В течение последнего десятилетия при решении пробелы диагностики прижизненности и давности причинения механической травмы был применен метод электронного парамагнитного резонанса.
В практике судебно-медицинской экспертизы при исследовании трупов людей, погибших в результате механической травмы, нередко возникает вопрос о прижизненности или посмертности причинения телесных повреждений. С этой точки зрения, целесообразным представляется развитие нового научного направления, связанного с применением современных биофизических методов исследования органов и тканей человека и экспериментальных животных.
М.А.Оганесян (1984) с целью экспертной диагностики давности возникновения механической травмы методом ЭПР изучил динамику реакции восстановления спиновых зондов кровью через 0, 1, 3, 6, 12 и 24 часа после ее причинения. Автор отметил влияние алкогольной интоксикации на динамику реакции восстановления спиновых зондов кровью в указанные сроки, а также влияние давности наступления смерти на параметры ЭПР-спектров крови. Был использован раствор спинового зонда на основе каприлового эфира. Скорость реакции восстановления спинового зонда в крови исследована путем записи центральной компоненты ЭПР - спектра зон
да с последующим измерением ее амплитуды. Установлена достоверная динамика реакции восстановления спиновых зондов кровью в сроки до 24 ч после причинения механической травмы, что может быть, по мнению автора, использовано при диагностике давности ее возникновения. Отмечено, что содержание этилового спирта в крови до 2%о не оказывает статистически достоверного влияния на величину константы скорости реакции восстановления спиновых зондов кровью. При концентрации этанола более чем 2% отмечено снижение ее величины. Показана возможность диагностики давности возникновения повреждений в сроки до 1 и 3-х часов после их причинения.
Г.М. Буттаева (1986) избрала в качестве такого метода электронный парамагнитный резонанс, а объектами исследования - кровеносные сосуды (аорты, подвздошные, общие сонные, бедренные, подключичные артерии), изъятые от трупов лиц, погибших в результате механической травмы и других причин. Время причинения повреждений и наступления смерти были известны из медицинских документов и следственных данных. Всего автор исследовала 115 сосудов от 82 трупов лиц обоего пола в возрасте от 11 до 84 лет. Смерть их наступила от острой кровопотери, механической асфиксии, несовместимых с жизнью повреждений, травматического шока в результате железнодорожной травмы, падения с высоты, колото-резаных ранений, автомобильной травмы. Учитывали наличие и количественное содержание этанола в крови и моче трупов.
Сосуды с околососудистой клетчаткой, мягкими тканями извлекали из трупов, помещали в стеклянные бюксы и хранили в течение 2 месяцев в одинаковых условиях при температуре воздуха 15-17оС и относительной влажности 60-70%. Для контрольного исследования брали неповрежденную часть того же сосуда на максимальном удалении от места травмы или симметричный интактный сосуд. Установлено, что хранение образцов сосудов в холодильнике при 4-6оС в течение 3 суток не оказывает статистически достоверного влияния на параметры спектров ЭПР. Основными задачами автора являлись установление возможности диагностики прижизнен- ности механических повреждений кровеносных сосудов с учетом длительности посмертных изменений, наличия алкогольной интоксикации и атеросклеротического поражения
сосудов. Была разработана методика с применением различных нитроксильных радикалов, использованы гидрофобные и гидрофильные вещества, а также спиновые зонды на основе жирной кислоты. Отсутствие конкретных результатов заставило автора несколько изменить методику исследования и нитроксильные радикалы были заменены парамагнитными ионами Mn+2. Ионы этого металла в водном растворе дали спектр ЭПР, характеризующийся шестикомпонентной структурой. Размер образца сосудов (диаметр 12 мм) был определен специальным калиброванным приспособлением с целью стандартизации. В этой методике Г.М.Буттаева отказалась от гомогенизации исследуемого материала. Методика была значительно упрощена в техническом отношении, выполнима при затрате небольшого количества широко доступных реактивов. Посмертную травму наносили путем множественного (до 8) сдавления ткани сосуда браншами зажима через 2, 5, 10, 15, 18, 24, 36, 48 ч после остановки сердца. Измерения проводили через 12, 24, 36, 48 ч., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 13 недель после наступления смерти. Образцы сосудов помещали в раствор MnCl2 в количестве 1,5 мл с концентрацией раствора 10 М на 30 минут. По истечении этого времени сосуды, поглотившие часть марганца, извлекали, а растворы использовали для измерения концентрации Mn+2 методом ЭПР. Раствор набирали в стеклянный капилляр с внутренним диаметром 0,7 мм до объема 100 мкл и помещали в резонатор радиоспектрометра “Рубин” ЭПР-В. Запись проводили при напряженности магнитного поля H0 3650 Гс, диапазоне развертки - 1600/1, скорости развертки 3/200, амплитуда ВЧ модуляции HM - 100/1, постоянной времени самописца - 0,3 с, падающей мощности - 2 Мвт, модуляции - 10/0,4. Сигнал регистрировали на осциллографе и двухкоординатном самописце. Цифровые данные обработаны методами вариационной статистики.
Анализ проведенных исследований показал, что суммы амплитуд спектров ЭПР исходного раствора марганца всегда были максимальными. Суммы амплитуд спектров ЭПР марганца после инкубации образцов сосудов травмированных прижизненно были минимальными. Суммы амплитуд спектров ЭПР марганца после инкубации в них образцов сосудов с посмертной травмой были больше суммы амплитуд спектров марганца после инкубации в них образцов сосудов с
прижизненной травмой. Суммы амплитуд спектров ЭПР раствора марганца после инкубации неповрежденных (контрольных) сосудов всегда были больше сумм амплитуд спектров марганца после инкубации образцов сосудов с прижизненной и посмертно причиненной травмой. Полученные результаты показали принципиальную возможность достоверного установления прижизненности механической травмы при давности посмертных изменений до 48 часов. Затем было изучено влияние посмертных процессов на величины спектров ЭПР в поздние сроки посмертного периода (до 13 недель). Выявлена достоверная возможность диагностики прижизненности повреждений кровеносных сосудов при давности посмертного периода до 2-х недель. При длительности посмертного периода от 2 до 13 недель необходимо проведение двух-трехкратных измерений параметров спектров ЭПР с интервалом в 2 недели. При установлении прижизненности механических повреждений с использованием указанной методики какой-либо существенной разницы в показателях не наблюдается между случаями наличия и отсутствия алкогольной интоксикации.
Автор установила, что коэффициент связывания раствора марганца интимой сосудов имеет различную величину для прижизненно и посмертно поврежденных сосудов. Применение в качестве внутреннего контроля участка неповрежденного сосуда исключает влияние алкогольной интоксикации и атеросклеротического поражения на параметры спектров ЭПР. Посмертные процессы давностью до двух недель не оказывает существенного влияния на параметры спектров ЭПР, а следовательно и на возможность установления прижизненности возникновения повреждений сосудов. При длительности посмертного периода до трех месяцев с целью указанной диагностики необходимо проведение двух-трехкратных измерений параметров спектров ЭПР с интервалом в 2 недели.
Вопросам установления прижизненности возникновения механической травмы по параметрам ЭПР-спектров посвятил свое научное исследование В.Л. Прошутин (1988). Работа выполнена на практическом судебно-медицинском материале (67 трупов лиц обоего пола в возрасте от 9 до 82 лет). Три группы наблюдений включали в себя трупы лиц (25), умерших от заболеваний сердечно-сосудистой системы, погибших на
месте происшествия в течение 5-15 минут от различных видов механической травмы (26) и умерших (16) в лечебных учреждениях в сроки 1-4 часа после получения механических повреждений. В качестве объекта исследования был избран костный мозг, поскольку относительная изолированность его в организме исключает возможное неблагоприятное влияние на него условий внешней среды. Исследование костного мозга произведено методом электронного парамагнитного резонанса на радиоспектрометре “Рубин”. Исследование свойств костного мозга методом спиновых зондов производили в сроки: в первую неделю ежедневно, затем на 14, 21, 28 сутки и 810, 12-14, 16-18, 20, 22-24 недели посмертного периода. Установлено, что хранение препаратов костного мозга при температуре 4-6оС в течение трех суток и при 18-20оС в течение 6 часов не оказывает существенного влияния на изменения значений константы скорости реакции восстановления спинового зонда костным мозгом. Автор использовал в качестве спинового зонда спиртовой раствор 1,2,6,6-тетраметил-1-кап- рилоидпиперидин-один-оксила. ЭПР-спектры этого зонда характеризуются триплетной формой. Константу скорости реакции восстановления спинового зонда костным мозгом определяли соотношением параметров ЭПР-спектров образца к контролю. Запись ЭПР-спектров костного мозга осуществляли на ЭПР-спектрометре “Рубин” с самопишущей приставкой.
Костный мозг получали путем промывания его физиологическим раствором из крыльев подвздошных костей с последующей стандартизацией на спектрофотометре при заданной длине волны. После добавления 20 мкл спинового зонда с 10- и 40-минутной инкубации проводили снятие ЭПР-спек- тов. Исследование костного мозга 1 и 2-й групп наблюдений проводили через 24 часа в течение первой недели, на 14, 21, 23-и сутки, 8-10, 12-14,16-18, 20, 22-24 недели; 2-й группы - на

3. 4, 5, 6, 12, 21, 23 и 24 сутки.

При решении вопроса прижизненности травматизации производили сравнение величин констант скорости реакции восстановления спинового зонда костным мозгом 1, 2 и 3-й серии исследований. Отмечено, что величина константы 2-й серии в период 2-28 суток после наступления смерти больше и достоверно отличается от значений константы 1-й серии. В свою очередь величина константы 3-й серии досто
верно отличалась от значений константы 2-й серии на 4, 7, 14, 21 и 28-е сутки, причем средние их цифровые показатели больше таковых во 2-й серии. Отсюда следовало, что интенсивность течения аутолитических процессов в костном мозге

2. и 3-й серий наблюдений значительно превышает таковые в

1. й              серии. Это зависит, по-видимому, от функционального состояния костного мозга на момент остановки сердечной деятельности. По мнению автора, это обусловлено тем, что у лиц, умерших скоропостижно от заболеваний сердечно-сосудистой системы, костный мозг пребывает в состоянии относительного функционального “покоя”, отсутствующего в костном мозге трупов лиц, погибших от механической травмы. После чрезмерного механического воздействия на организм в нем развиваются постагрессивные адаптивные реакции, сопровождающиеся нарушением кровообращения, тканевого дыхания, углеводного, белкового, жирового и других обменов, приводящие к накоплению самых разнообразных недоокисленных продуктов, выраженным изменением клеточного состава с их полноценностью, что существенно влияет на величину константы реакции восстановления спинового зонда костным мозгом.

В основе разницы значений константы 2 и 3-й серий наблюдений лежит величина временного интервала между моментом получения механической травмы и остановкой сердечной деятельности, что в конечном итоге определяет уровень функциональной активности костного мозга.
Таким образом, в сроки посмертного периода до 28 суток можно, по мнению автора, устанавливать не только прижиз- ненность, но и давность причинения механической травмы. В основе этого лежат разные механизмы пато- и танатогенеза, а также степень выраженности функциональных процессов в костном мозге.
Сравнение показателей величин константы скорости реакции восстановления спинового зонда костным мозгом 1 и

2. й              серии наблюдений в сроки посмертного периода от 8 до 24 недель свидетельствуют об их достоверном отличии, только значение константы серии в этом периоде значительно больше таковых 2-й серии, т.е. происходит существенная перестройка течения аутолитических процессов в сроки 5-7 недель. Это может быть обусловлено “истощением” костного мозга 2-й серии наблюдений в результате высокой началь
   ной скорости течения посмертных изменений в первые 28 суток после наступления смерти, вызванной функциональной активностью костного мозга на “момент” смерти, вследствие значительного надпорогового его раздражения. Автор считает, что открываются возможности диагностики прижизненности возникновения механической травмы в отдаленные сроки посмертного периода от 8 до 24 недель. Полученные результаты свидетельствуют о наличии различий в величинах константы скорости реакции восстановления спинового зонда костным мозгом у лиц, погибших на месте происшествия от различных видов механической травмы, умерших в сроки 1-4 часа после их получения и умерших скоропостижно от заболеваний, преимущественно сердечно-сосудистой системы. Это можно использовать в качестве дифференциально-диагностических критериев установления прижизненности и давности причинения механической травмы как на ранних сроках исследования трупов, так и при выраженном гнилостном их разложении. Для достоверной диагностики и уменьшения вероятности возможной ошибки автор рекомендовал проводить неоднократное (2-3 раза) исследование костного мозга на разных сроках посмертного периода. Наличие этанола в крови трупа, а также давность наступления смерти не препятствуют определению прижизненности и давности возникновения механической травмы в указанные сроки, прошедшие после наступления смерти.

Р.А. Аушев (1990) использовал метод электронного парамагнитного резонанса для изучения возможностей дифференциальной диагностики прижизненно и посмертно причиненных переломов ребер и длинных трубчатых костей. В качестве объекта исследования была избрана мышечная ткань из области перелома соответствующих костей от 70 трупов. Первую группу наблюдений составили 35 трупов лиц, погибших от различных видов механической травмы, вторую - 35 трупов лиц, умерших преимущественно от заболеваний сердечнососудистой системы.
Методом ЭПР был исследован качественный состав субстрата по изменению скорости реакции восстановления спинового зонда, введенного извне. В качестве такого зонда применен спиртовой раствор 2,2-6,6-тетраметил-4-каприлоилок- сипиперидин-1-оксила. Значения параметра К, характеризую
щего скорость реакции восстановления спинового зонда мышечной тканью определяли соотношением параметров ЭПР- спектров образца к контролю.
На трупах группы сравнения автор моделирования посмертные переломы костей с последующим изъятием мышечной ткани из области перелома. В обеих исследуемых группах в качестве контроля использовали мышечную ткань из симметричного участка с целью исключения влияния пола, возраста и алкогольной интоксикации. В дальнейшем мышечную ткань подвергали гниению в стеклянных бюксах при 18-20оС и относительной влажности 60-80% в течение трех месяцев. Еженедельно измеряли параметры ЭПР-спектров. С этой целью гомогенат мышечной ткани стандартизировали с помощью спектрофотометра, после добавления 20 мкл спинового зонда и инкубации в течение 10 и 30 минут производили запись спектров. Выбор “начала” исследования, составивший 7-е сутки посмертного периода, по мнению автора, был обусловлен тем обстоятельством, что гомогенат поперечно-полосатой мышечной ткани начинает восстанавливать спиновые зонды лишь к 6-7 суткам посмертного периода (Забельский А.И., 1982).
Р.А. Аушевым (1990) было установлено, что хранение препаратов мышечной ткани при температуре воздуха в общей камере холодильника 4-6оС в течение трех суток и при температуре 18-20оС в течение 12 часов существенного не влияет на изменение значений параметра К, характеризующего скорость реакции восстановления спинового зонда мышечной тканью. По мнению автора, в условиях травмы нарушение целостности клеточных структур, в частности миофибрилл, вызывает выход в межклеточное пространство ферментов, которые могут относительно длительное время находиться в повышенном функциональном состоянии. В интактной же ткани с прекращением кровообращения происходит инактивация большей части клеточных ферментов в виду нарастания гипоксии, поэтому процессы аутолиза не имеют такой высокой начальной скорости течения, как в прижизненно травмированной мышце, и лежат в основе полученной разницы величин констант. Результаты ЭПР-исследования показали, что величины параметра К практически не отличаются между интактной и посмертно травмированной мышечной тканью. В некоторых случаях значение параметра К для мышечной тка
ни из области посмертного перелома приближалась к значению параметра К для прижизненно травмированной ткани, но достоверность их различия сохранялась. Автор посчитал, что этот факт связан с временем причинения экспериментального перелома: чем меньше времени проходило с “момента” наступления смерти до причинения перелома, тем ближе значения параметра К для этих групп. Сущность этого явления автор объяснял переживаемостью мышечной ткани, способной некоторое время сохранять определенный уровень биохимических процессов. Проведенная статистическая обработка результатов исследования позволила автору установить, что между значениями параметра К, характеризующего скорость реакции восстановления спинового зонда мышечной тканью обеих групп наблюдений, имеются достоверные различия. Это дало основание автору считать реальным возможность диагностики прижизненности причинения переломов костей в сроки от 1 до 12 недель посмертного периода. Наличие этанола в крови трупа, пол, возраст, а также давность наступления смерти не препятствует указанной диагностике.
М.А. Оганесян (1984) провел исследования параметров электронного парамагнитного резонанса крови в зависимости от давности возникновения механической травмы в эксперименте и при судебно-медицинском исследовании трупов. Экспериментальным животным (крысам-самцам, массой 180-200 г) под эфирным наркозом причиняли травму в виде размозжения мышц и переломов задних конечностей путем резкого сжатия конечностей в тисках с травмирующей поверхностью площадью 4 см2. Травму наносили последовательно на правой, затем на левой конечностях. Контрольную группу животных также подвергали эфирному наркозу в сроки, аналогичные экспериментальным группам. Забой животных проводили через 0, 0,5, 1, 3, 12 и 24 часов после причинения механической травмы. В эти же сроки были забиты животные контрольной группы путем декапитации. В каждой временной группе изучали кровь от 15 экспериментальных животных и от 15 контрольных животных. Для изучения влияния этанола на параметры парамагнитных свойств крови животным (30) перед причинением механической травмы задних конечностей через пищевод вводили алкоголь (40%) в количестве 1 мл на 100 г массы. После введения алкоголя через 30
минут животных травмировали и через 1 и 3 часа забивали, из крови готовили образцы для ЭПР-исследования. Животных 3-й экспериментальной группы (30) после причинения механических повреждений с давностью 1 и 3 часа посттрав- матического периода забивали, их трупы хранили при температуре 18-20оС и относительной влажности 40-60%. Животных контрольной группы после забоя хранили при тех же условиях окружающей среды. В этой серии наблюдений изучали влияние посмертных процессов на параметры ЭПР-спект- ров при наличии механических повреждений в различной давностью. Кроме того, исследованы параметры ЭПР-спект- ров крови от 30 трупов людей в возрасте 20-50 лет, причиной смерти которых была закрытая черепно-мозговая травма при наличии повреждений конечностей с учетом концентрации этанола в крови и давности наступления смерти (до 24 часов).
В результате проведенных исследований автор установил, что этанол в концентрации 1 мл 40% раствора на 100 г массы экспериментальных животных не оказывает существенного влияния на величину константы скорости восстановления спиновых зондов крови. При длительности посттравматического периода в 1 и 3 часа при наличии и отсутствии алкогольной интоксикации она практически не влияет на величину скорости восстановления спиновых зондов. При наличии механической травмы с давностью 1-3 часа посмертные процессы до 24 часов несколько снижают величину константы скорости реакции восстановления спиновых зондов крови, но в принципе не препятствуют возможности экспертной диагностики давности причинения механической травмы. На экспертном материале установлено, что в группе наблюдений с давностью посттравматического периода - 0 часов через 24 часа после наступления смерти четко выявляются сигналы ЭПР-спектров (контрольная группа). При давности посттравматического периода - до 1 часа отмечено повышение значений константы скорости реакции восстановления спиновых зондов. При содержании этанола в крови до 2%о не выявлены статистически достоверные различия величины константы скорости реакции восстановления спиновых зондов крови. При концентрации этанола более 2% отмечена тенденция к снижению величины константы.
Таким образом, результаты проведенных автором исследований показали, что величина константы скорости реакции
восстановления спиновых зондов крови экспериментальных животных позволяет установить давность возникновения механической травмы в сроки 0, 1, 3, 6, 12 и 24 часа; интоксикация алкоголем средней степени не оказывает существенного влияния на параметры ЭПР-спектров при диагностике давности наступления механической травмы; параметры ЭПР- спектров в интервале до 24 часов после наступления смерти не изменяются; имеется принципиальная возможность применения метода электронного парамагнитного резонанса в экспертной практике для диагностики давности причинения механической травмы с учетом сроков наступления смерти и алкогольной интоксикации.
Р.Б. Узенева (1986) исследовала методом электронного парамагнитного резонанса периферическую кровь из бедренной вены от трупов лиц, у которых было установлено точное время получения травмы и наступления смерти. Причиной смерти являлись механические повреждения при отсутствии выраженных признаков наружного и внутреннего кровотечения и механическая асфиксия. Кровь брали из трупа и хранили ее в стеклянных бюксах при 14-18оС и относительной влажности 40-60%. Для исследования кровь смешивали с физиологическим раствором в соотношении 1:5. На 1 мл полученного раствора вводили 10 мкп спинового зонда (спиртового раствора каприлового эфира) концентрацией 10-2 М и после 10- и 4-минутной инкубации производили запись ЭПР-спект- ров крови. Весь материал был распределен на 4 группы наблюдений: исходная (контрольная) группа - трупы 17 лиц, погибших в результате механической травмы на месте происшествия, с длительностью посттравматического периода 0 часов; сравниваемая группа - трупы 17 лиц, погибших от механической асфиксии; 1-я группа - трупы 17 лиц, погибших в результате механической травмы, с длительностью посттравматического периода 1 час; 2-я группа - трупы 17 лиц, погибших в результате механической травмы, с длительностью посттравматического периода 3 часа. Исследования крови производили в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 21 и 28 суток постмортального периода.
Базируясь на данных литературы и собственных исследованиях, Р.Б. Узенева отметила, что при травматической болезни, в частности, при травматическом шоке, динамика изменений системы крови зависит от соотношения катаболичес-
ких и анаболических процессов, от темпов пролиферации, деструкции, дифференцировки клеток костного мозга, разрушения клеток крови. Продукты разрушения клеток крови и других тканей создают условия для резкого повышения уровня иммунных комплексов. Происходит усиление антиоксидан- тной активности и изменение числа неспаренных электронов крови, что, в свою очередь, приводит к изменениям параметров ЭПР-спектров скорости реакции восстановления спинового зонда кровью. В результате травмы в организме нарушаются процессы метаболизма, вследствие чего уменьшается концентрация кислорода, от количества которого зависит интенсивность скорости реакции восстановления спинового зонда кровью. Концентрация продуктов измененного метаболизма увеличивается с длительностью посттравматического и посмертного периодов (до 7 суток), затем постепенно снижается. При смерти от механической асфиксии, где в основном отсутствуют разрушенные травмой ткани и органы, повышение концентрации продуктов распада клеток начинается после 7 суток вследствие постепенного разрушения цитоплазматической мембраны клеток. Следовательно, интенсивность скорости реакции восстановления спинового зонда кровью и концентрация веществ, регулирующих этот процесс, находятся во взаимной зависимости.
С удлинением срока посттравматического периода увеличивается количество биологически активных веществ, влияющих на биофизические изменения крови, которые удается обнаружить методом электронного магнитного резонанса. По мнению автора, исследование величин констант скорости реакции восстановления спинового зонда кровью позволяет достоверно устанавливать прижизненность и давность возникновения механической травмы в сроки 0, 1 и 3 часа посттравматического периода с учетом влияния длительности посмертного периода до 28 суток. Установлено также, что концентрация этанола в крови до 2%, пол и возраст пострадавших не оказывают достоверного влияния на изменения параметров ЭПР-спектров скорости реакции восстановления спинового зонда кровью (рис. 5).
Приведенные данные свидетельствуют о значительной перспективе применения метода ЭПР при решении конкретных судебно-медицинских задач и для установления меха
низма сложных процессов, проходящих в органах и тканях организма при различных эндогенных и экзогенных воздействиях. По мнению приведенных исследователей, метод ЭПР может оказать значительную помощь экспертной практике в поздние сроки посмертного периода, поскольку процессы аутолиза не препятствуют получению ЭПР-спектров (Забельский А.И., 1982; Тыглиян Н.В., 1985; Пашинян Г.А., 1988 и др.).

а              б
Рис. 5. Спектры скорости реакции восстановления спинового зонда кровью исходной группы и группы сравнения (1-е сутки).
а - через 10 минут после введения зонда; б - через 40 минут после введения зонда;

• исходная группа;
• группа сравнения.
  

Л.Г.Карасева, Н.К.Куликов, В.В.Громов, М.В.Кисин (1978) изучали возможность определения давности происхождения высохшей крови методом электронного магнитного резонанса. Авторы исследовали кинетику гибели концентрации свободных радикалов “стареющей” крови методом ЭПР по общепринятой методике на радиоспектрометре ER-9 фирмы “Карл Цейсс” в трехсантиметровом диапазоне в магнитных полях от 700 до 10000 эрстед. Вторую производную сигнала ЭПР регистрировали на самописце. Аналитическая чувствительность прибора 1012 при ширине лини 1 эрстед. Исследовали кровь практически здоровых мужчин 23-30 лет, высушенную на предметных стеклах в естественных условиях (температура 22оС, влажность относительная воздуха 80-85%, освещение дневное). Хранили в сроки до 660 суток. Высушенная кровь при комнатной температуре, а также при температуре жидкого азота давала слабо разрешенный сигнал ЭПР малой интенсивности, поэтому все дальнейшие исследования проводили с у-облученными образцами крови при температуре жидкого азота (77оК). Облучение образцов крови Со60 проводили на установке ГУГ-120 мощностью дозы 450 рад/с в интервале поглощенных доз 0,54х106-6,4х106 рад. Авторы также выясняли возможность установления корреляционной связи между “возрастом” крови и суммарной концентрацией ПМЦ, образующихся при у-радиолизе крови. Для трехвалентного железа, содержащегося в молекуле гемоглобина, такую зависимость установить не удалось, так как его спектр крайне протяжен. Он наблюдался в области магнитных полей 1х103-3х103 эрстед и корректное определение концентраций ПМЦ в поли- кристаллических образцах практически не возможно.
Было изучено изменение суммарной концентрации ПМЦ продуктов радиолиза белка крови (g - 2,003) в зависимости от давности сухой крови. Для этого использовали центральную часть спектра ЭПР крови, ответственную за радикалы белковой природы. Она имеет несколько асимметричную многокомпонентную структуру с величиной g-фактора, равной 2,003. Полуширина центральной линии 16 эрстед, общая протяженность спектра 79±1 эрстед. Спектр ЭПР у-облученной крови по своим радиоспектроскопическим характеристикам аналогичен сигналам ЭПР от облученного гемоглобина и других подобных ему белков. Исследовали высушенную кровь 10
доноров, хранившуюся в течение одних суток. Все образцы крови при поглощенной дозе 0,54х106 рад имели практически одинаковую концентрацию ПМЦ, величина которой колебалась от 6,6х1017 1 /г до 7,0х1017 1 /г (средняя концентрация 6,8х1017 1/г ±10%). Те же образцы хранили до 660 суток. В течение первого месяца исследовали каждые трое суток, а затем через 100, 260 и 660 суток хранения. Облучение крови проводили в интервале поглощенных доз от 0,54х106 до 2,5 х106 рад, т.е. на линейном участке кривой накопления. С увеличением “возраста” крови концентрация ПМЦ наблюдается лишь начиная с 6-х суток хранения и до 30 суток. Снижение концентрации ПМЦ за этот период составило 35% от первоначальной величины. В дальнейшем снижение концентрации ПМЦ не отмечалось. Для определения давности образования следов крови в пределах 30 суток можно применить известную формулу: Ct=C0-Kt, где Ct - концентрация ПМЦ исследуемого образца; С0 - начальная концентрация, t - давность образования следов крови; К - постоянная, определяемая графически по наклону прямой в координатах Ct и t. Отсюда давность образования пятна высушенной крови:
C - Ct
t = -J^ ,              (14)
Р.Б. Чернова, А.М. Гареев и Н.В. Чернов (1994) применили метод электронного парамагнитного резонанса для установления давности возникновения механической травмы. Исследовали периферическую кровь в динамике посттравматического периода при длительности посмертного периода от одного месяца. Трупы с известным временем травмы и наступления смерти. Причиной смерти были механические повреждения в отсутствии выраженных признаков наружного и внутреннего кровотечения. Были исследования 3 группы наблюдений: 1-я группа (контрольная) - смерть на месте происшествия (0 часов); 2-я - механическая травма с длительностью посттравматического периода - 1 час; 3-я - длительность посттравматического периода составила 3 часа. Исследование проводили в течение 1 месяца после наступления смерти. Кровь (5 мл) из бедренной вены хранили в стеклянных бюксах при температуре 14-18оС и относительной влажности 40-60%. Кровь смешивали с физиологическим раствором
1:5. На 1 мл полученного раствора вводили 10 мкл спинового зонда (спиртовой раствор каприлового эфира) концентрацией 10-2 М и после 10-и и 40-минутной инкубации записывали ЭПР-спектры крови на отечественном радиоспектрометре “Рубин”. В результате травмы в организме нарушаются процессы метаболизма, вследствие чего уменьшается концентрация кислорода, от количества которого зависит интенсивность скорости реакции восстановления спинового зонда кровью. В исходной группе наблюдений в первые трое суток после наступления смерти значения величины скорости реакции восстановления составили 1,12±0,05, на 4-5-е сутки - 1,37±0,06, на 6-7-е - 1,6±0,07, к концу 2-й недели - 1,4±0,06, к концу 3-й недели - 1,2±0,07 и к концу месяца - 1,01 ±0,06. Для 2-й и 3-й групп значения величин скорости реакции восстановления спинового зонда кровью составили соответственно: 1,76±0,06 и 1,98±0,05; 2,01±0,05 и 2,22±0,07; 2,28±0,07 и 2,51 ±0,05; 2,07±0,08 и 2,28±0,05; 1,73±0,06 и 2,21±0,06; 1,49±0,07 и 1,91±0,07.
Концентрация продуктов измененного метаболизма увеличивается с длительностью посттравматического и постмор- тального периодов (до 7 суток), затем постепенно снижается. С удлинением срока посттравматического периода увеличивается количество биологически активных веществ в крови, влияющих на ее биофизические свойства, т.е. отмечена прямо пропорциональная зависимость между длительностью посттравматического периода и значениями величин скорости реакции восстановления спинового зонда кровью. Концентрация этанола в крови до 2% не оказывает достоверного влияния на изменения параметров ЭПР-спектров крови. Подтверждена возможность установления давности возникновения механической травмы с длительностью посттравматического периодов 0, 1 и 3 часа при давности посмертного периода до 28 суток методом ЭПР.