Принцип метода. Методика основана на экстракции с помощью ТХУ различных форм рибофлавина из крови с последующим кислотным гидролизом флавинадениндинуклеотида (ФАД) и флюориметрическим определением содержания общего рибофлавина.
Реактивы.

1. 10% ТХУ.
2. 4 М раствор гидрофосфата калия (К2НРО4).
3. 5% раствор гидрокарбоната натрия (NaHCO3).
4. 10% раствор дитионита натрия (№2Б2О4) в 5% растворе гидрокарбоната натрия ^аНСО3). Г отовят непосредственно перед употреблением.
5. Стандартный раствор рибофлавина: 2 мг рибофлавина растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды в мерной колбе на 100 мл, доводят объем до метки дистиллированной водой. 1 мл раствора содержит 20 мкг витамина В2.

Ход определения.

1. мл оксалатной крови сразу после взятия помещают в центрифужную пробирку, куда прибавляют 9 мл 10% раствора ТХУ, хорошо перемешивают и оставляют на 1 ч в темноте, после чего пробу центрифугируют.

Отбирают прозрачную надосадочную жидкость и помещают в термостат при 37-38'С на 20 ч (или оставляют при комнатной температуре на

2. суток) для гидролиза ФАД.

Затем отбирают 4 мл, переносят в чистую пробирку, проводят нейтрализацию, добавляя к 4 мл гидролизата 1 мл 4 М раствора гидрофосфата калия, и оставляют на 1-2 ч в темноте.
Измеряют флюоресценцию нейтрализованного раствора с использованием первичных и вторичных светофильтров для витамина В2 - первое измерение.
Затем к пробе прибавляют 0,1 мл рабочего стандартного раствора и повторно измеряют флюоресценцию, после чего гасят флюоресценцию добавлением 0,5 мл 10% раствора гидросульфита натрия.
Вновь измеряют флюоресценцию пробы.
Расчет ведут по формуле:
Х = 20х(Р1-Р3) х100, где
(Р2 - Р1) х 5
Х - содержание рибофлавина, мкг/дл;
20 - содержание рибофлавина в стандартном растворе с учетом разведения, мкг/мл;
Р1, Р2, Рз - последовательные показания измерений флюоресценции пробы;
100 - пересчет на 100 мл;

5. - объем испытуемого раствора, мл.

Коэффициент для перевода содержания рибофлавина из мкг/дл в нмоль/л - 0,033.
В норме содержание рибофлавина в цельной крови составляет 328 нмоль/л (12 мкг/дл).