Метод колониеобразования кроветворных клеток в селезенке облученных мышей 


После атомной бомбежки авиацией США японских городов Хиросимы и Нагасаки 6 августа 1945 г. перед мировой медициной встали проблемы защиты человека от лучевой болезни. Начала интенсивно развиваться новая наука — радиобиология. Во всех странах, в том числе в СССР, исследователи вскоре выяснили основные патологические проявления, вызванные проникающим лучевым поражением экспериментальных животных, и начали интенсивный поиск методов предупреждения и лечения лучевой болезни. Экспериментальные исследования показали: наиболее радиочувствительны гемопоэтические стволовые клетки, лимфоциты и клетки других кроветворных ростков. Облучение в 850—1000 Рад («10 Gy в современных единицах измерения) определили как «кроветворные летальные дозы». После такого облучения регенерация кроветворной ткани невозможна, но в течение ближайших дней (максимум 2 нед) экспериментальные мыши способны выживать за счет функционирования зрелых гемопоэтических клеток. При облучении в дозах выше 10 Gy наступает так называемая кишечная смерть за 1—3 сут, при еще более высоких дозах радиации возможна «смерть под лучом».
Единственным более или менее надежным средством спасения экспериментальных животных при облучении в «кроветворной летальной дозе» оказалась трансплантация клеток костного мозга от сингенных доноров. С тех пор облученные в «кроветворной летальной дозе» и сохранившие жизнеспособность в течение определенного срока мыши обозначаются лабораторным термином «живые пробирки». Трансплантация внутривенно таким мышам сингенных или аллогенных донорских костно-мозговых, селезеночных либо других лимфоидных клеток дает возможность в течение достаточного количества дней исследовать не только процессы приживления или неприживления вводимых клеток, но и явления взаимодействия разных типов клеток между собой. Более точно «живые пробирки» стали определять как «культуру клеток in vivo». Именно использование культуры клеток in vivo (рис. 3.7, см. также цв. вклейку) позволило сделать целый ряд открытий, актуальных до настоящего времени (взаимодействие Т- и В- лимфоцитов, роль В-клеток в антителообра- зовании, способность гемопоэтических клеток-предшественников к колониеобразованию in vivo и др.). Благодаря полученным данным

Метод Тилла и МакКуллоча получил распространение как количественный способ клонирования кроветворных клеток в селезенке летально облученных мышей. В течение ряда лет клетки, дающие начало колониям, считали стволовыми кроветворными клетками (СКК). Но позже авторы и вслед за ними другие исследователи осторожно обозначили эти клетки как колониеобразующие (КОЕс). Скорее всего КОЕс — мультипотентные клетки-предшественники, отстоящие на несколько этапов дифференцировки от СКК.
Метод Тилла и МакКуллоча использовали и до сих пор используют многие исследователи во многих лабораториях мира для изучения закономерностей приживления донорских кроветворных тканей в организме облученных реципиентов.
Р.В. Петров и Л.С. Сеславина, применяя данную экспериментальную систему, в 1967 г. обнаружили и в 1977 г. зарегистрировали как открытие явление взаимодействия между СКК и лимфоцитами. Суть открытия заключалась в том, что аллогенные лимфоциты инактивировали стволовые клетки. Не исключено, что инактивирующее или тормозящее действие лимфоцитов распространяется и на другие
несингенные активно пролиферирующие клетки (раковые, эпителиальные и др.), способные обеспечить за счет размножения само- поддерживающуюся популяцию. Данный феномен может являться одним из главных механизмов иммунологического надзора и элиминации соматических мутаций (Петров Р.В., 1987).
Вопросы и задания
  1. Какими методами можно оценить фагоцитоз и его завершенность?
  2. Перечислите типы клеточной цитотоксичности.
  3. Как оценить функциональную активность NK?
  4. Как оценить цитотоксические Т-клетки?
  5. Опишите основные принципы иммуномагнитной сепарации.
  6. Приведите принцип работы и устройство проточного цито- флуориметра.
  7. Что отражает спонтанная и индуцированная хемилюминесценция?
  8. Дайте определение и приведите основные этапы культуры клеток in vivo.
  9. Какие основные иммунологические феномены были изучены с помощью культуры клеток in vivo?
  10. Назовите методы, выявляющие АОК.
  11. Каковы особенности метода Н. Йерне?
  12. Опишите закономерности антителообразования.
  13. Каковы постановка реакции и методы оценки?

Источник: под ред. Л. В. Ковальчука, Г. А. Игнатьевой, Л. В. Ганковской., «Иммунология : практикум : учеб, пособие» 2010

А так же в разделе «  Метод колониеобразования кроветворных клеток в селезенке облученных мышей  »