Полиеновые кислоты относятся к классу алифатических соединений с неразветвленной углеводородной цепью с числом атомов углерода 10 и более, включающей двойные и тройные связи. Природные полиеновые кислоты характеризуются, как правило, цис-конфигурацией атомов водорода при двойной связи. Полиеновые кислоты алифатического ряда обусловливают в большой степени проницаемость клеточной мембраны, транспорт липидов, участвуют в качестве биокатализаторов в ряде жизненных процессов в клетке, являются прекурсорами биологически активных соединений (гормонов, ферментов, ПГ и т. д.), принимают участие в биоэнергетических процессах в клетке, а также обладают антибактериальной и противоопухолевой активностью.
Гипохолестеринемический эффект полиеновых кислот обеспечивается за счет общей ненасыщенное™ и стабилизации молекулы холестерина, предотвращающей его выпадение в оса-



док, и возрастает с увеличением числа атомов углерода в цепи и числа двойных связей в изолированном положении.
Уже известен способ извлечения веществ гипохолестерине- мического действия, содержащих полиеновые кислоты: меркап- тоанилида линолевой кислоты (пат. кл. 16с 47, № 2730, Япония); алкиловых эфиров ¦у-линоленовой кислоты (пат. кл. А61к, № 7964М, Франция); эфира рибофлавина и линолевой кислоты (пат. кл. 16Е 673 С07Д, № 14118, Япония), являющихся синтетическими веществами с числом двойных связей в кислотной части молекулы не выше трех и обладающих вследствие этого недостаточной эффективностью по сравнению с более ненасыщенными кислотами или их производными.
Ближайшим аналогом является способ получения арахидена (авторское свидетельство № 411866, МКИ2 Аб1к 37/22.— Открытия, 1974, № 3) путем экстракции эмульсии липидов поджелудочной железы органическим растворителем, этерифицирован- ных с помощью этилового спирта в присутствии кислотного катализатора, освобождения от балластных веществ, охлаждения ацетонового раствора, выделения продукта фракционированием экстракта.
Недостатком способа получения арахидена является узкая сырьевая база (отходы производства инсулина и адреналина) и недостаточная очистка от насыщенных кислот. Кроме того, сам арахиден обладает недостаточно высокой биологической активностью, так как содержит большое количество насыщенных кислот и небольшое количество кислот с 5 двойными связями, в нем полностью отсутствуют кислоты с 6 двойными связями. В арахидене содержится также пальмитиновая (2%), стеариновая (2%), олеиновая (54%), линоленовая (12,3%) кислоты, которые увеличивают содержание холестерина в плазме крови.
Цель работы — получение вещества (условно названного вни- роеном-1) со значительно более выраженным гипохолестерине- мическим действием в связи со значительным увеличением содержания полиеновых кислот с 5 двойными связями и присутствием докозагексаеновой кислоты с 6 двойными связями.
Использовали в качестве исходного сырья жир гидробион- тов: сайки, путассу, трески, тунца, палтуса, сардины, формио, менхедены, акул различных видов, сельди, голомянки, тюленя и других, выделенный как из цельного организма, так и различных его жиросодержащих частей: внутренностей (например, печень), мышечной ткани, подкожного жира и отличающийся тем, что с целью повышения биологической активности экстракции подвергают беспозвоночных, жирных рыб (голомянку), жиросодержащие органы и ткани рыб (печень трески), а также морских млекопитающих (тюленя).
Жир гидробионтов качественно отличается от жира наземных организмов, используемых для получения существующих

гипохолестеринемических препаратов, значительным содержанием полиненасыщенных жирных кислот, особенно с 5 и 6 двойными связями в изолированном положении, которые имеются лишь в незначительных количествах в жирах некоторых животных и совершенно отсутствуют в растениях. Жир из гидробион- тов выделяют механическими способами, вытапливанием при низкой температуре (не выше 45°), замораживанием или экстракцией органическими растворителями, например диэтило- вым эфиром, хлороформом, петролейным эфиром, дихлорэтаном, смесью хлороформ—метанол и т. д. Гипохолестеринеми- ческое вещество сепарируют из жира гидробионтов путем омыления и этерификации, или переэтерификации, очистки этиловых эфиров получением аддуктов с мочевиной, низкотемпературной кристаллизацией и вакуумной разгонкой. Предложенный способ позволяет выделить вещество, содержащее этиловые эфиры ненасыщенных кислот: С22-б (42—47%), С22:4 (2-3%), С20:5 (44—47%), С20:4 (2—3%),С18:з (3-4%), Ci8;2 (2—3%), веществ неустановленного строения менее 0,2% (авторское свидетельство № 411866, МКИ2 А61к 37/22 — Открытия, 1974, № 3).
Ниже приведены примеры получения препарата на основе полиеновых кислот гидробионтов.
ПРИМЕР 1. 15 кг планктонных организмов измельчают в замороженном состоянии на мясорубке и экстрагируют жир хлороформом (1X30 л, 2X15 л). Хлороформный экстракт высушивают безводным сульфатом натрия, растворитель отгоняют в вакууме, получают 134,7 г жира (йодное число 85,7; пе- рекисное число 0,41; кислотное число 3,20; Сгод+Сгг^ 11,5%).
В колбу, снабженную обратным холодильником, загружают
  1. г жира, 183,5 г водно-спиртового раствора едкого кали (61,5 г едкого кали, 67,5 мл воды, 67,5 мл этилового спирта), при перемешивании доводят температуру смеси до 80°С на водяной бане. Гидролиз проводят при указанной температуре в течение 1 ч при перемешивании. Избыток спирта отгоняют, остальную массу охлаждают до 30°С, нейтрализуют 18%-ным раствором серной кислоты и подкисляют тем же раствором до pH 1,0. Затем температуру увеличивают до образования прозрачного слоя жирных кислот (примерно до 80°С), которые отделяют от водного слоя в количестве 133,1 г. К указанному количеству жирных кислот добавляют двойной объем этилового спирта, смесь 24,75 мл концентрированной серной кислоты и 24,75 мл этилового спирта. Этерификацию осуществляют при 80°С в течение 2,5 ч при перемешивании. Избыток спирта отгоняют в вакууме, этиловые эфиры жирных кислот экстрагируют петролейным эфиром, отмывают насыщенным раствором гидро- карбоната натрия до нейтральной реакции, высушивают безводным сульфатом натрия и отгоняют растворитель в вакууме.

Полученные 114,2 г этиловых эфиров жирных кислот растворяют в 571,0 мл ацетона и подвергают низкотемпературной кристаллизации при —30°С дважды по 2 ч, отделяя фильтрат обратным фильтрованием. Ацетон отгоняют, полученные 74,7 г этиловых эфиров жирных кислот (йодное число 110,5; 'перекис - ное число 0,08; кислотное число 2,50; С20:5-)-С22.6 19,1 %) подвергают вакуумной разгонке при остаточном давлении 0,1— 0,5 мм рт. ст.; получают три фракции:              1 — tKIin: 156—180°С;
12,1 г; йодное число 210,0; перекисное число 0,01; кислотное число 0,82; насыщенные кислоты 21,3%; Сго:5 4,9%, С22;6 2,1%; II — 15,9 г; tKHn. 180—190°С; йодное число 265,5; перекисное число 0,02; кислотное число 1,68; насыщенные кислоты 0,8%; С2о-б 10,9%; С22:б 8,6%; III — 10,7 г; tKHn. 191—210°С; йодное число 302,5; перекисное число 0,03; С2о;б 35,1%, С22;6 69,0%. Третья фракция является целевым продуктом.
ПРИМЕР 2. 2372 г цельной рыбы голомянки большой (Со- mephorus baicalensis) измельчают в мясорубке и экстрагируют жир смесью хлороформ—метанол 2:1 (1X2 л, 2X1 л). Экстракт высушивают безводным сульфатом натрия, растворитель отгоняют в вакууме, получают 998,7 г жира (йодное число 92,5; перекисное число 0,10; кислотное число 0,80; С2о;б-+-С22.6 11,0%). К 998,7 г безводного жира добавляют 2996,1 мл этилового спирта и 359,53 мл серной кислоты .(плотность 1,83—1,85), перемешивают в течение 9 ч при 80°С. Избыток спирта отгоняют в вакууме, к остатку добавляют 1997,4 мл толуола и нейтрализуют раствором 256,5 г карбоната натрия и 256,5 г хлорида натрия в 5275 мл воды. Реакционную массу фильтруют, из фильтрата извлекают этиловые эфиры жирных кислот толуолом (1X2 л, 2X0,5 л). Толуольные экстракты фильтруют через слой гидрокарбоната натрия (990 г) со скоростью 1—1,5 мл в минуту на 1 г гидрокарбоната натрия. Отгоняют растворитель в вакууме, получают 858,2 г этиловых эфиров жирных кислот.
В колбу, снабженную обратным холодильником, помещают 5500 г мочевины, 8000 мл метанола, 4000 мл изопропилового спирта и смесь перемешивают, нагревая до 50°С до полного растворения мочевины. К раствору добавляют 858,2 г этиловых эфиров жирных кислот и перемешивают 30—40 мин. Смесь охлаждают до 20°С, осадок отделяют на воронке Бюхнера, промывая метанолом. Фильтрат охлаждают при перемешивании до —18°С в течение 2—2,5 ч, осадок отфильтровывают, промывая метанолом. Фильтрат упаривают в вакууме до 1/4— 1/5 первоначального объема, к остатку прибавляют 3-кратное количество воды и этиловые эфиры жирных кислот извлекают бензолом. Бензольный экстракт упаривают, получают 304,4 г этиловых эфиров жирных кислот (йодное число 172,4; перекисное число 0,07; кислотное число 1,81;              С2о,-5+С22:6 29,3%). Эти
ловые эфиры жирных кислот подвергают вакуумной разгонке при остаточном давлении 0,1-—0,5 мм рт. ст. и получают три
фракции: 1—69,0 г; tK„n. 155—180°С; йодное число 216,2; переписное число 0,04; кислотное число 3,5; Сгод 2,1%, Сггд 2,9%; II'—91,7 г; tBEn. 181—190°С; йодное число 282,1; переписное число 0,05: Сгод 4,0%, Сггд 5,1%; III — 92,3 г; tKEn. 191—210°С; йодное число 305,5; переписное число 0,06; кислотное число 3,7; Сгод 43,9%, Сггд 54,1%. Третья фракция является целевым продуктом.
ПРИМЕР 3. 12 кг цельной рыбы сайки (Boreogadus saida) измельчают на мясорубке и экстрагируют жир эфиром (1X24 л, 2X12 л). Эфирный экстракт высушивают безводным сульфатом натрия, растворитель отгоняют в вакууме, получают 506,7 г жира (йодное число 151,7; перекисное число 0,11; кислотное число 2,0; Сгод + Сггд 33,0%).
В колбу, снабженную обратным холодильником, загружают
  1. г жира, 700 г водно-спиртового раствора едкого кали (250 г едкого кали, 250 мл воды, 250 мл этилового спирта), при перемешивании доводят температуру смеси до 80°С на водяной бане. Гидролиз проводят при указанной температуре в течение 1 ч при перемешивании. Избыток спирта отгоняют, остальную массу охлаждают до 30°С и нейтрализуют 1 л 18%-ного раствора серной кислоты и доводят pH до 1,0. Далее температуру повышают до образования прозрачного слоя жирных кислот (примерно до 80°С), которые отделяют от водного слоя в количестве 499,1 г. К указанному количеству жирных кислот добавляют двойной объем этилового спирта и смесь, состоящую из
  1. мл серной кислоты (плотность 1,83—1,85) и 90 мл этилового спирта. Этерификацию осуществляют при 80°С в течение 2,5 ч при перемешивании. Избыток спирта отгоняют, этиловые эфиры жирных кислот экстрагируют петролейным (диэтиловым) эфиром, отмывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия до нейтральной реакции среды, высушивают безводным сульфатом натрия и отгоняют растворитель в вакууме.

Полученные 398,7 г этиловых эфиров жирных кислот растворяют в 2193 мл ацетона и подвергают низкотемпературной кристаллизации при — 30°С дважды по 2 ч, отделяя фильтрат обратным фильтрованием. Ацетон отгоняют в вакууме, полученные 263,0 г этиловых эфиров жирных кислот (йодное число 175,4; перекисное число 0,07; кислотное число 2,8; Сгод + + Сг2:б 54,1%) подвергают вакуумной разгонке при остаточном давлении 0,1—0,5 мм рт. ст. Получают три фракции: 1—65,8 г; W 165—18ГС; йодное число 214,0; перекисное число 0,01; кислотное число 2,9; насыщенные кислоты 18,1%, Сгод 7,1%, С22:6 4,8%; II —87,9 г; tKHn. 181,—19ГС; йодное число 280,5; перекисное число 0,03; кислотное число 3,1; насыщенные кислоты 2,4%, Сгод 23,7%, С22:б 19,1%; III —59,7 г; tKHn. 191—210°С; йодное число 304,0; перекисное число 0,04; кислотное число 3,3; С20:5 49,4%, С22:б 45,8%.
Третья фракция является целевым продуктом.

ПРИМЕР 4. 158 кг печени трески (Gadus morhua) измельчают в мясорубке и экстрагируют жир смесью хлороформ— петролейиый эфир—метанол 1:1:1 (1X300 мл, 2X2 мл). Экстракт высушивают безводным сульфатом натрия, растворитель отгоняют в вакууме и получают 101 г жира (йодное число 166,0; перекисное число 0,12; кислотное число 2,3; С2о:5+С22:6 35,1%). Указанное количество высушенного жира помещают в колбу, снабженную обратным холодильником, добавляют туда же
  1. мл этилового спирта и 36 мл серной кислоты (плотность 1,83), перемешивают 9 ч при температуре 80°С. Избыток спирта отгоняют, к остатку приливают 300 мл толуола и нейтрализуют раствором 68,1 г карбоната натрия и 68,1 г хлорида натрия в 1396 мл воды. Реакционную смесь фильтруют, из фильтрата извлекают этиловые эфиры жирных кислот толуолом (1X200 мл, 2X40 мл). Толуольные экстракты пропускают через слой гидрокарбоната натрия (100 г) со скоростью 1,0— 1,25 мл)мин на 1 г гидрокарбоната натрия, отгоняют растворитель и получают 87,4 г смеси этиловых эфиров жирных кислот.

В колбу, снабженную обратным холодильником, помещают 500 г мочевины, 700 мл метанола, 350 мл изопрапанола, смесь перемешивают, нагревают до 50°С и после растворения мочевины добавляют 87,4 г этиловых эфиров жирных кислот при перемешивании. Смесь охлаждают до 2СГС, осадок отделяют на воронке Бюхнера, промывая 3-кратным количеством метанола. Фильтрат охлаждают при перемешивании до —18°С и ведут процесс при указанной температуре в течение 2 ч. Осадок отфильтровывают, промывают метанолом (2X150 мл). Фильтрат упаривают в вакууме до 1/4 первоначального объема, к остатку прибавляют 3-кратное количество воды и эфиры жирных кислот извлекают бензолом. Бензольный экстракт упаривают и получают 48,0 г этиловых эфиров жирных кислот (йодное число 188,8; перекисное число 0,10; кислотное число 2,5; С2о;5+ + С22:6 39,8%). Полученные этиловые эфиры жирных кислот подвергают вакуумной разгонке при остаточном давлении 0,1— 0,5 мм рт. ст. и получают 3 фракции: 1:—4,0 г\ tH„n. 160—180°С; йодное число 216,2; перекисное число 0,01; кислотное число 2,7; насыщенные кислоты 31,1%, С2о:5 17,8%, С22:6 4,7%; II — 5,6 г; W 181—190°С; йодное число 288,0; перекисное число 0,02; кислотное число 3,0; насыщенные кислоты 3,1%, С2о;5 38,1%, С22;6 21,5%; III — 15,0; tKnn. 191—215°С; йодное число 307,0 перекисное число 0,02; кислотное число 3,2; С2о:5 42,6%, С22;6 54,3%. Третья фракция является целевым продуктом.
Процентное содержание этиловых эфиров жирных кислот определяют методом газожидкостной хроматографии на приборе Jeol JMS-01-Sg-2 при следующих условиях: стеклянная колонка длиною 2 л и с внутренним диаметром 2 мм; жидкая 8*


фаза — 5% OV-225 на носителе хромосорб WAW; программирование температуры (со 150°С при скорости подъема 3° мин до 220°С); температура инжектора 270°С; газ-носитель — гелий; скорость газа 60 мл]мин.