Порядок снятия костюма
Противочумный костюм снимают после работы в специально выделенном для этого помещении или в той же комнате, где проводилась работа, но после полного обеззараживания этого помещения. Для обеззараживания костюма должны быть предусмотрены: тазик или бачок с дезраствором для обработки наружной поверхности сапог или галош; тазик с дезраствором для обработки рук в перчатках в процессе снятия костюма; банка с притертой пробкой с 70% спиртом для обеззараживания очков и фонендоскопа; кастрюли с дезраствором или мыльной водой для обеззараживания ватномарлевых масок; металлический бак с дезраствором для обеззараживания халата, косынки (капюшона) и полотенца; металлическая кастрюля или стеклянная банка с дезраствором для обеззараживания перчаток.
При обеззараживании костюма дезинфицирующими растворами все его части полностью погружают в раствор. Когда обеззараживание проводится автоклавированием, кипячением или в дезкамере, костюм складывают соответственно в баки, в биксы или камерные мешки, которые снаружи обрабатывают дезинфицирующими растворами.
Снимают костюм медленно, не торопясь. В течение 1-2 мин моют руки в перчатках в дезинфицирующем растворе (6% раствор перекиси водорода, 3% раствор хлорамина), медленно вынимают полотенце, сворачивают его и помещают в дезраствор; протирают ватным тампоном, обильно смоченным дезраствором, клеенчатый фартук, снимают его, сворачивая наружной стороной внутрь; снимают вторую пару перчаток и нарукавники; сапоги или галоши протирают сверху вниз ватным тампоном, обильно смоченным дезинфицирующим раствором (для каждого сапога применяют отдельный тампон); не касаясь открытых частей кожи, вынимают фонендоскоп; очки снимают плавным движением, оттягивая их двумя руками вперед, вверх, назад, за голову; ватно-марлевую маску снимают, не касаясь лица наружной стороной; развязывают завязки ворота халата, пояс и, отпустив верхний край перчаток, развязывают завязки рукавов, снимают халат, заворачивая наружную часть его внутрь; снимают косынку, осторожно собирая все концы ее в одну руку на затылке; снимают перчатки, проверяют их на целость в дезрастворе (но не воздухом). Еще раз обмывают сапоги (галоши) в баке с дезраствором и снимают их. Необходимо помнить, что после снятия каждой части костюма руки в перчатках погружают в дезраствор.
После снятия противочумного костюма руки тщательно моют с мылом в теплой воде. Защитная одежда обеззараживается после разового применения кипячением в 2% растворе соды (30 мин); автоклавированием (1 атм в течение 30 мин), замачиванием в дезинфицирующем растворе (3% растворе хлорамина в течение 2 ч).
Перечень мероприятий, проводимых при аварийном инфицировании
медперсонала, работающего в очаге
При всякой аварии, повлекшей инфицирование предметов, одежды и открытых участков тела, проводятся следующие меры:
- на время прекращаются оказание медицинской помощи больному, работа с заразным материалом и вызывается начальник;
- пострадавший, не дожидаясь прибытия начальника, приступает к обеззараживанию 70% спиртом или дезинфицирующим раствором всех открытых частей тела, на которые попал заразный материал или имеется подозрение в этом;
- снимает зараженную одежду, предварительно обработав дезинфицирующим раствором, а находившиеся под одеждой подозрительные на соприкосновение с возбудителем части тела обрабатывает дезинфицирующим раствором;
- слизистые оболочки глаз, носа, рта обрабатывают раствором антибиотиков, применяемых при данной инфекции: при чуме - раствором стрептомицина (250 000-500 000 мкг/мл), холере - тетрациклина (200 000 мкг/мл), а при натуральной оспе слизистые оболочки рта, носа, обрабатывают 0,05% раствором марганцовокислого калия, глаза промывают 1% раствором борной кислоты или в глаза вводится несколько капель 1% азотнокислого серебра, в нос - 1% раствор протаргола, рот и горло дополнительно ополаскивают 70% спиртом и внутримышечно вводят противооспенный иммуноглобулин; при неизвестном возбудителе применяют сочетание антибиотиков группы аминогликозидов (стрептомицин, канамицин, мономицин в концентрациях 200 000 мкг/мл) с тетрациклино- вой группой (хлортетрациклин, окситетрациклин, тетрациклин в концентрациях 100 000-200 000 мкг/мл);
- при аварии, связанной с ранением или другим нарушением целости кожных покровов, на место ранения на 4-5 мин накладывают компресс из 6% раствора перекиси водорода или делают ванночку из этого раствора;
- после предварительного обеззараживания пострадавший проходит полную санитарную обработку и надевает чистую одежду, а загрязненная одежда подвергается дезинфекции;
- помещение, в котором допущена авария, и предметы, находящиеся в нем, подвергаются тщательной дезинфекции, объем и вид которой определяется начальником в зависимости от характера аварии;
- начальник, прибывший на место аварии, решает вопрос об объеме экстренных мер защиты (изоляция, медицинское наблюдение, лечение).
Опись укладки для специальной обработки кожных покровов и слизистых оболочек перед надеванием защитной одежды
Медицинский работник, выявивший больного чумой, холерой, контагиозной геморрагической лихорадкой или другими опасными инфекциями, перед одеванием противочумного костюма должен провести обработку всех открытых частей тела. Для этих целей в каждом медицинском пункте, лечебном учреждении должна быть укладка, содержащая:
- навески хлорамина для приготовления 0,5-1% раствора;
- 70% этиловый спирт;
- запас антибиотиков (стрептомицина, тетрациклина, канамицина, мо- номицина);
- навеска марганцовокислого калия для приготовления 0,05% раствора;
- 1 % раствор протаргола; 1 % раствор азотнокислого серебра;
- растворитель антибиотиков;
- стерильные шприцы, иглы, пипетки, салфетки, вата.
Мероприятия по противодействию биологическому терроризму
В настоящее время весьма велика вероятность применения биологических поражающих агентов и химических веществ в диверсионнотеррористических целях, то есть - преднамеренное и скрытое заражение биологическими средствами воздуха и воды, продовольствия (фуража) с помощью диверсионного снаряжения (портативные генераторы аэрозолей, распыливающие пеналы и т.д.).
Этому способствует относительная простота приобретения и использования, низкая стоимость, возможность скрытого применения, селективность действия. Наиболее вероятны действия террористических групп по следующим направлениям:
- диверсии на предприятиях по производству или на гражданских объектах по исследованиям и разработкам соответствующих биологических материалов;
- захват контроля над такими предприятиями и угроза их разрушения в случае отказа выполнения требований террористов;
- похищение или получение другими способами опасных биологических материалов с целью угрозы их распространения или изготовления рецептур биологических агентов и их использования;
- создание паники и дезорганизации общественной жизни путем ложных тревог и угроз применения опасных биологических материалов и оружия.
Перечень боевых биологических поражающих агентов сложился уже достаточно давно, однако выявление новых экзотических заболеваний, возможность использования достижений биотехнологий для получения новых боевых агентов, развитие ряда научных направлений требуют постоянного сбора информации, ее обобщения и анализа и могут дать новые сведения об агентах, позволяющих дополнить уже известные перечни биологических средств.
Современные требования, предъявляемые к БПА, были сформулированы в результате многолетних исследований и нашли свое отражение в ряде официальных военных документов отдельных государств, в частности США. В общем виде они могут быть сведены в следующие положения:
- во всех случаях применения агенты должны вызывать смерть, потерю дееспособности или другой ущерб;
- производство агентов в нужных для военных целей количествах должно быть экономичным и основываться на использовании доступных материалов;
- агенты должны обладать устойчивостью во внешней среде, не терять своих свойств в процессе производства, хранения, транспортировки и боевого применения;
- агенты должны допускать их эффективное применение всеми имеющимися для этих целей средствами. Кроме этого, важными критериями определения боевой пригодности БПА будут являться трудность обнаружения агента после применения в воздухе, воде, на различных объектах и боевой технике, сложность и длительность лабораторного определения вида агента, трудность быстрой диагностики возбудителя заболевания, способность инфекции к широкому эпидемическому распространению, отсутствие или недостаточная эффективность имеющихся в данное время средств иммуно- и экстренной профилактики заболеваний.
Имеется список возбудителей патогенных микроорганизмов, принятый ВОЗ. Необходимо отметить, что во всех опубликованных перечнях количественный и качественный состав биологических агентов постоянно изменяется, однако список «классических» уже в достаточной степени сформирован. Он включает в себя:
1. Возбудителей вирусной природы: натуральная оспа, геморрагические лихорадки Марбурга, Эбола, Ласса, Боливийская геморрагическая лихорадка, венесуэльский энцефаломиелит лошадей, восточный энцефаломиелит лошадей, желтая лихорадка, японский энцефалит, лихорадка денге, лихорадка долины Рифт, геморрагическая лихорадка с почечным синдромом, Конго-крымская геморрагическая лихорадка.
2. Возбудители риккетсиозной природы: эпидемический сыпной тиф, пятнистая лихорадка Скалистых гор, Ку-лихорадка.
3. Возбудители бактериальной природы - чумы, сибирской язвы, туляремии, сапа, мелиоидоза, бруцеллеза, легионеллеза.
4. Токсины растительного и животного происхождения: Ботулиниче- ские токсины, столбнячный, сибиреязвенный, шигеллезный, стафилококковый энтеротоксины, рицин, нейротоксины и др.
Список потенциальных агентов БПА, изучаемых методами генной инженерии для разрешенных целей, помимо вышеперечисленных агентов, включает в себя альфавирусы (вирус речной слепоты), флавивирусы (вирус энцефалита Сан-Луи, вирус клещевого энцефалита, вирус желтой лихорадки).
Возросший интерес к вирусам связан с тем, что работа с ними стала возможной благодаря развитию и внедрению в практику генноинженерных методов, позволяющих обезопасить и облегчить исследования. Большинство вирусных заболеваний до сих пор не имеет эффективных средств специфического лечения. Значительная часть изучаемых вирусных заболеваний трудно диагностируется. Большинство вакцин против вирусных инфекций находится в стадии разработки. Кроме того, вирусы способны вызывать иммуносупрессию у инфицированного хозяина и, таким образом, делать его высокочувствительным к суперинфицированию другими инфекционными агентами.
Интерес к токсинам вызван целым рядом преимуществ перед возбудителями инфекционных заболеваний. Они более стабильны при хранении и применении, их можно легко и в больших количествах получить в научноисследовательских лабораториях, возможно скрытное применение в диверсионно-террористических целях и, что очень важно, практически отсутствует инкубационный период заболевания, что приближает токсины по тактическим характеристикам к химическому оружию. В целом данные по свойствам биологических токсинов в доступной литературе очень скудные. Известны лишь источники выделения токсинов и предположительный механизм их действия. Однако степень токсичности не всегда является решающей. Например, стафилококковый энтеротоксин В умеренно токсичен, тем не менее в военных кругах США его считают мощным средством, временно выводящим из строя.
Особое положение среди вероятных агентов БПА занимают возбудители контагиозных заболеваний - чумы, натуральной оспы, лихорадок Марбурга и Эбола. Способность к развитию эпидемического процесса и его нарастанию в пространственно-временных границах повышает вероятность боевого использования этих агентов также и в современной войне с применением ОМП.
Эффективность биотеррористических актов зависит не только от поражающих свойств БПА, но и от правильного выбора способа их применения. Способы боевого применения БС базируются на способности пато-
генных микроорганизмов и токсинов в естественных условиях проникать в организм человека следующими основными путями:
- с воздухом через органы дыхания;
- с пищей и водой через желудочно-кишечный тракт;
- через слизистые оболочки рта, носа, глаз, кожные покровы;
- в результате укусов зараженных кровососущих членистоногих через неповрежденную кожу.
Предполагается, что можно создать химические вещества и (или) биологические агенты, способные в течение короткого периода времени разрушить материалы военного назначения (резину, пластмассы, тканевые и брезентовые покрытия, уничтожить продовольственные запасы, загрязнить и сделать непригодными к использованию горюче-смазочные материалы). До сих пор такие вещества рассматривались лишь как диверсионные средства. Ожидается, что вещества, выводящие из строя двигатели военных машин, разрушающие горюче-смазочные, уплотнительные материалы, брезентовые, пластмассовые и деревянные укрытия и тару, а также «изменяющие свойства почвы и растительности» затруднят действия противника без непосредственного уничтожения живой силы.
Создание химических веществ и биологических агентов, не оказывающих вредного воздействия на человека и животных и не нарушающих экологическое равновесие природы, но способных поражать органические материалы, довольно проблематично. В то же время в рамках создания подобного оружия могут быть развернуты исследования и разработки нового поколения БПА.
Благодаря достижениям биотехнологии стало возможным в течение нескольких недель наладить крупномасштабное производство БПА с заданными свойствами, располагая небольшим исходным запасом. Значительно сократились сроки разработки биологических рецептур. Новая технология микрокапсулирования позволяет устранить один из главных недостатков БПА - слабую устойчивость к факторам внешней среды, что обеспечивает более высокую длительность хранения и безопасность транспортировки.
Наиболее перспективными направлениями биотехнологических исследований и разработок, результаты которых могут быть использованы в военно-прикладных целях, являются следующие.
Микрокапсулирование - процесс упаковки небольших количеств твердых, жидких или газообразных веществ в индивидуальные, изолирующие их от внешней среды оболочки различной природы. Этот метод находит широкое применение в биотехнологии и фармацевтической промышленности, что связано с большими возможностями.
Программа расшифровки генома человека. В результате выполнения программы станет возможным управлять наследственностью и изменять структуру и функции жизненно важных для организма белков и ферментов. Следует также подчеркнуть принципиальную возможность применения результатов исследований по этой программе в целях разработки этнического оружия. Расшифровка генома людей, принадлежащих к разным этническим группам, позволит выявить генетические различия, обусловливающие разную восприимчивость к некоторым инфекционным заболеваниям и токсическим веществам.
Одной из быстроразвивающихся областей биотехнологии является белковый дизайн, т.е. конструирование белков с использованием компьютерного моделирования. Этот метод давно применяется зарубежными фирмами для создания новых лекарственных средств и химических препаратов. Теоретически метод открывает широчайшие перспективы целенаправленного синтеза любых белковых молекул.
Для модификации потенциальных агентов БПА могут быть использованы различные методы генной инженерии, включая метод направленного мутагенеза и метод транслокации генов. Первый метод дает возможность вызывать желаемые мутации генов, которые в норме вообще не мутируют или мутируют с очень низкой частотой, и во много раз ускоряет процесс селекции микроорганизмов с желаемыми свойствами. Второй позволяет осуществить перенос генов между различными микроорганизмами с целью изменения их свойств (патогенности, вирулентности, устойчивости к антибиотикам и др.).
С целью противодействия биологическому терроризму целесообразно приведение специальных мероприятий, проводимых командованием, разведывательными подразделениями родов войск и отдельными службами в целях выявления, сбора и обработки любой информации по подготовке вероятных биотеррористических актов, то есть биологическая разведка.
Основные мероприятия биологической разведки:
1. Постоянное наблюдение за воздухом и местностью для обнаружения признаков применения БПА;
2. Неспецифическая индикация, то есть обнаружение объективных признаков, свидетельствующих о применении БПА;
3. Специфическая индикация - подтверждение биотеррористического акта и определение вида БПА.
Специфическая индикация биологических поражающих агентов
Специфическая индикация (СИ) - комплекс специальных мероприятий, проводимых медицинской и ветеринарно-санитарной службами для подтверждения факта применения БО (при положительных результатах неспецифической индикации) и определения вида БПА.
Ее осуществление возлагается:
- на лабораторные подразделения СЭУ армий, фронтов, военных округов, флотов, санитарно-эпидемиологических отделов управления госпитальных баз (СЭО УГБ), а также на ПСЭО воздушных армий и другие равные им лабораторные подразделения санитарно-эпидемиологических учреждений армий и фронта;
- лаборатории ветеринарно-эпизоотологических отрядов и других учреждений ветеринарно-санитарной службы.
К проведению специфической индикации могут привлекаться микробиологические лаборатории инфекционных госпиталей и научноисследовательских учреждений страны.
С учетом особенностей современных боевых действий, обусловливающих частые передислокации санитарно-эпидемиологических учреждений, и необходимости в связи с этим поэтапного последовательного исследования проб в различных лабораториях организация специфической индикации БС предусматривает строгое соблюдение принципа преемственности в работе (рис. 9).
В первую очередь исследованию подлежат:
- пробы воздуха;
- осколки и содержимое биологических боеприпасов;
- смывы из носоглотки людей, оказавшихся без защиты в зоне прохождения аэрозольного облака;
- материалы от внезапно заболевших людей (животных).
Рис. 9. Принципиальная схема анализа проб |
В основе специфической индикации БПА лежат методы лабораторного экспресс-анализа проб с помощью прямого метода флюоресцирующих антител или реакции непрямой гемагглютинации по единой схеме, предусматривающей два взаимодополняющих этапа исследования:
- первый этап - выявление БПА с помощью экспресс-методов непосредственно в нативной пробе без ее биологического обогащения;
- второй этап - выявление и идентификация БПА с помощью экспресс-методов анализа проб после их предварительного биологического обогащения путем накопления содержащихся в них возбудителей на питательных средах, в культурах клеток, а также в органах и тканях чувствительных лабораторных животных (рис. 6).
Причем определение БС может проводиться как в сокращенном, так и в полном объеме, что зависит от возможности проводящих исследование лабораторий. Сокращенный объем исследований при этом предусматривает проведение экспресс-анализа только на первом этапе схемы специфической индикации БС, т.е. исследование материала без биологического накопления. При этом 2/3 пробы отделяется для пересылки в СЭО армии или фронта (рис. 10).
Рис. 10. Схема специфической индикации БС в сокращенном объеме |
Полный объем исследования проводится в 2 этапа и предусматривает выявление и идентификацию до вида, содержащихся в пробах БС любой таксономической принадлежности (бактерий, риккетсий, хламидий, вирусов, грибов, токсинов) при исследовании, как нативных материалов, так и проб после биологического обогащения (рис. 11).
Работу начинают с приема, регистрации, разработки и сортировки поступившего материала. Определяют очередность исследования доставленных проб, нумеруют их, устанавливают порядок усреднения, который допускается при поступлении большого количества проб. Усредняются однородные пробы в количестве 3-5, не усредняются пробы, подлежащие первоочередному исследованию. Далее выделяют пробы, которые в нативном состоянии должны быть исследованы МФА и РНГА.
Объединение этих проб не допускается!
Рис. 11 Схема специфической индикации бактерий, риккетсий, хламидий, вирусов и токсинов |
В первую очередь необходимо исследовать осколки биологических боеприпасов, а также материал около места разрыва, пробы воздуха в местах предполагаемого застоя аэрозоля, смывы из носоглотки людей, находившихся в очаге без средств защиты, внезапно заболевших или умерших.
Далее приступают к первичной обработке и подготовке проб к исследованию. Из нативного материала, который не подлежит концентрации, готовят мазки или мазки-отпечатки для иммунофлюоресцентной микроскопии на 3-х предметных стеклах по 8-10 на каждом.
Сухие пробы (пищевые продукты, пыль, почва, фураж и т.д.) растирают в ступке или измельчают ножницами и заливают стерильным физраствором до получения 20% концентрации. Взвесь отстаивается 3-10 минут.
Жидкость над осадком фильтруют через 3 слоя марли.С осколков боеприпасов, растений делают смывы (3-5 мл физраствора), готовят мазки и добавляют физраствор до 22 мл. Тампоны заливают 2-3 мл физраствора, встряхивают и отжимают. Желатиновый фильтр заливают 30-40 мл физраствора и выдерживают при 37 °С 30 мин на водяной бане, затем встряхивают до получения однородной взвеси.
Доставленные членистоногие (мухи, вши, слепни, клещи и т.д.) группируются по 50-100 экземпляров каждого вида. Живые паразиты в доставленной посуде обрабатывают эфиром 1-2 мин для обездвиживания.
У насекомых отделяют желудочно-кишечный тракт и из каждого готовят мазки-отпечатки для иммунолюминесцентной микроскопии. Остальных обрабатывают 70% спиртом 3-5 секунд, промывают стерильным физраствором, растирают в ступке с несколькими каплями физраствора, затем добавляют физраствор до 22 мл. Если исследуемый материал доставлен в объеме 50 мл и больше, то его фильтруют или центрифугируют. Фильтруют через мембранный фильтр №3, установленный в приборе Зейтца. После фильтрации фильтр переносят в стерильную чашку Петри, измельчают и заливают 3-5 мл физраствора. Из смыва или из суспензии осадка после центрифугирования делают мазки для иммунолюминесцентной микроскопии. К оставшейся части смыва или суспензии добавляют физраствор до объема 22 мл. Полученный объем делят на 6 частей (рис. 12).
Вторая часть 20,0 мл используется для посева на питательные среды и постановки биопробы на ботулотоксин. Для возбудителя чумы используют агар Хоттингера с генциан-виолетом 1:100 000 и с одним из стимуляторов роста (кровь, сульфит натрия); палочки сибирской язвы - агар Хот- тингера с нанесенной на поверхность желточной эмульсией, возбудителя туляремии - агар Хоттингера с желтком; бруцеллеза - агар Хоттингера; палочек Сапа и мелиоидоза - 3-4% глицериновый Хоттингеровский агар; грибов - агар Сабуро с глюкозой. Оставшийся исследуемый материал вводят по 0,5 мл внутрибрюшинно 2 мышам для обнаружения ботулотоксина, контролем опыта служат 4 мыши, используемые для биологического обогащения пробы. Исследуемый материал вводят в смеси с поливалентной противоботулинической сывороткой.
Третья часть в объеме 2,5 мл используется для заражения 4-х белых мышей. Животных за 4 часа до введения материала обрабатывают кортизоном для понижения сопротивляемости организма (по 0,5 мг в/м). Материал вводят внутрибрюшинно в дозе 0,5 мл в смеси с 0,5 мл поливалентной антитоксической противоботулинической сывороткой (для нейтрализации ботулотоксина).
Первая часть смыва или суспензии в количестве 2,0 мл используется для постановки РНГА.
Рис. 12. Распределение смыва (суспензии осадка) для анализов |
Четвертую часть материала в количестве 4,0 мл используют для накопления риккетсий и хламидий. Для этого во флаконе добавляют 0,1 мл сыворотки крови крупного рогатого скота и 0,1 мл смеси антибиотиков (4000 Ед/мл пенициллина + 2000 Ед/мл стрептомицина), выдерживают не менее часа в холодильнике и заражают культуру клеток, используя для этого 8 пробирок с монослоем клеток на пластинках.
Пятую часть материала в количестве 8 мл используют для вирусологических исследований. Ее центрифугируют 20 минут при 2 000 оборотов или фильтруют через 3 слоя марли. Фильтрат или жидкость над осадком после центрифугирования обрабатывают антибиотиками, добавляя 0,1 мл раствора антибиотиков 80 000 Ед/мл пенициллина + 40 000 Ед/мл стрептомицина, выдерживают 2 часа при комнатной температуре и вводят 4 белым мышам-сосункам интерцеребрально в количестве 0,03 мл. Наряду с заражением животных надосадочную жидкость, обработанную антибиотиками и выдержанную не менее часа в холодильнике, вносят по 0,2 мл в 18 пробирок с клеточной культурой на стеклянных пластинках.
Шестая часть используется для повторения или продолжения исследования.
Посевы на питательных средах просматриваются через 12, 18, 24, 30, 36 и 44 часа. При появлении подозрительного роста готовят мазки для иммунофлюоресцентной микроскопии и взвесь для РНГА. Чашки с посевом сохраняют до окончания индикации, а затем их уничтожают, в случае необходимости выделяют чистую культуру. Животные, погибшие после заражения, немедленно вскрываются. Если мыши не погибли, то их забивают: 2-х - через 20-22 часа и 2-х - через 40-42 часа после заражения.
Из селезенки и брюшины готовят мазки-отпечатки для иммунофлюоресцентного исследования и суспензии для постановки РНГА.
Наблюдение за зараженными мышами для обнаружения ботулотокси- на проводится в течение 48 часов. Если за этот срок животные не погибают, то наблюдение продолжается до 4-х суток. Выжившие мыши могут быть использованы для исследования на бактерии, риккетсии и вирусы. Животные, погибшие после интерцеребрального заражения, также вскрываются. Если животные выжили, то 2-х из них забивают и вскрывают через 42-46 часов после заражения, а 2-х других оставляют для контроля и наблюдают в течение 72 часов, а затем забивают. Из оболочек и срезов мозга готовят мазки-отпечатки, а при комбинированном заражении их готовят из селезенки и других органов.
Зараженные клеточные культуры исследуются следующим образом: через 20-24 часа и 42-46 (72) часов пластинки с монослоем тканевой культуры вынимают, высушивают и используют для постановки МФА, остающаяся культуральная жидкость может быть использована для постановки РНГА.
Мазки для МФА фиксируют на холоде (2-4°С) в течение 15-20 мин в химически чистом ацетоне. Окраску мазков проводят прямым методом. Используют полугрупповые, группо- и видоспецифические люминесци- рующие иммуноглобулины. Из нативного материала рекомендуется окрасить на 1 стекле: 1-й квадрат - полугрупповой бактериальной люминесцентной сывороткой, 2-й квадрат - полугрупповым риккетсиозным иммуноглобулином, 3-й и 4-й квадраты - полугрупповыми вирусными иммуноглобулинами (2 препарата), 5 - кокцидиозным иммуноглобулином.
Если с каким-либо полугрупповым диагностическим препаратом будет получен положительный результат, то дополнительно окрашиваются 2 стекла - 2-е и 3-е, которые являются резервными. Второе стекло окрашивают видоспецифическими бактериальными люминесцирующими иммуноглобулинами, а 3-е - видо- и группоспецифическими риккетсиозными или вирусными иммуноглобулинами.
Если полугрупповые диагностические препараты отсутствуют, то для окраски мазков сразу используют видо- и группоспецифические люминес- цирующие иммуноглобулины: для 2-го стекла - к возбудителям чумы, туляремии, бруцеллеза, сибирской язвы (универсальные или антиспоровые), сапа и мелиоидоза; для 3-го стекла - к возбудителям эпидемического сыпного тифа, Ку-лихорадки, группы клещевых пятнистых лихорадок, пситтакоза, оспы и кокцидиоидоза. Резервным стеклом остается первое.
При целенаправленном исследовании проб воды к числу бактериальных диагностических препаратов в ряде случаев добавляют холерный лю- минесцирующий иммуноглобулин.
Для того, чтобы сыворотки не подсыхали, препараты выдерживают под чашкой Петри, внутреннюю поверхность которой смачивают водой. После окрашивания препараты тщательно отмывают в течение 10 мин в 23 порциях физраствора и ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и исследуют под люминесцентным микроскопом с иммерсионным объективом, используя нефлюоресцирующее масло или химически чистый диметилфталат. Фон препарата будет оранжевокрасный, а микроорганизмы, соответствующие иммунной сыворотке, будут светиться изумрудным или желто-зеленым цветом.
Для получения достоверных результатов исследования (особенно при малых количествах возбудителя в пробе) под люминесцентным микроскопом просматривают не менее 20-25 полей зрения. Результаты считаются положительными, если в препарате обнаруживаются хотя бы единичные (для мелких риккетсий и бактерий - не менее 10 особей) морфологически типичные микроорганизмы или пораженные вирусом, а также риккетсиями, хламидиями тканевые клетки (не менее 3-5 в препарате), специфически флюоресцирующие на 3-4 креста, при отрицательных контролях.
Результат отмечают по четырехкрестовой системе:
++++ - очень яркое свечение изумрудного или желто-зеленого цвета, и морфология микроорганизмов, по краям которых могут быть ярко светящиеся «ободки», очень четко выражена;
+++ - яркое свечение желто-зеленого цвета, и морфология возбудителя достаточно отчетливо выражена, часто со светящейся периферией;
++ и + - свечение в основном желтое, слабое, и морфология возбудителя нечетко или совсем не выявляется, ободки отсутствуют.
Результат считается положительным, если флюоресценция идет на +++. Для контроля мазки обрабатывают гетерологичными иммунными флюоресцирующими сыворотками. При вирусологических исследованиях контроли делают из нормальных тканевых культур и из органов здоровых животных.
При иммунолюминесцентной микроскопии морфология микроорганизмов может измениться: увеличиваются размеры, интенсивнее красятся края клетки, т.к. антитела адсорбируются по периферии гомологичных микроорганизмов.
Для обнаружения чумного микроба и его дифференциации от псевдотуберкулезного методом ФА используют капсульно-соматическую противочумную сыворотку и адсорбированную противопсевдотуберкулезную. Первая выявляет оба возбудителя, а вторая - лишь псевдотуберкулезную палочку. Поэтому, если отмечается специфическое свечение с первой сывороткой при отсутствии такового со второй, то это указывает на присутствие возбудителя чумы. Он имеет форму палочки, чаще овоидной формы с «ободком» и в бульонной культуре располагается цепочкой.
При обнаружении возбудителей сапа и мелиоидоза следует помнить, что они по морфологическим, биологическим и антигенным свойствам близки. Для их дифференциации используют адсорбированные иммунные сыпную и мелиоидозную сыворотки или неадсорбированную последнюю, которая выявляет оба возбудителя, а также мелиоидозную «ОН» сыворотку, выявляющую только палочку мелиоидоза. В положительном случае под микроскопом видны прямые или слегка изогнутые палочки различной величины с ярко светящейся периферией. Могут встречаться кокковидные и нитевидные особи.
Возбудители бруцеллеза и туляремии, обработанные соответствующими сыворотками, под микроскопом выглядят в виде очень мелких коккобактерий.
Для индикации сибиреязвенной палочки мазки окрашивают сибиреязвенным универсальным люминесцирующим иммуноглобулином, а при его отсутствии смесью из равных объемов антиспорового и капсульносоматического люминесцирующих иммуноглобулинов.
Сибиреязвенная бацилла под микроскопом имеет вид крупной палочки с обрубленными концами, палочки располагаются в одиночку, парами или цепочками. Споры имеют округлую или овальную форму.
Возбудители кокцидиоидомикоза бывают в двух формах: тканевой и культуральной. Применяются люминесцирующие иммуноглобулины против тканевой фазы возбудителя, они специфически окрашивают, как ми- целиальную, так и тканевую фазу гриба и не выявляют возбудителей ги- стоплазмоза и бластомикоза. В препаратах, обработанных соответствующими сыворотками, возбудители флюоресцируют зеленым цветом в виде бочкообразных и прямоугольных клеток, расположенных свободно или по ходу мицелия.
В качестве БС наиболее вероятно применение возбудителей эпидемического сыпного тифа, пятнистой лихорадки Скалистых гор и Ку-лихорадки.
Используются иммунные меченые риккетсиозные сыворотки как полигрупповые, так и видо- и группоспецифические. Под люминесцентным микроскопом обнаруживаются разнообразные по форме и размерам образования в виде мелких овоидов, коротких и длинных палочек, иногда парнорасположенных бациллярных форм и извитых нитей, светящихся зеленым цветом.
Вокруг возбудителей из групп сыпного тифа, клещевых пятнистых лихорадок и цуцугамуши отмечается ярко флюоресцирующий ободок по периферии, а для риккетсий Бернета характерно диффузное свечение всей клетки.
Индикация возбудителя пситтакоза осуществляется методом флюоресцирующих антител в модификации с контрастированием неспецифического свечения. Специфические флюоресцирующие групповые сыворотки позволяют выявить типичные элементарные тельца, результаты индикации могут только установить факт присутствия представителя из группы пситтакоза-орнитоза.
В препаратах возбудитель пситтакоза выявляется в виде ярко светящихся изумрудно-зеленым цветом (на оранжево-буром фоне) округлых образований разных размеров (от 0,2 до 0,5), располагающихся по отдельности, группами или компактными соединениями. Характерной особенностью специфической флюоресценции микроорганизмов группы пситтакоза является наличие вокруг них четко обозначенного ярко флюоресцирующего периферического «ободка». Имеет значение и количество выявленных в препарате особей или их скоплений.
Специфическая индикация вирусов во внешней среде, а также в переносчиках, природном резервуаре вирусов и в организме человека проводится по единой схеме.
МФА при исследовании мазков из нативного материала может обеспечить выявление лишь крупных возбудителей (вируса натуральной оспы, Марбург, Эбола).
Вирус натуральной оспы выявляется противооспенной флюоресцирующей сывороткой, которая окрашивает все другие вирусы подгруппы осповакцины (алястрим, вирус коровьей оспы, вирус вакцины и др.). Поэтому окончательный ответ может быть выдан после дифференциации от других вирусов по специальным тестам, как например, выращивание зараженных клеточных культур при «критических» температурах (37 °С, 38 °С, 39-40 °С). Вирус оспы размножается при температуре не выше 38- 38,5°С, а вирусы вакцины и коровьей оспы - при всех указанных температурах, вирус алястрима - при 37-37,5 °С.
В мазках, обработанных флюоресцирующей сывороткой, обнаруживаются элементарные тельца Пашена в виде мельчайших округлых образований, ярко флюоресцирующих изумрудно-зеленым цветом. Могут обнаруживаться и скопления элементарных телец - включения в виде более крупных образований различных форм и размеров.
Для окончательного отрицательного ответа необходимо наблюдать за зараженными культурами клеток в течение 6 дней, а не 48 часов, как это предусмотрено схемой. Поэтому в неясных случаях исследование необходимо продолжить.
Возбудители аргентинской (вирус Хунин), боливийской (вирус Мачупо) геморрагических лихорадок и лихорадки Ласса являются членами семейства ареновирусов. Люминесцирующие сыворотки не обеспечивают диффере
Источник: Коллектив авторов, «ВОПРОСЫ военной эпидемиологии Учебное пособие» 2015
А так же в разделе «Порядок снятия костюма »
- Введение
- Учебная программа дисциплины (выписка)
- Цель занятия
- Задачи изучения
- Указания по изучению
- Содержание и структура занятий
- Ориентировочная основа деятельности
- Основные понятия
- Становление и развитие военной эпидемиологии
- Особенности этиологической структуры инфекционной заболеваемости в военное время и при стихийных бедствиях
- Пути заноса инфекции в войска и факторы (условия), влияющие на развитие и проявления эпидемического процесса в чрезвычайных ситуациях и в военное время
- Мероприятия по предупреждению заноса и возникновения инфекционных заболеваний
- Санитарно-противоэпидемические (профилактические) мероприятия на ЭМЭ
- Мероприятия по предупреждению заноса и выноса за пределы ЭМЭ инфекционных болезней
- Дезинфекция
- Стерилизация
- Дезинсекция
- Дератизация
- Профилактические прививки
- Войсковой район (до 30 км)
- Армейский район (до 60 км)
- Фронтовой район (до 90—120 км)
- Изоляционно-пропускной пункт
- Санэпидотдел УГБФ
- Основные задачи и принципы использования санитарно-эпидемиологических подразделений
- Военно-полевые госпитали -
- Содержание и организация санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий в войсках
- Планирование профилактических мероприятий в войсках
- Биологическое оружие. Основы биологической защиты. Биологическая разведка
- Понятие о биологическом оружии
- Особенности поражающего действия БО:
- Технические средства биологического нападения
- Тактика и способы применения биологического оружия
- Понятие о районе (очаге) биологического заражения (ОБЗ)
- Общие принципы организации защиты войск и объектов тыла от биологического оружия
- Санитарно-эпидемиологическая разведка (СЭР)
- Биологическая разведка
- Оценка биологической обстановки
- Мероприятия по защите войск от биологического оружия, проводимые в мирное время
- Мероприятия по защите войск от биологического оружия, проводимые в период угрозы биологического нападения
- Мероприятия по защите войск в период применения биологического оружия
- Мероприятия по защите войск в период ликвидации последствий биологического нападения
- Санитарно-противоэпидемические (профилактические) мероприятия, проводимые при ликвидации эпидемических очагов и очагов биологического заражения
- Организация лечебно-эвакуационных мероприятий в условиях применения противником БО
- Специальная обработка войск в ОБЗ
- Санитарная обработка личного состава
- Дезинфекция местности, помещений и сооружений
- Обеззараживание воды
- Обеззараживание продовольствия
- Дезинсекция на этапах медицинской эвакуации
- Дератизация
- Иммунопрофилактика -
- Средства иммунопрофилактики
- Методы иммунизации
- Порядок проведения иммунопрофилактики
- Поствакцинальные реакции и их купирование
- Поствакцинальные осложнения и их лечение
- Противопоказания к иммунизации
- Вакцинопрофилактика, проводимая лицам из числа молодого пополнения
- Вакцинопрофилактика, проводимая лицам, проходящим службу по контракту
- Вакцинопрофилактика, проводимая личному составу медицинской службы Вооруженных сил
- Иммунопрофилактика личного состава по эпидемическим показаниям
- Экстренная профилактика
- Сочетанное проведение экстренной профилактики и иммунопрофилактики в очаге биологического заражения
- Режимно-ограничительные мероприятия
- Обсервация
- Карантин
- Противоэпидемический и строгий противоэпидемический режим в военное время
- Обычный противоэпидемический режим
- Организация работы этапов медицинской эвакуации в условиях строгого противоэпидемического режима
- Требования противоэпидемического режима при организации питания больных
- Требования противоэпидемического режима при организации водоснабжения
- В военное время СПЭР в МПП -
- Содержание и назначение мероприятий СПЭР работы медицинского пункта части (организации), отдельного медицинского батальона (роты) и лечебно-профилактического учреждения
- Перевод медицинского пункта части (организации, поликлиники) на работу в условиях СПЭР при выявлении больного (подозрительного) опасной инфекцией (синдромом)
- Особенности проведения противоэпидемических мероприятий при выявлении больного (подозрительного) опасной инфекцией (синдромом) в лазарете медицинского пункта
- Содержание и порядок проведения мероприятий СПЭР в госпитале (отдельном медицинском батальоне, медицинской роте) при выявлении больного (подозрительного) опасной инфекцией (синдромом)
- Особенности проведения противоэпидемических мероприятий при выявлении больного (подозрительного) опасной инфекцией (синдромом) в лечебном отделении госпиталя (отдельном медицинском батальоне, медицинской роте)
- Обязанности должностных лиц госпиталя (отдельного медицинского батальона, медицинской роты) при проведении мероприятий по локализации очага опасного инфекционного заболевания (синдрома)
- Инфекционное отделение (нештатный инфекционный изолятор)
- Организация материального обеспечения госпиталя (отдельного медицинского батальона, медицинской роты)
- Классификация медицинских средств защиты от поражений факторами биологической природы Средства санитарно-эпидемиологической разведки и лабораторной диагностики инфекций
- Средства обеззараживания, санитарной обработки и стерилизации медицинского имущества
- Защитная одежда и порядок ее применения
- Порядок работы учреждений, проводящих специфическую индикацию
- Задания для самоподготовки
- Приложение № 1 Санитарно-эпидемиологическая разведка населенного пункта: задание к практическому занятию