Развитие лазерной техники в настоящее время достигло такого уровня, что с её помощью оказывается возможным решать многие технические проблемы. Лазерная технология применима для объектов из самых разнообразных материалов, находящихся в различных агрегатных состояниях, среди которых наиболее интересными и сложными являются биологические. Лазерная биотехнология имеет непосредственное отношение к ряду глобальных проблем человечества, таких, как рак, СПИД, защита окружающей среды от загрязнений и т.д. Среди большого круга вопросов, рассматриваемых в рамках современной лазерной биотехнологии, можно выделить:

• лазерную хирургию и деструкцию биотканей;
• лазерную терапию;
• лазерную диагностику.

Особые свойства света использовались в медицине задолго до изобретения лазеров. Так, традиционная фотобиология с использованием обычных (тепловых) источников света, таких как: лампы накаливания, газоразрядные приборы, излучение Солнца, довольно успешно развивалась в течение многих лет. Имеются существенные достижения в понимании процессов фотосинтеза растений и бактерий, выяснении природы зрения, фотопериодических явлений и т.д.
Появление лазеров стимулировало дальнейшее быстрое развитие фотобиологии, постановку и успешное решение многих проблем, которые раньше или вовсе не ставились (из-за отсутствия соответствующих источников излучения) или решались косвенным путём.
В отличие от тепловых источников света лазеры обладают высокой степенью монохроматичности, высокой степенью временной и пространственной когерентности, высокой степенью направленности и поляризованности излучения при значительной его интенсивности и яркости, могут перестраиваться по длинам волн, могут излучать световые импульсы рекордно короткой длительности.
За период развития лазерной физики и техники был создан широкий арсенал лазеров и лазерных систем, по своим параметрам в значительной мере удовлетворяющих потребности лазерной технологии, включая биотехнологию. Однако сложность строения биологических объектов, значительное разнообразие в характере их взаимодействия со светом определяют необходимость использования многих типов лазеров и лазерных систем в фотобиологии, а также стимулируют разработку новых лазерных средств, включая и средства доставки лазерного излучения к объекту исследования или воздействия.
В лазерных биотехнологиях широко используются надёжные, с большим сроком службы газоразрядные лазеры, высокоинтенсивные химические и эксимерные лазеры, перестраиваемые в широком диапазоне длин волн жидкостные лазеры на красителях, высокоинтенсивные твердотельные лазеры со сверхкороткой длительностью импульсов, малогабаритные полупроводниковые лазеры и др.
Известно, что лазеры перекрывают широкий диапазон длин волн, уровни выходной мощности непрерывных лазеров и средней мощности импульсных составляют от нескольких милливатт до десятков и сотен ватт, энергия в импульсе изменяется в пределах от нескольких миллиджоулей до нескольких джоулей, длительности импульсов также изменяются в широком диапазоне: от нескольких миллисекунд до единиц пикосекунд, ширина линии излучения лазеров от нескольких килогерц до десятков гигагерц, угловая расходимость составляет от десятков градусов до долей миллирадиана.
Специальные оптические системы на основе лазеров значительно расширяют возможности лазерного излучения. Так, преобразование частоты излучения с помощью средств нелинейной оптики позволяет увеличить диапазон длин волн и осуществить непрерывную перестройку длин волн в широкой области, эффективно усиливать излучение малой мощности, существенно сокращать длительность              (до              единиц
фемтосекунд), уменьшать ширину линии (до единиц и долей герца), увеличивая тем самым длину когерентности лазера (до сотен километров).
Для целого ряда методов, таких, как упругое и квазиупругое рассеяния, достаточно иметь лазер, работающий на фиксированной длине волны с умеренной или даже малой мощностью излучения (единицы милливатт). Другие применения, в том числе спектроскопия комбинационного рассеяния, требуют более мощных лазеров с перестройкой длины волны излучения (десятки и сотни милливатт). Ещё большие уровни мощности или даже режим импульсной генерации необходимы для лазерного спектрального анализа и лазерной масс-спектроскопии. При изучении фотобиологических процессов малой длительности (фотоионизация, превращение молекул) используются лазеры с короткими и сверхкороткими импульсами.
Отсюда следует, что успех лазерной биотехнологии в значительной мере зависит от выбора источника лазерного излучения и средства доставки излучения к биообъекту. Т.е. данный выбор должен быть адекватен решаемой задаче. В связи с этим наряду с описанием взаимодействия лазерного излучения с биотканями много внимания мы уделим также описанию разнообразных лазеров, волоконных световодов и волоконно-оптических систем, уже применяемых или перспективных для применения в медицине.
Лазерное излучение так же, как и обычный свет (от нелазерных источников),              может поглощаться, отражаться, рассеиваться и
переизлучаться биологической средой. Каждый из указанных процессов несёт информацию о микро- и макроструктуре этой среды, движении и форме отдельных её составляющих.
Световой диапазон длин волн простирается от десятков нанометров до десятков микрометров и делится на ультрафиолетовый (УФ), видимый и инфракрасный (ИК) диапазоны. Энергия фотона зависит от его длины волны (или частоты):
С
E = hv = 2 лк— ,              (1-1)
Я
где к - постоянная Планка (6,626х10-34 Джс); v - частота (с-1); Я - длина волны (м); c - скорость света в веществе (м/с).
Фотоны малых энергий, дальнее ИК излучение, излучение крайне высоких частот (КВЧ) и сверхвысоких частот (СВЧ) радиодиапазона могут оказывать селективное действие на некоторые биомолекулы, например, за счёт возбуждения вращательных уровней (ОН-группы валентного колебания свободной или связанной воды в биологических соединениях), механических колебаний макромолекул или акустических колебаний в клеточных мембранах, но в основном их действие неспецифическое и сводится к тепловому. Фотоны рентгеновского и более коротковолнового излучения имеют настолько высокую энергию, что могут с одинаковой эффективностью ионизировать любую молекулу, входящую в состав сложноорганизованной биологической              материи,              поэтому их
взаимодействие с молекулами не зависит от химической природы молекул. Лазерное излучение умеренной интенсивности оказывает неспецифическое тепловое, а высокой интенсивности - разрушающее (деструктивное) действия на биообъекты, т.е. проявляет себя как электромагнитное излучение любой другой природы. В отличие от нелазерных источников света тепловое действие и фоторазрушение могут быть осуществлены в очень малых объёмах (в пределах клетки или даже её частей).
Процессы, характеризующие взаимодействие лазерного излучения с биообъектами, можно разделить на три группы. К первой группе относятся все невозмущающие процессы (по крайней мере не оказывающие заметного действия на биообъект в пределах ошибок измерений). Ко второй - процессы, в которых проявляется фотохимическое или тепловое действие. К третьей - процессы, приводящие к фоторазрушению.
Поскольку лазерные биотехнологии имеют дело с живыми объектами, то помимо физико-химических проявлений светового излучения необходимо учитывать влияние света на функционирование живой материи, определяющееся степенью гомеостаза живого объекта. Степень гомеостаза определяет специфические реакции организма на внешний раздражитель, является функцией эволюционного развития и оказывается наименьшей у биологических молекул и наивысшей у позвоночных животных. Излучение малой интенсивности не запускает адаптационные механизмы биосистемы, т.е. не затрагивается её гомеостаз. При небольшом увеличении интенсивности излучения происходят лишь возмущения локального гомеостаза, и не во всяких исследованиях они обнаруживаются. Рост интенсивности включает общие адаптационные и
регуляционные механизмы живого              объекта,              полностью
восстанавливающие систему, если интенсивность не слишком велика. При дальнейшем увеличении интенсивности они уже не справляются с полным восстановлением системы и происходят частично необратимые процессы. Такие необратимые изменения нарастают, и производят разрушения в системе, но объект можно ещё считать "живым" (в хирургии различают понятия полного и частичного некроза). В области очень больших интенсивностей разрушения оказываются настолько значительными, что объект уже не может считаться "живым". При сравнительно малых интенсивностях оказывается возможным с помощью света изучать процессы, происходящие в живом объекте, не внося серьёзных возмущений в его поведение. Представляет интерес область очень малых интенсивностей, в которой возможно применение ряда наиболее чувствительных методов исследования, не требующих сильных световых потоков и, следовательно, не вносящих искажений в результаты измерений за счет гомеостаза живой материи даже на локальном уровне. В области очень больших интенсивностей измерения также оказываются неискажёнными за счёт регуляторных механизмов биосистемы, поскольку она уже "неживая", однако исследователь в данном случае имеет дело лишь с органической материей, состав и свойства которой соответствуют моменту прекращения жизнедеятельности.
Для взаимодействия света с биологическими объектами являются важными: время облучения, режим облучения (непрерывный или импульсный), периодичность и длительность воздействия. В этом также может проявить себя гомеостаз живой материи. В зависимости от длины волны и интенсивности света пороговая длительность облучения, при которой начинают происходить морфологические изменения, может быть весьма различной для одного и того же объекта, т.е. для живого объекта произведение интенсивности на время облучения не является константой.
В зависимости от периодичности световых импульсов возможны резонансные явления в области частот, соответствующих периоду колебаний фотоотклика биологических систем, который изменяется в пределах от 10 до 10 с. Следует отметить, что сложность исследования поведения биологических систем заключается в том, что из-за включения адаптационных и регуляторных механизмов их отклик является нелинейным даже при очень малых интенсивностях света.
В результате лазерного воздействия в облучённых тканях происходят различные физико-химические изменения. Эти изменения регистрируются на всех уровнях организации живой материи:
- субклеточный (возникновение возбуждённых состояний молекул, образование свободных радикалов, стереохимическая перестройка молекул, коагуляция белковых структур, ускорение синтеза белка, рибонуклеиновой кислоты (РНК), дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), ускорение синтеза коллагена и его структур и др.);

• клеточный (изменение заряда электрического поля клетки, изменение мембранного потенциала и проницаемости мембран, повышение синтетической активности и т.д.);
• тканевый (изменение химизма и давления межклеточной жидкости, изменение микроциркуляции, кислородного баланса и активации окислительно-восстановительных процессов);
• органов (стимуляция или угнетение функции какого-либо органа);
• системный              (возникновение              ответных              адаптационных

нервно-рефлекторных и нервно-гуморальных реакций с активацией симпатоадреналовой систем).
Интенсивность и специфичность проявления ответных реакций на лазерное воздействие определяется              дозой,              биологией,
пространственно-временными              характеристиками биообъектов и
воздействующего              агента.              На              атомно-молекулярном              уровне
взаимодействия происходит поглощение падающего электромагнитного излучения различными биотканями и биологическими жидкостями. В результате              поглощения              энергии              света              возникают
электронно-возбужденные состояния атомов и молекул этих веществ, последующая миграция электронного              возбуждения,              первичный
фотофизический эффект, появление первичных фотопродуктов, нагрев. Лазерное излучение способно приводить к существенной неоднородности температурного градиента в тканях, особенно на уровне одной клетки или её органелл. Это может влиять на константы скорости биохимических реакций, приводить к деформации клеточных мембран, изменению их трансмембранных потенциалов и т.п. Протекание эндотермических химических реакций зависит, как показывают многие физические исследования, не только от средней подводимой тепловой энергии к реагентам, но и от скорости и периодичности вложения энергии, которые могут влиять на константы термохимических реакций. В зависимости от величины температуры и времени её действия на биоткань в последней могут наблюдаться отдельно или вместе: температурная активация, денатурация белка, коагуляция, испарение, карбонизация (рис. 1-1).
Превращённая в тепло энергия света вызывает в облучённом объёме ткани локальное повышение температуры. Так как при воздействии низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) не происходит фазовых переходов, то температура биоткани повышается пропорционально плотности энергии. Часть тепла отводится из зоны взаимодействия в зависимости от температурного градиента путём теплопроводности в более холодный окружающий участок. Из-за этого ограничивается максимально достижимая температура облучаемого участка при данной интенсивности излучения, то есть с определённой интенсивностью облучения связана определённая максимальная температура. Так как часть энергии транспортируется в соседние области, то нагревается не только облучённый объём, но и окружающие его участки. Тепло отводится от
облучённой ткани также и локальным кровотоком. Таким образом, термические свойства живой ткани определяются в основном тремя явлениями:              теплопроводностью, накоплением тепла, отводом тепла
сосудистой системой.
Поглощение света является одной из характеристик эффективности взаимодействия света с исследуемым биологическим объектом. Спектры поглощения биообъектов определяются типом доминирующих поглощающих центров, так называемых хромофоров, и содержащейся в них водой.

Рис. 1-1. Явления, наблюдаемые в биотканях при различных температурах.
В то же время пропускание в области коротких длин волн определяется светорассеянием. Рассеяние света биообъектами - это одно из самых характерных для них явлений. Оно связано со структурой биосистем, которые, как правило, состоят из большого числа случайно распределённых в объёме рассеивающих центров. Исключение составляют лишь некоторые типы тканей, например, прозрачные ткани глаза, в которых эта структура упорядочена. Для многих типов биотканей в УФ и ИК диапазонах длин волн преобладает поглощение, а рассеяние оказывается существенным в видимой и ближней ИК (БИК) областях. Для длин волн 0,45^0,59 мкм поглощение и рассеяние дают примерно равные вклады в коэффициент пропускания ткани, а для длин волн 0,59^1,5 мкм рассеяние преобладает над поглощением.
Важной оптической характеристикой биообъекта является также коэффициент отражения. Например, для большинства внутренних органов
животных коэффициент отражения на отдельных длинах волн в видимой и ближней ИК областях составляет 10^30%, кожный покров человека отражает в видимой области 10^60% световой энергии. Отражение обусловлено как скачком показателя преломления на границе биообъекта с воздухом, так и обратным рассеянием от глубинных слоёв ткани. При этом на глубине, равной примерно трём оптическим толщинам ткани, коллимированный лазерный пучок даёт сферически симметричное, близкое к изотропному излучение.
Селективность воздействия света на биологический объект в большинстве случаев зависит от спектрального              диапазона.
Ультрафиолетовое излучение преимущественно поглощается молекулами нуклеиновых кислот, белков и липидов. Свет видимой области спектра преимущественно поглощается хромофорными группами белковых молекул, отчасти кислородом. Наиболее важная роль принадлежит гемоглобину, меланину и ряду ферментов. Свет ближней инфракрасной области (длина волны 0,8^ 1,4 мкм) поглощается преимущественно молекулами белка и кислородом.