании семени новые препараты ПГ, выделенные из семени барана (комплекс nrF и ПГЕ), и наметили пути стабилизации ПГ в семени при глубоком замораживании: использовали для оттаивания семени стабилизирующую систему, состоящую из арахи- доновой кислоты и микросомального фермента; применяли технологию замораживания семени в токе водорода; вносили в синтетическую среду дополнительные ПГ и с целью их стабилизации семя подвергли при замораживании гидрогенизации.
Технологическая обработка семени в процессе глубокого замораживания оказывает существенное влияние на содержание ПГ (табл. 23).
Анализ полученных данных свидетельствует о том, что в глубокозамороженном семени, разбавленном средой № 3 с глицерином без эквилибрации, сохраняется 20 мкг/мл ПГЕ и ПГЕ. В семени же, замороженном с эквилибрацией, сохраняется 1,3 мкг/мл ПГ группы F. Следовательно, процесс эквилибрации семени с глицериновой средой действует более губительно, чем само замораживание.
В семени, подверженном гидрогенизации, в процессе замораживания ПГЕ сохраняется на 44%, ПГР2х— на 66,6%, тогда как в семени, разбавленном глюкозоцитратной средой с желтком без глицерина и сохраненном в течение трех суток при 0°С, — 0,3 и 4,0 мкг/мл соответственно.
Следовательно, низкая оплодотворяемость овцематок семенем, сохраненном при 0°С более чем 24 ч, не случайна.

ПГ

Семя

Глубокоза мороженное семя
свежее подверженное эквилибрации без замораживания с эквилибрацией без эквилибрации с эквилибрацией, Н2
Е 50 0,3 _ и 22
12 4,0 1,3 9 8
Всего 62 4,3 1,3 20 30

Таблица 23
СОДЕРЖАНИЕ ПГ В СВЕЖЕВЗЯТОМ СЕМЕНИ БАРАНА И ПОСЛЕ ГЛУБОКОГО ЗАМОРАЖИВАНИЯ, МКГ/МЛ
ПГ стимулируют сокращение гладкой мускулатуры. Благодаря этому свойству они могут играть важную роль в продвижении семени по очень узкому и извилистому каналу шейки матки овцы и тем самым способствовать нормальному оплодотворению. Установлено, что после замораживания и оттаивания семени в лактозной среде отдельные ПГ (например, ПГЕ) разрушаются. Возможно, что одна из главных причин низкой опло- дотворяемости овцематок глу- бокозамороженным семенем состоит именно в разрушении ПГ при таком способе обработки семени.
Изучение действия ПГ на мускулатуру шейки матки было проверено на крольчихах. Диаметр шейки матки замеряли в норме и после нанесения ПГ, полученных методом экстракции и биосинтеза (В. Г. Гандель с соавт., 1976) (табл. 24).
Испытывали также действие ПГ, окситоцина, свежего семени барана, а также семени, подверженного различной технологической обработке, на мускулатуру матки морской свинки, сокращения которой записывали на кимографе. При действии окситоцина в дозе 1,25 мл ЕД наблюдали ритмичное сокращение и расслабление рога матки через 5—10 с; ПГЕ2 (30 мкг) —
Таблица 25
РЕЗУЛЬТАТЫ ЯГНЕНИЯ ОВЦЕМАТОК, ОСЕМЕНЕННЫХ ГЛУБОКОЗАМОРОЖЕННЫМ СЕМЕНЕМ В 19173—1975 ГГ.

Вариант

Осеменено овец, шт.

Условно суягные по числу повторивших охоту, %

Объяг
нилось,
шт,

Ягнеиие, %

Семя в гранулах*+nrF2ct

47


21

44,0 ±6,5

Семя+ПГЕ и ПГЕ из семени барана

86

-

44

51,5 ±5,3

Семя+стабилизирующая система

210


39

19,0 ±2,7

Семя+Нг

43

—.

21

48,3 ±7,6

Семя+Нг+ПГЕ+ПГЕ

310

82



Семя+Нг

255

77



Семя, сохраненное при 0°С 24 ч (контроль)

175

72



Семя, замороженное в лактозной среде (контроль)

27


6

22,2 ±8,0

Свежевзятое семя (контроль)

68

85



* Объединенная группа результатов за 1973—1974 гг.
моментальное резкое сокращение рога матки в течение 2— 4 мин (расслабляется матка за 40 с); ПГРга (50 мкг) —через 10 с в течение 6 мин (расслабление также продолжается 40 с). Аналогичные результаты были получены при действии на рог матки свежевзятого семени барана (0,05 мл): через 30 с после введения семени начинались резкие сокращения, которые продолжались 9 мин, после чего отмечали расслабление.
Однако при воздействии на матку семенем (0,2 мл) после эквилибрации и глубокого замораживания не наблюдали резких сокращений. По-видимому, такая технологическая обработка семени барана действует губительно на ПГ.
Добавление к оттаянному семени ПГГги увеличивает количество объягнившихся маток почти в 2 раза в сравнении с контролем (табл. 25). Введение комплекса ПГЕ+PirF, выделенного из семени барана, также положительно влияет на суягность овцематок.
Интересно отметить, что гидрогенизация семени в процессе замораживания повышает не только процент сохранения ПГ, но и суягность овец.
Попытка увеличить содержание ПГ в семени с помощью системы, обеспечивающей биосинтез их, не дала положительных результатов. Вероятно, система, состоящая из предшественника ПГ и микросомального фермента, не может синтетизнро- вать за короткое время достаточное количество ПГ.

Источник: Под ред. О. Г. САКАНДЕЛИДЗЕ, «БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ГИДРОБИОНТОВ - НОВЫЙ ИСТОЧНИК ЛЕКАРСТВ» 1979

А так же в разделе «  ПРОСТАГЛАНДИНЫ Е И F »