Для оценки состояния врожденного иммунитета применяют почти исключительно функциональные тесты, поскольку численность миелоид- ных клеток определяют с помощью элементарного анализа крови. Чаще других функций оценивают фагоцитарную активность клеток. Традиционно ее определяют микроскопически, в окрашенных мазках, с использованием в качестве фагоцитируемых частиц как микроорганизмов, так и инертных корпускул, например, частиц латекса. При этом вычисляют фагоцитарный индекс (процент клеток, осуществивших фагоцитоз тест-частиц) и фагоцитарное число (среднее число частиц, фагоцитированных клеткой). Такой подход в принципе адекватен, но он трудоемок, практически не поддается стандартизации и потому в значительной степени субъективен. Современные методы оценки фагоцитоза основаны на проточной цитометрии с применением объектов фагоциоза (бактерий, частиц), меченых флуорохромами.
С функциональной точки зрения более значима оценка бактерицидности фагоцитов, которую раньше определяли с помощью теста на завершенность фагоцитоза. Основой теста служило определение степени снижения числа микроорганизмов, высеваемых из лизата фагоцитов. Естественное стремление к упрощению и стандартизации позволило разработать несколько вариантов метода, основанных на проточной цитометрии. Помимо этого давно используют косвенную оценку бактерицидного потенциала фагоцитов в реакции восстановления нитросинего тетразолия. Активность фагоцитов определяют по появлению синего окрашивания в результате отложения гранул формазана — продукта восстановления нитросинего тетразолия. Дальнейшее усовершенствование метода состояло в разработке способа оценки способности клеток генерировать активные формы кислорода, которые выявляли по выраженности хемолюминесценции, усиливаемой в присутствии люминофоров (люминола, люцигенина). Как правило, параллельно оценивается спонтанная и индуцированная различными стимуляторами люминолзависимая хемолюминесценция. Хемилюминесценцию регистрируют автоматически на специальном приборе — хемилюминометре.
К группе тестов, характеризующих активность клеток врожденного иммунитета, относят определение их способности секретировать провоспалительные цитокины (IL-1p, TNFa и др.). Корректный вариант — постановка теста in vitro со стимуляцией лейкоцитов крови или выделенных макрофагов бактериальными стимуляторами (обычно ЛПС из Escherichia coli) с последующим иммуноферментным определением цитокинов. Менее адекватно иммуноферментное определение цитокинов в сыворотке крови. При таком подходе невозможно разграничить процессы секреции и потребления цитокина, а также определить его происхождение.
Для характеристики состояния естественных киллеров параллельно используют функциональные тесты и определение численности клеток. Для идентификации NK-клеток обычно выявляют мембранные молекулы CD56 и CD16 методом проточной цитомтерии с использованием соответствующих антител. Одновременно оценивают соотношение двух основных субпопуляций NK-клеток CD56l° CD16+ и CD56hi CD16-. Опыт показывает, что для характеристики популяции естественных киллеров недостаточно подсчета этих клеток, а также их разновидностей: требуется параллельно оценивать их функциональную активность (поскольку нередки случаи обратной корреляции численности и активности NK-клеток). Традиционный метод оценки функциональной активности естественных киллеров — радиометрическое определение выхода в среду 51Cr, предварительно введенного в клетки. Это достаточно точный и информативный метод, однако он неудобен в связи с необходимостью использования радионуклида, являющегося у-излучателем, и поэтому сейчас его используют редко. Он заменен другим вариантом радиометрического метода, основанного на оценке ослабления включения 3Н-уридина, предварительно введенного в клетки-мишени и выходящего из них при цитолизе. Будучи в-излучателем, 3Н-уридин представляет меньшую опасность. Предложено несколько вариантов оценки гибели меченых флуорохромами клеток-мишеней, с помощью проточной цитометрии, которые пока не вытеснили радиометрические методы. Наиболее интересный и перспективный подход к цитофлуорометрической оценке цитотоксических клеток — метод, основанный на выявлении мембранной экспрессии молекулы CD107 (LAMP-1). Эта молекула в норме отсутствует на клеточной поверхности, но содержится на мембранах лизо- сом, включая цитотоксические гранулы цитотоксических лимфоцитов. При секреции цитотоксических гранул их мембрана сливается с клеточной мембраной, и молекула CD107 оказывается на поверхности клетки.
Еще одна группа показателей, характеризующих функциональный потенциал системы врожденного иммунитета, позволяет оценить состояние системы комплемента. Реакции, основанные на титровании комплемента с определением 50% гемолиза, не используют в связи с их громоздкостью. С помощью иммуноферментного анализа оценивают концентрацию в сыворотке крови основных компонентов комплемента, в первую очередь C3.
Фактически приведенными методами ограничивается спектр подходов к лабораторной характеристике системы врожденного иммунитета. Такая важнейшая функция, как антигенпрезентирующая, не входит в число определяемых показателей. Отсутствуют общепринятые лабораторные подходы к характеристике популяции дендритных клеток.