Порядок снятия костюма


Противочумный костюм снимают после работы в специально выделен­ном для этого помещении или в той же комнате, где проводилась работа, но после полного обеззараживания этого помещения. Для обеззараживания ко­стюма должны быть предусмотрены: тазик или бачок с дезраствором для об­работки наружной поверхности сапог или галош; тазик с дезраствором для обработки рук в перчатках в процессе снятия костюма; банка с притертой пробкой с 70% спиртом для обеззараживания очков и фонендоскопа; ка­стрюли с дезраствором или мыльной водой для обеззараживания ватно­марлевых масок; металлический бак с дезраствором для обеззараживания халата, косынки (капюшона) и полотенца; металлическая кастрюля или стеклянная банка с дезраствором для обеззараживания перчаток.
При обеззараживании костюма дезинфицирующими растворами все его части полностью погружают в раствор. Когда обеззараживание прово­дится автоклавированием, кипячением или в дезкамере, костюм склады­вают соответственно в баки, в биксы или камерные мешки, которые сна­ружи обрабатывают дезинфицирующими растворами.
Снимают костюм медленно, не торопясь. В течение 1-2 мин моют ру­ки в перчатках в дезинфицирующем растворе (6% раствор перекиси водо­рода, 3% раствор хлорамина), медленно вынимают полотенце, сворачива­ют его и помещают в дезраствор; протирают ватным тампоном, обильно смоченным дезраствором, клеенчатый фартук, снимают его, сворачивая наружной стороной внутрь; снимают вторую пару перчаток и нарукавни­ки; сапоги или галоши протирают сверху вниз ватным тампоном, обильно смоченным дезинфицирующим раствором (для каждого сапога применяют отдельный тампон); не касаясь открытых частей кожи, вынимают фонен­доскоп; очки снимают плавным движением, оттягивая их двумя руками вперед, вверх, назад, за голову; ватно-марлевую маску снимают, не каса­ясь лица наружной стороной; развязывают завязки ворота халата, пояс и, отпустив верхний край перчаток, развязывают завязки рукавов, снимают халат, заворачивая наружную часть его внутрь; снимают косынку, осто­рожно собирая все концы ее в одну руку на затылке; снимают перчатки, проверяют их на целость в дезрастворе (но не воздухом). Еще раз обмы­вают сапоги (галоши) в баке с дезраствором и снимают их. Необходимо помнить, что после снятия каждой части костюма руки в перчатках по­гружают в дезраствор.
После снятия противочумного костюма руки тщательно моют с мылом в теплой воде. Защитная одежда обеззараживается после разового приме­нения кипячением в 2% растворе соды (30 мин); автоклавированием (1 атм в течение 30 мин), замачиванием в дезинфицирующем растворе (3% рас­творе хлорамина в течение 2 ч).
Перечень мероприятий, проводимых при аварийном инфицировании
медперсонала, работающего в очаге
При всякой аварии, повлекшей инфицирование предметов, одежды и открытых участков тела, проводятся следующие меры:
- на время прекращаются оказание медицинской помощи больному, работа с заразным материалом и вызывается начальник;
- пострадавший, не дожидаясь прибытия начальника, приступает к обеззараживанию 70% спиртом или дезинфицирующим раствором всех открытых частей тела, на которые попал заразный материал или имеется подозрение в этом;
- снимает зараженную одежду, предварительно обработав дезинфици­рующим раствором, а находившиеся под одеждой подозрительные на со­прикосновение с возбудителем части тела обрабатывает дезинфицирую­щим раствором;
- слизистые оболочки глаз, носа, рта обрабатывают раствором анти­биотиков, применяемых при данной инфекции: при чуме - раствором стрептомицина (250 000-500 000 мкг/мл), холере - тетрациклина (200 000 мкг/мл), а при натуральной оспе слизистые оболочки рта, носа, обрабатывают 0,05% раствором марганцовокислого калия, глаза промы­вают 1% раствором борной кислоты или в глаза вводится несколько ка­пель 1% азотнокислого серебра, в нос - 1% раствор протаргола, рот и гор­ло дополнительно ополаскивают 70% спиртом и внутримышечно вводят противооспенный иммуноглобулин; при неизвестном возбудителе приме­няют сочетание антибиотиков группы аминогликозидов (стрептомицин, канамицин, мономицин в концентрациях 200 000 мкг/мл) с тетрациклино- вой группой (хлортетрациклин, окситетрациклин, тетрациклин в концен­трациях 100 000-200 000 мкг/мл);
- при аварии, связанной с ранением или другим нарушением целости кожных покровов, на место ранения на 4-5 мин накладывают компресс из 6% раствора перекиси водорода или делают ванночку из этого раствора;
- после предварительного обеззараживания пострадавший проходит полную санитарную обработку и надевает чистую одежду, а загрязненная одежда подвергается дезинфекции;
- помещение, в котором допущена авария, и предметы, находящиеся в нем, подвергаются тщательной дезинфекции, объем и вид которой опре­деляется начальником в зависимости от характера аварии;
- начальник, прибывший на место аварии, решает вопрос об объеме экстренных мер защиты (изоляция, медицинское наблюдение, лечение).
Опись укладки для специальной обработки кожных покровов и слизистых оболочек перед надеванием защитной одежды
Медицинский работник, выявивший больного чумой, холерой, конта­гиозной геморрагической лихорадкой или другими опасными инфекция­ми, перед одеванием противочумного костюма должен провести обработ­ку всех открытых частей тела. Для этих целей в каждом медицинском пункте, лечебном учреждении должна быть укладка, содержащая:
- навески хлорамина для приготовления 0,5-1% раствора;
- 70% этиловый спирт;
- запас антибиотиков (стрептомицина, тетрациклина, канамицина, мо- номицина);
- навеска марганцовокислого калия для приготовления 0,05% раствора;
- 1 % раствор протаргола; 1 % раствор азотнокислого серебра;
- растворитель антибиотиков;
- стерильные шприцы, иглы, пипетки, салфетки, вата.
Мероприятия по противодействию биологическому терроризму
В настоящее время весьма велика вероятность применения биологиче­ских поражающих агентов и химических веществ в диверсионно­террористических целях, то есть - преднамеренное и скрытое заражение биологическими средствами воздуха и воды, продовольствия (фуража) с помощью диверсионного снаряжения (портативные генераторы аэрозолей, распыливающие пеналы и т.д.).
Этому способствует относительная простота приобретения и исполь­зования, низкая стоимость, возможность скрытого применения, селектив­ность действия. Наиболее вероятны действия террористических групп по следующим направлениям:
- диверсии на предприятиях по производству или на гражданских объектах по исследованиям и разработкам соответствующих биологиче­ских материалов;
- захват контроля над такими предприятиями и угроза их разрушения в случае отказа выполнения требований террористов;
- похищение или получение другими способами опасных биологи­ческих материалов с целью угрозы их распространения или изготовления рецептур биологических агентов и их использования;
- создание паники и дезорганизации общественной жизни путем ложных тревог и угроз применения опасных биологических материалов и оружия.
Перечень боевых биологических поражающих агентов сложился уже достаточно давно, однако выявление новых экзотических заболеваний, возможность использования достижений биотехнологий для получения новых боевых агентов, развитие ряда научных направлений требуют по­стоянного сбора информации, ее обобщения и анализа и могут дать новые сведения об агентах, позволяющих дополнить уже известные перечни биологических средств.
Современные требования, предъявляемые к БПА, были сформулированы в результате многолетних исследований и нашли свое отражение в ряде официальных военных документов отдельных государств, в частности США. В общем виде они могут быть сведены в следующие положения:
- во всех случаях применения агенты должны вызывать смерть, поте­рю дееспособности или другой ущерб;
- производство агентов в нужных для военных целей количествах должно быть экономичным и основываться на использовании доступных материалов;
- агенты должны обладать устойчивостью во внешней среде, не терять своих свойств в процессе производства, хранения, транспортировки и бое­вого применения;
- агенты должны допускать их эффективное применение всеми име­ющимися для этих целей средствами. Кроме этого, важными критериями определения боевой пригодности БПА будут являться трудность обнару­жения агента после применения в воздухе, воде, на различных объектах и боевой технике, сложность и длительность лабораторного определения вида агента, трудность быстрой диагностики возбудителя заболевания, способность инфекции к широкому эпидемическому распространению, отсутствие или недостаточная эффективность имеющихся в данное время средств иммуно- и экстренной профилактики заболеваний.
Имеется список возбудителей патогенных микроорганизмов, принятый ВОЗ. Необходимо отметить, что во всех опубликованных перечнях коли­чественный и качественный состав биологических агентов постоянно из­меняется, однако список «классических» уже в достаточной степени сформирован. Он включает в себя:
1. Возбудителей вирусной природы: натуральная оспа, геморрагиче­ские лихорадки Марбурга, Эбола, Ласса, Боливийская геморрагическая лихорадка, венесуэльский энцефаломиелит лошадей, восточный энцефа­ломиелит лошадей, желтая лихорадка, японский энцефалит, лихорадка денге, лихорадка долины Рифт, геморрагическая лихорадка с почечным синдромом, Конго-крымская геморрагическая лихорадка.
2. Возбудители риккетсиозной природы: эпидемический сыпной тиф, пятнистая лихорадка Скалистых гор, Ку-лихорадка.
3. Возбудители бактериальной природы - чумы, сибирской язвы, туля­ремии, сапа, мелиоидоза, бруцеллеза, легионеллеза.
4. Токсины растительного и животного происхождения: Ботулиниче- ские токсины, столбнячный, сибиреязвенный, шигеллезный, стафилокок­ковый энтеротоксины, рицин, нейротоксины и др.
Список потенциальных агентов БПА, изучаемых методами генной инже­нерии для разрешенных целей, помимо вышеперечисленных агентов, вклю­чает в себя альфавирусы (вирус речной слепоты), флавивирусы (вирус энце­фалита Сан-Луи, вирус клещевого энцефалита, вирус желтой лихорадки).
Возросший интерес к вирусам связан с тем, что работа с ними стала возможной благодаря развитию и внедрению в практику генно­инженерных методов, позволяющих обезопасить и облегчить исследова­ния. Большинство вирусных заболеваний до сих пор не имеет эффектив­ных средств специфического лечения. Значительная часть изучаемых ви­русных заболеваний трудно диагностируется. Большинство вакцин против вирусных инфекций находится в стадии разработки. Кроме того, вирусы способны вызывать иммуносупрессию у инфицированного хозяина и, та­ким образом, делать его высокочувствительным к суперинфицированию другими инфекционными агентами.
Интерес к токсинам вызван целым рядом преимуществ перед возбуди­телями инфекционных заболеваний. Они более стабильны при хранении и применении, их можно легко и в больших количествах получить в научно­исследовательских лабораториях, возможно скрытное применение в ди­версионно-террористических целях и, что очень важно, практически от­сутствует инкубационный период заболевания, что приближает токсины по тактическим характеристикам к химическому оружию. В целом данные по свойствам биологических токсинов в доступной литературе очень скудные. Известны лишь источники выделения токсинов и предположи­тельный механизм их действия. Однако степень токсичности не всегда яв­ляется решающей. Например, стафилококковый энтеротоксин В умеренно токсичен, тем не менее в военных кругах США его считают мощным средством, временно выводящим из строя.
Особое положение среди вероятных агентов БПА занимают возбуди­тели контагиозных заболеваний - чумы, натуральной оспы, лихорадок Марбурга и Эбола. Способность к развитию эпидемического процесса и его нарастанию в пространственно-временных границах повышает веро­ятность боевого использования этих агентов также и в современной войне с применением ОМП.
Эффективность биотеррористических актов зависит не только от по­ражающих свойств БПА, но и от правильного выбора способа их приме­нения. Способы боевого применения БС базируются на способности пато-
генных микроорганизмов и токсинов в естественных условиях проникать в организм человека следующими основными путями:
- с воздухом через органы дыхания;
- с пищей и водой через желудочно-кишечный тракт;
- через слизистые оболочки рта, носа, глаз, кожные покровы;
- в результате укусов зараженных кровососущих членистоногих через неповрежденную кожу.
Предполагается, что можно создать химические вещества и (или) био­логические агенты, способные в течение короткого периода времени раз­рушить материалы военного назначения (резину, пластмассы, тканевые и брезентовые покрытия, уничтожить продовольственные запасы, загряз­нить и сделать непригодными к использованию горюче-смазочные мате­риалы). До сих пор такие вещества рассматривались лишь как диверсион­ные средства. Ожидается, что вещества, выводящие из строя двигатели военных машин, разрушающие горюче-смазочные, уплотнительные мате­риалы, брезентовые, пластмассовые и деревянные укрытия и тару, а также «изменяющие свойства почвы и растительности» затруднят действия про­тивника без непосредственного уничтожения живой силы.
Создание химических веществ и биологических агентов, не оказыва­ющих вредного воздействия на человека и животных и не нарушающих экологическое равновесие природы, но способных поражать органические материалы, довольно проблематично. В то же время в рамках создания подобного оружия могут быть развернуты исследования и разработки но­вого поколения БПА.
Благодаря достижениям биотехнологии стало возможным в течение нескольких недель наладить крупномасштабное производство БПА с за­данными свойствами, располагая небольшим исходным запасом. Значи­тельно сократились сроки разработки биологических рецептур. Новая тех­нология микрокапсулирования позволяет устранить один из главных не­достатков БПА - слабую устойчивость к факторам внешней среды, что обеспечивает более высокую длительность хранения и безопасность транспортировки.
Наиболее перспективными направлениями биотехнологических иссле­дований и разработок, результаты которых могут быть использованы в во­енно-прикладных целях, являются следующие.
Микрокапсулирование - процесс упаковки небольших количеств твер­дых, жидких или газообразных веществ в индивидуальные, изолирующие их от внешней среды оболочки различной природы. Этот метод находит широкое применение в биотехнологии и фармацевтической промышлен­ности, что связано с большими возможностями.
Программа расшифровки генома человека. В результате выполнения программы станет возможным управлять наследственностью и изменять структуру и функции жизненно важных для организма белков и фермен­тов. Следует также подчеркнуть принципиальную возможность примене­ния результатов исследований по этой программе в целях разработки эт­нического оружия. Расшифровка генома людей, принадлежащих к разным этническим группам, позволит выявить генетические различия, обуслов­ливающие разную восприимчивость к некоторым инфекционным заболе­ваниям и токсическим веществам.
Одной из быстроразвивающихся областей биотехнологии является белковый дизайн, т.е. конструирование белков с использованием компью­терного моделирования. Этот метод давно применяется зарубежными фирмами для создания новых лекарственных средств и химических препа­ратов. Теоретически метод открывает широчайшие перспективы целена­правленного синтеза любых белковых молекул.
Для модификации потенциальных агентов БПА могут быть использо­ваны различные методы генной инженерии, включая метод направленного мутагенеза и метод транслокации генов. Первый метод дает возможность вызывать желаемые мутации генов, которые в норме вообще не мутируют или мутируют с очень низкой частотой, и во много раз ускоряет процесс селекции микроорганизмов с желаемыми свойствами. Второй позволяет осуществить перенос генов между различными микроорганизмами с це­лью изменения их свойств (патогенности, вирулентности, устойчивости к антибиотикам и др.).
С целью противодействия биологическому терроризму целесообразно приведение специальных мероприятий, проводимых командованием, раз­ведывательными подразделениями родов войск и отдельными службами в целях выявления, сбора и обработки любой информации по подготовке вероятных биотеррористических актов, то есть биологическая разведка.
Основные мероприятия биологической разведки:
1. Постоянное наблюдение за воздухом и местностью для обнаружения признаков применения БПА;
2. Неспецифическая индикация, то есть обнаружение объективных признаков, свидетельствующих о применении БПА;
3. Специфическая индикация - подтверждение биотеррористического акта и определение вида БПА.
Специфическая индикация биологических поражающих агентов
Специфическая индикация (СИ) - комплекс специальных мероприятий, проводимых медицинской и ветеринарно-санитарной службами для под­тверждения факта применения БО (при положительных результатах не­специфической индикации) и определения вида БПА.
Ее осуществление возлагается:
- на лабораторные подразделения СЭУ армий, фронтов, военных округов, флотов, санитарно-эпидемиологических отделов управления гос­питальных баз (СЭО УГБ), а также на ПСЭО воздушных армий и другие равные им лабораторные подразделения санитарно-эпидемиологических учреждений армий и фронта;
- лаборатории ветеринарно-эпизоотологических отрядов и других учреждений ветеринарно-санитарной службы.
К проведению специфической индикации могут привлекаться микро­биологические лаборатории инфекционных госпиталей и научно­исследовательских учреждений страны.
С учетом особенностей современных боевых действий, обусловлива­ющих частые передислокации санитарно-эпидемиологических учрежде­ний, и необходимости в связи с этим поэтапного последовательного ис­следования проб в различных лабораториях организация специфической индикации БС предусматривает строгое соблюдение принципа преем­ственности в работе (рис. 9).
В первую очередь исследованию подлежат:
- пробы воздуха;
- осколки и содержимое биологических боеприпасов;
- смывы из носоглотки людей, оказавшихся без защиты в зоне про­хождения аэрозольного облака;
- материалы от внезапно заболевших людей (животных).

Рис. 9. Принципиальная схема анализа проб

В основе специфической индикации БПА лежат методы лабораторного экспресс-анализа проб с помощью прямого метода флюоресцирующих ан­тител или реакции непрямой гемагглютинации по единой схеме, преду­сматривающей два взаимодополняющих этапа исследования:
- первый этап - выявление БПА с помощью экспресс-методов непо­средственно в нативной пробе без ее биологического обогащения;
- второй этап - выявление и идентификация БПА с помощью экс­пресс-методов анализа проб после их предварительного биологического обогащения путем накопления содержащихся в них возбудителей на пита­тельных средах, в культурах клеток, а также в органах и тканях чувстви­тельных лабораторных животных (рис. 6).
Причем определение БС может проводиться как в сокращенном, так и в полном объеме, что зависит от возможности проводящих исследование лабораторий. Сокращенный объем исследований при этом предусматри­вает проведение экспресс-анализа только на первом этапе схемы специ­фической индикации БС, т.е. исследование материала без биологического накопления. При этом 2/3 пробы отделяется для пересылки в СЭО армии или фронта (рис. 10).

Рис. 10. Схема специфической индикации БС в сокращенном объеме

Полный объем исследования проводится в 2 этапа и предусматривает выявление и идентификацию до вида, содержащихся в пробах БС любой таксономической принадлежности (бактерий, риккетсий, хламидий, виру­сов, грибов, токсинов) при исследовании, как нативных материалов, так и проб после биологического обогащения (рис. 11).
Работу начинают с приема, регистрации, разработки и сортировки по­ступившего материала. Определяют очередность исследования достав­ленных проб, нумеруют их, устанавливают порядок усреднения, который допускается при поступлении большого количества проб. Усредняются однородные пробы в количестве 3-5, не усредняются пробы, подлежащие первоочередному исследованию. Далее выделяют пробы, которые в на­тивном состоянии должны быть исследованы МФА и РНГА.
Объединение этих проб не допускается!

Рис. 11 Схема специфической индикации бактерий, риккетсий, хламидий,
вирусов и токсинов

В первую очередь необходимо исследовать осколки биологических боеприпасов, а также материал около места разрыва, пробы воздуха в ме­стах предполагаемого застоя аэрозоля, смывы из носоглотки людей, нахо­дившихся в очаге без средств защиты, внезапно заболевших или умерших.
Далее приступают к первичной обработке и подготовке проб к иссле­дованию. Из нативного материала, который не подлежит концентрации, готовят мазки или мазки-отпечатки для иммунофлюоресцентной микро­скопии на 3-х предметных стеклах по 8-10 на каждом.
Сухие пробы (пищевые продукты, пыль, почва, фураж и т.д.) растира­ют в ступке или измельчают ножницами и заливают стерильным физрас­твором до получения 20% концентрации. Взвесь отстаивается 3-10 минут.
Жидкость над осадком фильтруют через 3 слоя марли.С осколков боепри­пасов, растений делают смывы (3-5 мл физраствора), готовят мазки и до­бавляют физраствор до 22 мл. Тампоны заливают 2-3 мл физраствора, встряхивают и отжимают. Желатиновый фильтр заливают 30-40 мл физраствора и выдерживают при 37 °С 30 мин на водяной бане, затем встряхивают до получения однородной взвеси.
Доставленные членистоногие (мухи, вши, слепни, клещи и т.д.) груп­пируются по 50-100 экземпляров каждого вида. Живые паразиты в до­ставленной посуде обрабатывают эфиром 1-2 мин для обездвиживания.
У насекомых отделяют желудочно-кишечный тракт и из каждого гото­вят мазки-отпечатки для иммунолюминесцентной микроскопии. Осталь­ных обрабатывают 70% спиртом 3-5 секунд, промывают стерильным физраствором, растирают в ступке с несколькими каплями физраствора, затем добавляют физраствор до 22 мл. Если исследуемый материал до­ставлен в объеме 50 мл и больше, то его фильтруют или центрифугируют. Фильтруют через мембранный фильтр №3, установленный в приборе Зей­тца. После фильтрации фильтр переносят в стерильную чашку Петри, из­мельчают и заливают 3-5 мл физраствора. Из смыва или из суспензии осадка после центрифугирования делают мазки для иммунолюминесцент­ной микроскопии. К оставшейся части смыва или суспензии добавляют физраствор до объема 22 мл. Полученный объем делят на 6 частей (рис. 12).
Вторая часть 20,0 мл используется для посева на питательные среды и постановки биопробы на ботулотоксин. Для возбудителя чумы использу­ют агар Хоттингера с генциан-виолетом 1:100 000 и с одним из стимуля­торов роста (кровь, сульфит натрия); палочки сибирской язвы - агар Хот- тингера с нанесенной на поверхность желточной эмульсией, возбудителя туляремии - агар Хоттингера с желтком; бруцеллеза - агар Хоттингера; палочек Сапа и мелиоидоза - 3-4% глицериновый Хоттингеровский агар; грибов - агар Сабуро с глюкозой. Оставшийся исследуемый материал вво­дят по 0,5 мл внутрибрюшинно 2 мышам для обнаружения ботулотоксина, контролем опыта служат 4 мыши, используемые для биологического обо­гащения пробы. Исследуемый материал вводят в смеси с поливалентной противоботулинической сывороткой.
Третья часть в объеме 2,5 мл используется для заражения 4-х белых мышей. Животных за 4 часа до введения материала обрабатывают корти­зоном для понижения сопротивляемости организма (по 0,5 мг в/м). Мате­риал вводят внутрибрюшинно в дозе 0,5 мл в смеси с 0,5 мл поливалент­ной антитоксической противоботулинической сывороткой (для нейтрали­зации ботулотоксина).
Первая часть смыва или суспензии в количестве 2,0 мл используется для постановки РНГА.

Рис. 12. Распределение смыва (суспензии осадка) для анализов

Четвертую часть материала в количестве 4,0 мл используют для накопления риккетсий и хламидий. Для этого во флаконе добавляют 0,1 мл сыворотки крови крупного рогатого скота и 0,1 мл смеси антибиотиков (4000 Ед/мл пенициллина + 2000 Ед/мл стрептомицина), выдерживают не менее часа в холодильнике и заражают культуру клеток, используя для этого 8 пробирок с монослоем клеток на пластинках.
Пятую часть материала в количестве 8 мл используют для вирусологи­ческих исследований. Ее центрифугируют 20 минут при 2 000 оборотов или фильтруют через 3 слоя марли. Фильтрат или жидкость над осадком после центрифугирования обрабатывают антибиотиками, добавляя 0,1 мл раствора антибиотиков 80 000 Ед/мл пенициллина + 40 000 Ед/мл стреп­томицина, выдерживают 2 часа при комнатной температуре и вводят 4 бе­лым мышам-сосункам интерцеребрально в количестве 0,03 мл. Наряду с заражением животных надосадочную жидкость, обработанную антибио­тиками и выдержанную не менее часа в холодильнике, вносят по 0,2 мл в 18 пробирок с клеточной культурой на стеклянных пластинках.
Шестая часть используется для повторения или продолжения иссле­дования.
Посевы на питательных средах просматриваются через 12, 18, 24, 30, 36 и 44 часа. При появлении подозрительного роста готовят мазки для иммунофлюоресцентной микроскопии и взвесь для РНГА. Чашки с посе­вом сохраняют до окончания индикации, а затем их уничтожают, в случае необходимости выделяют чистую культуру. Животные, погибшие после заражения, немедленно вскрываются. Если мыши не погибли, то их заби­вают: 2-х - через 20-22 часа и 2-х - через 40-42 часа после заражения.
Из селезенки и брюшины готовят мазки-отпечатки для иммунофлюо­ресцентного исследования и суспензии для постановки РНГА.
Наблюдение за зараженными мышами для обнаружения ботулотокси- на проводится в течение 48 часов. Если за этот срок животные не погиба­ют, то наблюдение продолжается до 4-х суток. Выжившие мыши могут быть использованы для исследования на бактерии, риккетсии и вирусы. Животные, погибшие после интерцеребрального заражения, также вскры­ваются. Если животные выжили, то 2-х из них забивают и вскрывают че­рез 42-46 часов после заражения, а 2-х других оставляют для контроля и наблюдают в течение 72 часов, а затем забивают. Из оболочек и срезов мозга готовят мазки-отпечатки, а при комбинированном заражении их го­товят из селезенки и других органов.
Зараженные клеточные культуры исследуются следующим образом: через 20-24 часа и 42-46 (72) часов пластинки с монослоем тканевой культуры вынимают, высушивают и используют для постановки МФА, остающаяся культуральная жидкость может быть использована для поста­новки РНГА.
Мазки для МФА фиксируют на холоде (2-4°С) в течение 15-20 мин в химически чистом ацетоне. Окраску мазков проводят прямым методом. Используют полугрупповые, группо- и видоспецифические люминесци- рующие иммуноглобулины. Из нативного материала рекомендуется окра­сить на 1 стекле: 1-й квадрат - полугрупповой бактериальной люминес­центной сывороткой, 2-й квадрат - полугрупповым риккетсиозным имму­ноглобулином, 3-й и 4-й квадраты - полугрупповыми вирусными имму­ноглобулинами (2 препарата), 5 - кокцидиозным иммуноглобулином.
Если с каким-либо полугрупповым диагностическим препаратом будет получен положительный результат, то дополнительно окрашиваются 2 стекла - 2-е и 3-е, которые являются резервными. Второе стекло окра­шивают видоспецифическими бактериальными люминесцирующими им­муноглобулинами, а 3-е - видо- и группоспецифическими риккетсиозны­ми или вирусными иммуноглобулинами.
Если полугрупповые диагностические препараты отсутствуют, то для окраски мазков сразу используют видо- и группоспецифические люминес- цирующие иммуноглобулины: для 2-го стекла - к возбудителям чумы, ту­ляремии, бруцеллеза, сибирской язвы (универсальные или антиспоровые), сапа и мелиоидоза; для 3-го стекла - к возбудителям эпидемического сып­ного тифа, Ку-лихорадки, группы клещевых пятнистых лихорадок, псит­такоза, оспы и кокцидиоидоза. Резервным стеклом остается первое.
При целенаправленном исследовании проб воды к числу бактериаль­ных диагностических препаратов в ряде случаев добавляют холерный лю- минесцирующий иммуноглобулин.
Для того, чтобы сыворотки не подсыхали, препараты выдерживают под чашкой Петри, внутреннюю поверхность которой смачивают водой. После окрашивания препараты тщательно отмывают в течение 10 мин в 2­3 порциях физраствора и ополаскивают дистиллированной водой, высу­шивают на воздухе и исследуют под люминесцентным микроскопом с иммерсионным объективом, используя нефлюоресцирующее масло или химически чистый диметилфталат. Фон препарата будет оранжево­красный, а микроорганизмы, соответствующие иммунной сыворотке, бу­дут светиться изумрудным или желто-зеленым цветом.
Для получения достоверных результатов исследования (особенно при малых количествах возбудителя в пробе) под люминесцентным микроско­пом просматривают не менее 20-25 полей зрения. Результаты считаются положительными, если в препарате обнаруживаются хотя бы единичные (для мелких риккетсий и бактерий - не менее 10 особей) морфологически типичные микроорганизмы или пораженные вирусом, а также риккетсия­ми, хламидиями тканевые клетки (не менее 3-5 в препарате), специфиче­ски флюоресцирующие на 3-4 креста, при отрицательных контролях.
Результат отмечают по четырехкрестовой системе:
++++ - очень яркое свечение изумрудного или желто-зеленого цвета, и морфология микроорганизмов, по краям которых могут быть ярко светя­щиеся «ободки», очень четко выражена;
+++ - яркое свечение желто-зеленого цвета, и морфология возбудителя достаточно отчетливо выражена, часто со светящейся периферией;
++ и + - свечение в основном желтое, слабое, и морфология возбуди­теля нечетко или совсем не выявляется, ободки отсутствуют.
Результат считается положительным, если флюоресценция идет на +++. Для контроля мазки обрабатывают гетерологичными иммунными флюоресцирующими сыворотками. При вирусологических исследованиях контроли делают из нормальных тканевых культур и из органов здоровых животных.
При иммунолюминесцентной микроскопии морфология микроорга­низмов может измениться: увеличиваются размеры, интенсивнее красятся края клетки, т.к. антитела адсорбируются по периферии гомологичных микроорганизмов.
Для обнаружения чумного микроба и его дифференциации от псев­дотуберкулезного методом ФА используют капсульно-соматическую про­тивочумную сыворотку и адсорбированную противопсевдотуберкулез­ную. Первая выявляет оба возбудителя, а вторая - лишь псевдотуберку­лезную палочку. Поэтому, если отмечается специфическое свечение с пер­вой сывороткой при отсутствии такового со второй, то это указывает на присутствие возбудителя чумы. Он имеет форму палочки, чаще овоидной формы с «ободком» и в бульонной культуре располагается цепочкой.
При обнаружении возбудителей сапа и мелиоидоза следует помнить, что они по морфологическим, биологическим и антигенным свойствам близки. Для их дифференциации используют адсорбированные иммунные сыпную и мелиоидозную сыворотки или неадсорбированную последнюю, которая выявляет оба возбудителя, а также мелиоидозную «ОН» сыворот­ку, выявляющую только палочку мелиоидоза. В положительном случае под микроскопом видны прямые или слегка изогнутые палочки различной величины с ярко светящейся периферией. Могут встречаться кокковидные и нитевидные особи.
Возбудители бруцеллеза и туляремии, обработанные соответствую­щими сыворотками, под микроскопом выглядят в виде очень мелких кок­кобактерий.
Для индикации сибиреязвенной палочки мазки окрашивают сибиреяз­венным универсальным люминесцирующим иммуноглобулином, а при его отсутствии смесью из равных объемов антиспорового и капсульно­соматического люминесцирующих иммуноглобулинов.
Сибиреязвенная бацилла под микроскопом имеет вид крупной палочки с обрубленными концами, палочки располагаются в одиночку, парами или цепочками. Споры имеют округлую или овальную форму.
Возбудители кокцидиоидомикоза бывают в двух формах: тканевой и культуральной. Применяются люминесцирующие иммуноглобулины про­тив тканевой фазы возбудителя, они специфически окрашивают, как ми- целиальную, так и тканевую фазу гриба и не выявляют возбудителей ги- стоплазмоза и бластомикоза. В препаратах, обработанных соответствую­щими сыворотками, возбудители флюоресцируют зеленым цветом в виде бочкообразных и прямоугольных клеток, расположенных свободно или по ходу мицелия.
В качестве БС наиболее вероятно применение возбудителей эпидемиче­ского сыпного тифа, пятнистой лихорадки Скалистых гор и Ку-лихорадки.
Используются иммунные меченые риккетсиозные сыворотки как полиг­рупповые, так и видо- и группоспецифические. Под люминесцентным мик­роскопом обнаруживаются разнообразные по форме и размерам образования в виде мелких овоидов, коротких и длинных палочек, иногда парнорасполо­женных бациллярных форм и извитых нитей, светящихся зеленым цветом.
Вокруг возбудителей из групп сыпного тифа, клещевых пятнистых лихорадок и цуцугамуши отмечается ярко флюоресцирующий ободок по периферии, а для риккетсий Бернета характерно диффузное свечение всей клетки.
Индикация возбудителя пситтакоза осуществляется методом флюорес­цирующих антител в модификации с контрастированием неспецифическо­го свечения. Специфические флюоресцирующие групповые сыворотки позволяют выявить типичные элементарные тельца, результаты индика­ции могут только установить факт присутствия представителя из группы пситтакоза-орнитоза.
В препаратах возбудитель пситтакоза выявляется в виде ярко светя­щихся изумрудно-зеленым цветом (на оранжево-буром фоне) округлых образований разных размеров (от 0,2 до 0,5), располагающихся по отдель­ности, группами или компактными соединениями. Характерной особенно­стью специфической флюоресценции микроорганизмов группы пситтако­за является наличие вокруг них четко обозначенного ярко флюоресциру­ющего периферического «ободка». Имеет значение и количество выяв­ленных в препарате особей или их скоплений.
Специфическая индикация вирусов во внешней среде, а также в пере­носчиках, природном резервуаре вирусов и в организме человека прово­дится по единой схеме.
МФА при исследовании мазков из нативного материала может обеспе­чить выявление лишь крупных возбудителей (вируса натуральной оспы, Марбург, Эбола).
Вирус натуральной оспы выявляется противооспенной флюоресциру­ющей сывороткой, которая окрашивает все другие вирусы подгруппы осповакцины (алястрим, вирус коровьей оспы, вирус вакцины и др.). По­этому окончательный ответ может быть выдан после дифференциации от других вирусов по специальным тестам, как например, выращивание за­раженных клеточных культур при «критических» температурах (37 °С, 38 °С, 39-40 °С). Вирус оспы размножается при температуре не выше 38- 38,5°С, а вирусы вакцины и коровьей оспы - при всех указанных темпера­турах, вирус алястрима - при 37-37,5 °С.
В мазках, обработанных флюоресцирующей сывороткой, обнаружива­ются элементарные тельца Пашена в виде мельчайших округлых образо­ваний, ярко флюоресцирующих изумрудно-зеленым цветом. Могут обна­руживаться и скопления элементарных телец - включения в виде более крупных образований различных форм и размеров.
Для окончательного отрицательного ответа необходимо наблюдать за зараженными культурами клеток в течение 6 дней, а не 48 часов, как это предусмотрено схемой. Поэтому в неясных случаях исследование необхо­димо продолжить.
Возбудители аргентинской (вирус Хунин), боливийской (вирус Мачупо) геморрагических лихорадок и лихорадки Ласса являются членами семейства ареновирусов. Люминесцирующие сыворотки не обеспечивают диффере

Источник: Коллектив авторов, «ВОПРОСЫ военной эпидемиологии Учебное пособие» 2015

А так же в разделе «Порядок снятия костюма »