Наряду с общеизвестными методами лабораторной диагностики ВУИ (ПЦР и ИФА) применяются и другие методы:
1) гистологическое исследование плаценты, пуповины и плодных оболочек, позволяющие проводить раннюю диагностику различных инфекционно-воспалительных процессов;
2) проведение в неонатальном периоде бактерио- и вирусологического исследования околоплодных вод, пуповинной крови и плаценты;
3) изучение генетических основ ВУИ, изучение роли полиморфизма генов системы врожденного и адаптивного иммунного ответа в развитии ВУИ;
4) на основании методов амплификации нуклеиновых кислот созданы разнообразные альтернативные технологии - ЛЦР (LCR-ligase chain reaction), NASBA (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification), TMA (Transcription- Mediated Amplification), SDA (Strand Displasment Amplification) и другие;
6) определением показателей клеточного и гуморального иммунитета;
8) выявление острофазных белков - фибриногена и СРБ, являющихся маркерами воспаления и повреждения;
9) определение в сыворотке крови уровня провоспалительных цитокинов (фактор некроза, опухолей-а, интерферон-y, неоптерин) и биохимических маркеров повреждения клеток мозга (нейронспецифическая енолаза);
7) обнаружение хламидий в мазках периферической крови и в лейкоконцентрате венозной крови. Для экспресс-диагностики хламидиоза используются иммунохроматографические методы, основанные на образовании комплекса антиген-антитело-цветной латекс;
10) определение титра антител к липополисахаридам хламидий (IgG к LPS), оценка функциональной аффинности антител к нейтрализующим антигенам главного белка внешней мембраны (IgG к МОМР), измерение концентрации циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) с низкой молекулярной массой;
5) выявление в мазках или парафиновых срезах характерных внутриядерных включений (тельца Cawdry 1 типа), что считается международно признанным доказательством герпетической этиологии процесса любой локализации, достаточным для назначения специфической противовирусной терапии;
11) при внутриутробном герпесвирусном инфицировании отмечаются изменения клеточного и гуморального звеньев иммунитета: увеличение циркулирующего пула лимфоцитов с возрастанием абсолютного содержания всех основных субпопуляций лимфоцитов, снижение относительной доли Т-лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+), уровня а-интерферона и нарастание относительного количества клеток с маркерами активации CD71, CD95 и уровня y-интерферона;
12) определения в крови матери или в пуповинной крови плода уровня иммуноглобулинов (повышение концентрации IgM в пуповинной крови более 200-300 мг/л свидетельствует об антигенной стимуляции плода или о его внутриутробном инфицировании);
13) исследование биохимических показателей крови (содержание малонового диальдегида и общая антиоксидантная активность) может использоваться для оценки состояния недоношенных новорожденных с внутриутробной инфекцией при рождении и в динамике;
14) использование ряда интегративных показателей крови,
отражающих интенсивность развития системного воспалительного ответа, при формировании инфекционного процесса в организме беременной. Метаболические проявления синдрома системного воспалительного ответа или реакции острой фазы в настоящее время четко определены. К белкам острой фазы относятся: С-реактивный белок, гаптоглобин, церулоплазмин, плазминоген, а-1-антитрипсин, антитромбин III, фракция С3 комплемента и другие. Рост концентрации указанных белков в крови является маркером острого воспалительного процесса или обострения хронического воспаления.
Характерной особенностью воспаления инфекционной или
инфекционно-аллергической природы является активазация В- или
Т-клеточного звена иммунитета. В связи с этим очевидна целесообразность определения в крови матери или в пуповинной крови плода уровня иммуноглобулинов. Определено, что повышение концентрации IgM в пуповинной крови более 200-300 мг/л свидетельствует об антигенной стимуляции плода или о его внутритробном инфицировнии.
Установлены следующие особенности иммунного статуса
новорожденных из групп высокого инфекционного риска:
1) смещение иммунного процесса в сторону пролиферации и нарушения дифференцировки клеток (лимфопения, увеличение числа ранних предшественников Т- и В-лимфоцитов, уменьшение числа зрелых Т- и В-лимфоцитов в периферическом кровотоке);
2) активация Т-лимфоцитов с недостаточностью Th-1 иммунного ответа (уменьшение числа Т-хелперов, клеток-продуцентов ИЛ-2 при увеличении количества клеток, экспрессирующих рецепторы к ИЛ-2);
3) несостоятельность гуморального звена иммунитета в виде снижения уровня IgG и повышения уровней IgA и IgM;
4) снижение цитотоксического потенциала клеток (уменьшение количества цитотоксических Т-лимфоцитов и их активированной фракции);
5) активация доиммунных механизмов противоинфекционной защиты- повышение содержания естественных киллеров и способности клеток к продукции а-интерферона;
6) снижение способности клеток к продукции у-ИФН, что подтверждает недостаточность Th-1 иммунного ответа;
7) увеличение числа незрелых форм нейтрофилов и снижение их фагоцитирующей способности было обусловлено как общей незрелостью иммунной системы, так и недостаточной выработкой у-ИФН.
Методы терапии детей с ВУИ должны быть комплексными, дифференцированными и проводиться с использованием как специфической, так и неспецифической терапии.
Дальнейшие перспективы раннего выявления ВУИ лежат в плоскости изучения онтогенеза иммунной системы человека, исследования функциональных характеристик иммунитета в норме и при специфическом воздействии. При инфекционном процессе в репродуктивном тракте беременных женщин происходит активация клеток иммунной системы, что приводит к индукции клеточного иммунного ответа, следствием чего является продукция провоспалительных цитокинов, выступающих посредниками в развитии воспалительных и иммунных реакций в системе мать-плацента-плод. Обнаружение в периферической крови высокой концентрации цитокинов всегда свидетельствует о нарушении принципа локальности функционирования цитокиновой системы, что может наблюдаться при интенсивных и длительно текущих воспалительных, аутоиммунных процессах, сепсисе, сопровождающихся генерализованной активацией клеток иммунной системы. Определение концентрации отдельных цитокинов не может в полной мере отразить состояние клеточного иммунитета. Оптимальным является измерение уровня неоптерина, поскольку его концентрация в крови отражает совместное действие различных цитокинов на популяцию моноцитов/макрофагов, стимулированных у-интерфероном. Неоптерин является интегральным маркером индукции клеточного иммунитета, поэтому его определение особенно важно при инфекционных заболеваниях, хронических
воспалительных процессах, сопровождающихся активацией иммунной системы.
На основании изучения уровня цитокинов, а также содержания неоптерина в сыворотке крови и слизи цервикального канала у беременных женщин с маркерами урогенитальных инфекций (УГИ) определяли их диагностическую значимость при раннем выявлении и прогнозировании развития ВУИ. Полученные результаты свидетельствуют о том, что любое инфекционное заболевание независимо от характера возбудителя
сопровождается активацией иммунной системы, что приводит к повышению содержания цитокинов и неоптерина в биологических жидкостях. Наиболее высокий уровень неоптерина в крови и слизи цервикального канала отмечен у беременных с УГИ вирусной этиологии. Проведенные исследования подтверждают возможность использования иммунологических показателей беременных женщин в прогнозировании ВУИ плода, что позволит снизить перинатальную заболеваемость и смертность за счет своевременного формирования групп риска и выбора лечебной тактики.
Выявление поражения нервной системы у новорожденных с ВУИ нередко бывает затруднено вследствие не всегда четкой и ясной неврологической симптоматики. В настоящее время перспективным для диагностики и прогнозирования течения ВУИ представляется определение
уровня провоспалительных цитокинов. Их содержание в крови дает дополнительную информацию о патологических процессах в головном мозге.
Приведенные выше данные доказывают актуальность усовершенствования лабораторной диагностики ВУИ, которая необходима для надежного установления диагноза, определения формы и стадии болезни, своевременного начала лечения и мониторинга терапии.
Принимая во внимание широкое распространение и серьезность прогноза, можно сделать вывод, что разработка современных, недорогих, высокочувствительных и специфичных методов ранней лабораторной диагностики, эффективного лечения и действенной профилактики врожденных инфекций является одной из первоочередных задач современной педиатрии и имеет огромное значение для медицинской науки и практического здравоохранения.