Анализ хромосомного набора в клетках различных тканей и органов зародыша человека необходим как для верификации диагноза, установленного при исследовании клеток хориона, так и для сопоставления хромосомного набора собственно эмбриона и его провизорных органов. Обычно для подобных исследований используют культуры эмбриональных фибробластов. Предлагаемые нами методы основаны на изучении спонтанных митозов в различных тканях плода, полученных из абортного материала, и позволяют получить результат в течение 1-2 дней [16].
Получение материала
Непосредственно в операционной произвести отбор материала — целого эмбриона или его фрагментов, отмыть от крови гепаринизированной средой Игла (Хенкса) или физиологическим раствором и доставить в лабораторию. Если операционный блок расположен в непосредственной близости, возможна доставка всего полученного материала в кювете и отбор частей зародыша в лаборатории.

1. Приготовление препаратов из фрагментов тканей эмбрионов Протокол 1.7

1. Тонкий кишечник и пищевод разрезать на кусочки длиной 2-3 мм, остальные органы (желудок, легкие, почки, костный и продолговатый мозг, мозговые пузыри, роговицу глаза) измельчить ножницами.
2. В пенициллиновый флакон с 5 мл гипотонического раствора, содержащего колхицин (колцемид) в конечной концентрации 1 мкг/мл, поместить примерно по 10 мг образца (2-3 кусочка) и инкубировать при комнатной температуре 45-50 мин или при +37 °С 30-45 мин. Затем провести префиксацию и фиксацию материала, после чего приготавливать препараты.
3. Препараты хромосом из различных органов зародыша человека готовить аналогично препаратам из ворсин хориона и плаценты по ускоренному «прямому» методу (Протокол 1.4).
2. Приготовление препаратов из суспензии клеток (печени, костного мозга)

Протокол 1.8

1. Фрагменты печени поместить в чашку Петри диаметром 40 мм, часовое стекло или гомогенизатор с плохо притертым пестиком, налить небольшое количество питательной среды, содержащей колхицин в концентрации 0,5 мкг/мл, и гомогенизировать. Фрагменты костного мозга сразу же перенести в пробирки с небольшим количеством среды с колхицином и осторожным пипетированием добиться получения суспензии.
2. В полученную суспензию добавить среду с колхицином, пипети- ровать и перенести в центрифужные пробирки.
3. Инкубировать клетки 1,5-2 часа при +37 °С (общее время обработки клеток колхицином не должно превышать 2 час). Дальнейшие этапы приготовления препаратов аналогичны описанным для культуры лимфоцитов (см. пп. 4-6 Протокола 1.1).

Примечания

1. Для облегчения выхода клеток из фиксированного материала кусочки кишечника или пищевода разрезать вдоль при помощи препаровальной иглы в капле уксусной кислоты на препарате.
2. При приготовлении препаратов из печени и мозга следует соблюдать осторожность, так как фиксированные кусочки очень хрупкие и легко разрушаются. Качество препаратов из печени и костного мозга можно повысить, используя суспензию клеток.