Ag-окраска активных ядрышкообразующих районов хромосом 


Для специфического выявления активных районов ядрышковых организаторов (ЯОР), локализованных в коротких плечах акроцентрических хромосом человека, используют метод окраски нитратом серебра с желатиной. Интенсивно окрашиваются в черный цвет лишь те ЯОР, которые были активны в предшествующей интерфазе. Неактивные ЯОР при этом способе не детектируются. Благодаря ярко выраженному полиморфизму, ЯОР могут быть использованы для характеристики индивида и для установления родительского происхождения дополнительных акроцентрических хромосом при гетероплоидии.
Растворы
  1. 50%-й раствор азотнокислого серебра на деионизированной (можно на бидистиллированной) воде.
  2. 2%-й раствор желатина на дистиллированной воде.
  3. Муравьиная кислота.
  4. 5%-й раствор гипосульфита натрия.

Протокол 6.1
  1. На препарат под каждое покровное стекло 24x24 мм нанести 2 капли смеси желатина и муравьиной кислоты (1 мл кислоты на 100 мл желатины, смешивать непосредственно перед употреблением) и 1 каплю (50-60 мкл) раствора серебра.
  2. Инкубировать во влажной камере при 37 °С 20-60 мин, контролируя интенсивность окраски визуально и под микроскопом.
  3. По окончании окрашивания (потемнение до серо-коричневого цвета красящей смеси и светлые желто-коричневые ядра на препарате) смыть покровные стекла проточной водой и поместить препараты на 30 сек в гипосульфит натрия.
  4. Промыть проточной водой и высушить.
  5. Для анализа в проходящем свете препараты можно докрасить раствором красителя Гимза, используя рутинный (Протокол 2.1) или G-метод (Протоколы 3.1, 3.2, 3.4). При анализе ЯОР-препаратов, окрашенных с помощью QFH-метода, необходимо комбинирование люминесцентного и проходящего освещения.

Примечания
  1. При перекрашивании препарата (окрашивание хромосом в коричневый цвет) инкубирование в гипосульфите можно продолжить, увеличив его концентрацию в растворе. Можно использовать с этой целью насыщенный раствор красной кровяной соли.
  2. Успешное окрашивание существенно зависит от партии всех используемых реактивов.
  3. На всех этапах следует соблюдать крайнюю осторожность, т. к. пятна серебра не поддаются полному удалению с оптики, одежды и пр. 

Источник: Баранов В.С., Кузнецова Т. В., «Цитогенетика эмбрионального развития человека: Научно-практические аспекты» 2007

А так же в разделе « Ag-окраска активных ядрышкообразующих районов хромосом  »