Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологические характеристики


(???) Контрольные вопросы по теме
1. Нормальная микрофлора воздуха внешней среды: резидентная, транзиторная.
2. Характеристика микрофлоры воздуха закрытых помещений, источники ее формирования
3. Воздух — путь передачи возбудителей воздушно-капельных инфекций.
4. Источники транзиторной микрофлоры воздуха помещений, в том числе воздуха производственных помещений аптек.
5. Санитарно-показательные микроорганизмы воздуха закрытых помещений — нормативы и их обоснование.
6. Определение степени микробной обсемененности воздуха закрытых помещений, производственных помещений аптек — общее микробное число (ОМЧ).
7. Нормативы ОМЧ для воздуха особо чистых помещений (асептические блоки, помещения фармацевтической промышленности для приготовления стерильных препаратов и др.).
8. Методы определения ОМЧ воздуха — седиментационный, аспирационный. Техника проведения, аппаратура. Достоинства и недостатки каждого метода.
9. Принципы санации воздушной среды асептического блока и других помещений аптек: химические, физические, механические.
10. Ультрафиолетовое облучение воздуха: аппаратура, механизм действия, режим облучения.
11. Мероприятия, проводимые для предупреждения попадания микроорганизмов от человека в воздух производственных помещений аптек: ассистентская, асептический блок и др.
12. Последствия возможной контаминации лекарственных форм микроорганизмами: сапрофитами, условно-патогенными, патогенными.
13. Методы выявления в воздухе производственных помещений аптек представителей энтеробактерий, синегнойной палочки, стафилококков и грибов — плесневых, дрожжеподобных.
(!!!) Задания для практической работы
1. Проведение посевов воздуха помещений кафедры микробиологии методом Коха (седиментационный метод) и с использованием аппарата Кротова (аспирационный метод).
2. Определение ОМЧ воздуха и наличие патогенной микрофлоры в помещениях аптек по ситуационным картам-заданиям:
а) торговый зал;
б) ассистентская;
в) асептическая комната;
г) дистилляционная;
д) стерилизационная;
е) моечная.
Определение ОМЧ, наличие и количество патогенной микрофлоры, сравнение с нормативами, анализ полученных результатов. Составление заключения и рекомендаций.
3. Работа с Приказом № 309 по санитарному режиму аптек. Разбор всех положений, касающихся воздуха аптечных помещений.
4. Оформление и защита протоколов по теме занятия.
Воздух не является подходящей средой для длительного пребывания микроорганизмов, особенно патогенных. Отсутствие влаги, питательных веществ, действие ультрафиолетовых лучей и т. д. ведут к гибели большинства микробов.
Нормальная микрофлора воздуха складывается из резидентной и транзиторной. Резидентная микрофлора — сапрофитные бактерии с липохромным пигментом (сарцины, микрококки, сапрофитный стафилококк и др.); бациллы (сенная палочка, микоидные бациллы и др.); плесневые и дрожжевые, дрожжеподобные грибы. Все эти микроорганизмы имеют структуры или механизмы, защищающие их от губительного действия ультрафиолетовых лучей,: отсутствия влаги, питательных веществ.
Транзиторная микрофлора — патогенные и условно-патогенные бактерии, вирусы. Они являются возбудителями воздушно-капельной инфекции, раневой инфекции, гнойно-воспалительных заболеваний и др. К ним относятся золотистый и эпидермальный стафилококк, дифтерийная, туберкулезная, синегнойная палочки, энтеробактерий (клебсиелла, протей, серрация и др.); вирусы кори, гриппа и др..
В неочищенном воздухе во взвешенном состоянии находятся инородные включения различных размеров:
0,03-0,30 мкм — вирусы, бактерии;
10,0-100,0 мкм — частицы пыли;
30,0-200 мкм — волокна, волосы.
Бактерии находятся в воздухе в виде аэрозоля, который по размерам частиц делится на фазы:
— крупнокапельная, быстро оседающая фаза — капли диаметром более 100 мкм;
— мелкоядерная фаза — капли и частицы диаметром менее 10 мкм. Они длительно находятся во взвешенном состоянии и часть из них испаряется раньше, чем оседает («бактериальная пыль»)
Человек постоянно выделяет аэрозольные частицы, число которых колеблется от 1 тысячи до 30 миллионов в минуту, в зависимости от характера производимых им движений, состояния верхних дыхательных путей, интенсивности разговора. Капельки слюны, слизи при чихании, разговоре, кашле вместе с микробами попадают в воздух и с током воздуха могут разноситься далеко от источника. Бактерии могут оседать на пылевые частицы и «путешествовать» вместе с ними. Мелкодисперсные аэрозольные частицы практически не оседают и постоянно находятся во взвешенном состоянии. До 90% микробов, попадающих в воздух, погибают в течение 1 часа.
Воздух производственных помещений аптек — один из важных источников микробного обсеменения лекарственных препаратов. Одновременно воздух является каналом передачи микрофлоры из одного помещения в другое.
Поэтому для промышленного производства лекарственных препаратов разработаны регламентирующие документы по требованиям к микробной чистоте воздуха в помещениях для производства лекарственных форм в асептических условиях. Для помещений установлено 4 класса чистоы в зависимости от допустимого уровня загрязненности воздушной среды механическими частицами и микроорганизмами. Для помещений 1-2-го класса чистоты максимально допустимое число микробов колеблется от 0 до 50 в 1 м3 воздуха.
Степень микробной обсемененности воздуха помещений зависит от кубатуры, приходящейся на 1 человека.
Т а б л и ц а 1
Количество микробов в 1 м3 воздуха в зависимости от числа людей в помещении
Площадь на одного человека, м2 Число микробов в 1 м3
2,5-3,6 8680
4,0-4,5 6262
5,5-6,6 3906
8,0-9,6 3658
10-18,0 1860

Поэтому поддержание микробной чистоты воздуха является действенной мерой профилактики заноса микробов в лекарственные формы. Для контроля степени микробной обсемененности воздуха в аптеках и на предприятиях фармацевтической промышленности регулярно проводится определение следующих микробных показателей:
— общее микробное число воздуха (ОМЧ) — количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха;
— наличие в воздухе золотистого стафилококка, грибов (плесневых, дрожжевых, дрожжеподобных), синегнойной палочки, энтеробактерий.
Методы изучения микрофлоры воздуха
Используются седиментационный и аспирационный методы.
Седиментационный метод Коха прост, не требует специальной аппаратуры. Суть метода: чашка с питательной средой ставится на рабочем столе, открывается на 10 мин, закрывается и ставится в термостат, где выдерживается двое суток при температуре 37 °С, а затем двое суток при комнатной температуре.. После этого проводится подсчет выросших колоний по формуле Омелянского.
Для выявления грибов в воздухе посев проводится на среду Сабуро и чашка выдерживается при t 22-25 °С до 5 суток. Для выявления патогенных бактерий посевы проводят на дифференциально-диагностические среды: для золотистого стафилококка — на желточно-солевой агар, для энтеробактерий — на среду Эндо с добавлением генцианвиолетта (для торможения роста сапрофитов), для псевдомонад — на среду № 9 (ГФ XI, т. 2). Чашки выдерживают в открытом виде 1 час, после чего ставят в термостат для культивирования при t 37 °С на двое суток с последующим выдерживанием при комнатной температуре в течение 2 суток.
Расчет по модифицированной формуле Омелянского ведется на 1 м2 поверхности.
X = n.104 / p.r2.t (дробь)
где X — ОМЧ воздуха обследуемого помещения (КОЕ); п — количество колоний на чашке (КОЕ); t — время экспозиции чашки (мин); p.r2 — площадь чашки Петри (см2); 104 — пересчет м2 в см2.
Формула Омелянского, даже модифицированная, имеет ряд существенных недостатков: а) нельзя определить точный объем воздуха, из которого микробы оседают на чашку; б) мелкодисперсная фаза аэрозоля (а с ним и микробы) практически не оседает и токами воздуха постоянно поддерживается во взвешенном состоянии.
Результаты, получаемые с помощью этого метода, позволяют сравнить, сопоставить степень микробной обсемененности разных помещений и ориентироваться при разработке мероприятий по очищению воздушной среды.
Существует другой метод расчета ОМЧ воздуха при использовании посева во методу Коха, без формулы Омелянского:
Диаметр чашки, см Множитель
8
9
10
11
12
100
80
60
50
45

Нормативы оценки санитарного состояния воздуха аптечных помещений
Помещения аптеки Количество микробов, оседающих на 1 м2 поверхности в минуту
хорошо удовлетворительно плохо
Зал обслуживания до 150 150-175 более 175
Ассистентская, фасовочная, дефекторная, материальная до 100 100-125 более 125
Асептическая, кубовая-сте-рилизационная до 50 50-75 более 75
Моечная до 125 125-150 более 150

Аспирационный метод изучения микрофлоры воздуха. В этом методе используется принцип ударной струи воздуха, получаемый с помощью аппарата Кротова. Достоинства этого метода:
— точно учитывается объем воздуха, пропускаемого через чашку с питательной средой, установленную в аппарате;
— принцип ударной струи способствует фиксации в питатель ной среде всех взвешенных частиц аэрозоля.
Таким образом, удается фиксировать на поверхности плотной питательной среды максимальное количество микроорганизмов, обитающих в воздухе. Используя различные виды элективных и дифференциально-диагностических питательных сред, можно выявлять в воздухе все основные группы патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.
Нормативы оценки санитарного состояния воздуха аптечных помещений при использовании аспирационного метода
Помещения Время Количество микроорганизмов в единице объема
ОМЧ
(в 1 м3)
St. aureus Грибы
в 250 л — 0 в 250 л — 0
в 250 л — 0 в 250 л — 0
Асептический блок, стерилизационная (чистая половина) до работы до 500 в 250 л — 0 в 250 л — 0
после работы до 1000 в 250 л — 0 в 250 л — 0
Ассистентская фасовочная, материальная до работы до 750 в 250 л — 0 в 250 л — 0
после работы до 1000 в 250 л — 0 в 250 л — 0
Моечная во время работы до 1000 в 250 л — 0
до 12 в м3
Зал обслуживания во время работы до 1500 до 100 в 1 м3 до 20 в 1 м3

Мероприятия, направленные на уменьшение микробной обсемененности воздуха производственных помещений аптеки
1. Оконные фрамуги или форточки, используемые для проветривания помещений, защищаются съемными металлическими или пластмассовыми сетками с размерами ячейки не более 2x2 мм.
2. Поверхности стен и потолков производственных помещений должны быть гладкими, без нарушения целостности покрытия, допускающими влажную уборку с применением дезсредств (1% раствор хлорамина Б, 0,75% раствор хлорамина Б + 0,5% моющего средства, 1% раствор гипохлорита натрия, 3% раствор перекиси водорода + 0,5% моющего средства).
3. В производственных помещениях не допускается вешать занавески, расстилать ковры, разводить цветы. Информационные стенды и таблицы, необходимые для работы в производственных помещениях, должны изготовляться из материалов, допускающих влажную уборку и дезинфекцию.
4. Помещения асептического блока должны размещаться в изолированном отсеке и исключать перекрещивания «чистых» и «грязных» потоков посуды и вспомогательного материала. Асептический блок должен иметь отдельный вход или отделяться от других помещений производства шлюзами.
5. Перед входом в асептический блок должны лежать коврики из резины или пористого материала, смоченные дезинфицирующими средствами (0,75% раствор хлорамина Б + 0,5% моющего средства, 3% раствор перекиси водорода + 0,5% моющего средства).
6. Для исключения поступления воздуха из коридоров и производственных помещений в асептический блок в последнем необходимо предусмотреть приточно-вытяжную вентиляцию, при которой движение воздушных потоков должно быть направлено из асептического блока в прилегающие к нему помещения, с преобладанием притока воздуха над вытяжкой.
7. Рекомендуется с помощью специального оборудования создание горизонтальных или вертикальных ламинарных потоков чистого воздуха во всем помещении или в отдельных локальных зонах для защиты наиболее ответственных участков или операций (чистые камеры). Чистые камеры или столы с ламинарным по током должны иметь рабочие поверхности и колпак из гладкого и прочного материала. Контроль стерильности воздуха проводится не реже 1 раза в месяц.
8. Для дезинфекции воздуха и различных поверхностей в асептических помещениях устанавливают экранированные и неэкранированные бактерицидные лампы (стационарные и передвижные облучатели) мощностью не менее 2,0-2,5 Вт на 1 м3 объема помещения.
9. Перед началом работы необходимо проводить влажную уборку помещений (полов и оборудования) с применением дезсредств. Сухая уборка помещений запрещается, т. к. с пылью поднимаются в воздух микроорганизмы. Например, в помещении до уборки ОМЧ = 1500 микробов в 1 м3; в этом же помещении во время сухой уборки ОМЧ = 4500 микробов в 1 м3.
10. Генеральная уборка производственных помещений и торговых залов должна проводиться не реже 1 раза в неделю. Моют стены, двери, оборудование, полы. Потолки очищают от пыли влажными тряпками не реже 1 раза в месяц. Оконные стекла, рамы и пространство между ними моют горячей водой с мылом или другими моющими средствами не реже 1 раза в месяц.
11. Оборудование производственных помещений и торговых залов подвергается ежедневной уборке, шкафы для хранения лекарственных средств в материальных комнатах убирают по мере необходимости, но не реже 1 раза в неделю.
12. Уборку помещений асептического блока (полов и оборудования) проводят не реже 1 раза в смену в конце работы с использованием дезинфицирующих средств (1% раствор хлорамина Б, 0,75% раствор хлорамина Б + 0,5% моющего средства, 1% ра створ гипохлорита натрия, 3% раствор перекиси водорода + 0,5% моющего средства). Генеральную уборку проводят не реже 1 раза в месяц.
13. При заводском производстве лекарственных препаратов «чистые» помещения должны иметь многоступенчатую систему приточно-вытяжной вентиляции, которая создает кратность воздухообмена до 20 в час; причем непосредственно в помещения воздух должен поступать через фильтры тонкой очистки. Между помещениями различных классов чистоты должна поддерживаться постоянная разность давления в 3-5 мм водяного столба. При этом в помещениях более высоких классов чистоты давление должно быть выше.
Наиболее ответственные технологические операции должны быть защищены установками ламинарного потока стерильного воздуха.
Вход в помещения высокой степени чистоты должен осуществляться через воздушные шлюзы; через эти же шлюзы должна осуществляться и передача материалов.
Между помещениями различной степени чистоты должны быть электромеханические переговорные устройства.
Практическая работа
Задание 1. Санитарно-микробиологический анализ воздуха асептического блока
Место забора воздуха — асептическая комната в блоке. Время забора воздуха — до начала работы, до УФ-облучения. Метод забора воздуха — аспирационный:
а) для определения ОМЧ через МПА пропущено 100 л воздуха;
б) для определения золотистого стафилококка через желточно-солевой агар (ЖСА) пропущено 250 л воздуха;
в) для обнаружения грибов через среду Сабуро пропущено 250 л воздуха.
Чашки с питательными средами выдержаны в термостате при температуре 37 °С 48 часов и при комнатной температуре 48 часов.
Полученные результаты по исследованию проб воздуха данного помещения представлены в таблице.
Цель исследования Число выросших колоний
ОМЧ (на МПА)
Обнаружение стафилококков, в том числе золотистого (на ЖСА)
Обнаружение грибов (на среде Сабуро)
78
7
0

Колонии, выросшие на ЖСА, подвергли дальнейшей идентификации,
результаты которой представлены в следующей таблице.
Число колоний Морфология Окраска по Граму Пигмент Плазмокоагулаза Гемолиз Лецитиназа
3 кокки + золотистый + + +
4 кокки белый -- +/-- --

На основании информации, полученной из таблиц, составьте характеристику качественно-количественного состава микрофлоры воздуха данного помещения, сравните с нормативами и сделайте вывод. При необходимости дайте рекомендации по улучшению воздушной среды данного помещения.
Задание 2. Санитарно-микробиологический анализ воздуха асептического блока
Место забора воздуха — асептическая комната в блоке. Время забора воздуха — до начала работы, после УФ-облучения.
Метод забора воздуха — аспирационный:
а) для определения ОМЧ через МПА пропущено 100 л воздуха,
б) для определения золотистого стафилококка через желточно-солевой агар (ЖСА) пропущено 250 л воздуха,
в) для обнаружения грибов через среду Сабуро пропущено 250 л воздуха.
Чашки с питательными средами выдержаны в термостате при температуре 37 "С 48 часов и при комнатной температуре 48 часов.
Полученные результаты по исследованию проб воздуха данного помещения представлены в таблице.
Цель исследования Число выросших колоний
ОМЧ (на МПА)
Обнаружение стафилококков, в том числе золотистого (на ЖСА)
Обнаружение грибов (на среде Сабуро)
37
1
0

Колонии, выросшие на ЖСА, подвергли дальнейшей идентификации, результаты которой представлены в следующей таблице.
Число колоний Морфология Окраска по Граму Пигмент Плазмокоагулаза Гемолиз Лецитиназа
1 кокки + белый -- + --

На основании информации, полученной из таблиц, составьте характеристику качественно-количественного состава микрофлоры воздуха данного помещения, сравните с нормативами и сделайте вывод. При необходимости дайте рекомендации по улучшению воздушной среды данного помещения.
Задание 3. Санитарно-микробиологический анализ воздуха асептического блока
Место забора воздуха — асептическая комната в блоке. Время забора воздуха — после окончания работы. Метод забора воздуха — аспирационный:
а) для определения ОМЧ через МПА пропущено 100 л воздуха;
б) для определения золотистого стафилококка через желточно-солевой агар (ЖСА) пропущено 250 л воздуха;
в) для обнаружения грибов через среду Сабуро пропущено 250 л воздуха.
Чашки с питательными средами выдержаны в термостате при температуре 37 °С 48 часов и при комнатной температуре 48 часов.
Полученные результаты по исследованию проб воздуха данного помещения представлены в таблице.
Цель исследования Число выросших колоний
ОМЧ (на МПА)
Обнаружение стафилококков, в том числе золотистого (на ЖСА)
Обнаружение грибов (на среде Сабуро)
136
12
3

Колонии, выросшие на ЖСА, подвергли дальнейшей идентификации, результаты которой представлены в следующей таблице.
Число колоний Морфология Окраска по Граму Пигмент Плазмокоагулаза Гемолиз Лецитиназа
5 кокки + золотистый + + +
3 кокки + белый - +/- +/-
4 кокки + желтый - - -

На основании информации, полученной из таблиц, составьте характеристику качественно-количественного состава микрофлоры воздуха данного помещения, сравните с нормативами и сделайте вывод. При необходимости дайте рекомендации по улучшению воздушной среды данного помещения.
Задание 4. Санитарно-микробиологический анализ воздуха ассистентской в аптеке
Место забора воздуха — ассистентская. Время забора воздуха — до начала работы. Метод забора воздуха — аспирационный:
а) для определения ОМЧ через МПА пропущено 100 л воздуха;
б) для определения золотистого стафилококка через желточно-солевой агар (ЖСА) пропущено 250 л воздуха;
в) для обнаружения грибов через среду Сабуро пропущено 250 л воздуха.
Чашки с питательными средами выдержаны в термостате при температуре 37 "С 48 часов и при комнатной температуре 48 часов.
Полученные результаты по исследованию проб воздуха данного помещения представлены в таблице.
Цель исследования Число выросших колоний
ОМЧ (на МПА) 47
Обнаружение стафилококков, в том числе золотистого (на ЖСА)
10
Обнаружение грибов (на среде Сабуро) 2

Колонии, выросшие на ЖСА, подвергли дальнейшей идентификации, результаты которой представлены в следующей таблице.
Число колоний Морфология Окраска по Граму Пигмент Плазмокоагулаза Гемолиз Лецитиназа
3 кокки + золотистый + + +
4 кокки + белый - +/- +/-
5 кокки + желтый - - -

На основании информации, полученной из таблиц, составьте характеристику качественно-количественного состава микрофлоры воздуха данного помещения, сравните с нормативами и сделайте вывод. При необходимости дайте рекомендации по улучшению воздушной среды данного помещения.
Задание 5. Санитарно-микробиологический анализ воздуха ассистентской в аптеке
Место забора воздуха — ассистентская.
Время забора воздуха — после окончания работы.
Метод забора воздуха — аспирационный:
а) для определения ОМЧ через МПА пропущено 100 л воздуха,
б) для определения золотистого стафилококка через желточно-солевой агар (ЖСА) пропущено 250 л воздуха,
в) для обнаружения грибов через среду Сабуро пропущено 250 л воздуха.
Чашки с питательными средами выдержаны в термостате при температуре 37 °С 48 часов и при комнатной температуре 48 часов.
Результаты исследования проб воздуха данного помещения представлены в таблице на стр. 27.
Цель исследования Число выросших колоний
ОМЧ (на МПА)
Обнаружение стафилококков, в том числе золотистого (на ЖСА)
Обнаружение грибов (на среде Сабуро)
217
36
21

Колонии, выросшие на ЖСА, подвергли дальнейшей идентификации, результаты которой представлены в следующей таблице.
Число колоний Морфология Окраска по Граму Пигмент Плазмокоагулаза Гемолиз Лецитиназа
17 кокки + золотистый + + +
12 кокки + белый - +/- +/-
7 кокки + желтый - - -

На основании информации, полученной из таблиц, составьте характеристику качественно-количественного состава микрофлоры воздуха данного помещения, сравните с нормативами и сделайте вывод. При необходимости дайте рекомендации по улучшению воздушной среды данного помещения.
Задание 6. Санитарно-микробиологический анализ воздуха моечной в аптеке
Место забора воздуха — моечная больничной аптеки. Время забора воздуха — во время работы. Метод забора воздуха — седиментационный:
а) для определения ОМЧ чашка с МПА в открытом виде вы держана в течение 10 минут;
б) для определения золотистого стафилококка чашка с желточно-солевым агаром (ЖСА) в открытом виде выдержана в течение 1 часа;
в) для обнаружения грибов чашка со средой Сабуро выдержана в открытом виде в течение 1 часа;
г) для выявления энтеробактерий и синегнойной палочки чашки со средой Эндо и элективной средой для псевдомонад (с фурагином и хлоридом натрия) выдержаны в открытом виде в течение 1 часа.
После экспозиции все чашки выдержаны в термостате при температуре 37 оС 48 часов и при комнатной температуре 48 часов.
Результаты представлены в таблице
Цель исследования Количество колоний и виды микробов
ОМЧ ( на МПА) 55 колоний
Выявление стафилококков (на ЖСА) 11 колоний, из них 4 — с плазмокоагулазой
Выявление грибов (на среде Сабуро) 8 колоний плесневых грибов
Выявление энтеробактерий (на среде Эндо) 2 колонии с перламутровым блеском
Выявление синегнойной палочки среда окрашена зеленым пигментом, «парфюмерный» запах

Пользуясь формулой Омелянского (и таблицей множителей), определите количество всех санитарно-показательных микроорганизмов в воздухе данного помещения.
Оцените микробный состав данного аптечного помещения.
Какими путями выявленные в результате исследования микроорганизмы могли попасть в воздушную среду моечной? Какие последствия может иметь насыщенность воздуха моечной данными микроорганизмами?
Дайте рекомендации по улучшению состояния воздушной среды данного помещения.

Источник: С. И. Керашева, «САНИТАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ Учебное пособие для студентов I—II курсов фармацевтического факультета» 2000

А так же в разделе «Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологические характеристики »