Получение гомозиготных линий животных, в частности мышей, основано на длительном (до 18-20 поколений) близкородственном скрещивании по схеме; брат—сестра. При случайном выборе пары брат—сестра любой из аутосомных локусов будет переходить в гомозиготное состояние с частотой 1/8 на поколение. Двадцать поколений достаточно, чтобы все (или почти все) локусы стали гомозиготными (рис. 10.1). Таким образом, последовательное близкородственное скрещивание приводит в результате к чистой инбредной линии животных. Основная характеристика такой линии состоит в том, что все ее особи гомозиготны и неотличимы в генетическом отношении друг от друга, как однояйцовые близнецы.
Для решения вопросов сцепленности иммунологически значимых признаков с главным комплексом гистосовместимости, в частности признака иммунного отторжения трансплантата, необходимо было иметь линии мышей, которые отличались бы друг от

Рис. 10.1 Кривые возрастания гмознготности для трех систем инбридинга.
Получение гомозиготных линий животных основано на длительном близко- родственном скрещивании по схеме: брат-сестра (линия 2; линии 1 и 3 представлены для сравнения). Оценку генетической идентичности в ряду поколений проводят по результатам трансплантации (например, кожного лоскута, взятого от одной особи инбрсдируемого поколения и пересаженного на другую особь того же поколения). Полное приживление трансплантата свидетельствует о генетической идентичности (сингснности) между парами донор-реципиент.
1 — самооплодотворяющиеся организмы; 2, 3 — скрещиваемые особи: 2 — братья и сестры; 3 — двоюродные братья и сестры
друга только по этому комплексу В результате был разработан генетический прием получения так называемых конгенных линий.
В основе получения конгенных линий мышей лежит метод возвратного скрещивания — получение потомства в ряду поколений от скрещивания гетерозиготы (детей гомозиготных родителей, генетически отличающихся друг от друга) с одним из исходных гомозиготных родителей. Смысл подобного скрещивания — замена МНС (комплекса Н-2) одной инбредной линии на галло- тип другой. В результате получается конгенная линия, отличающаяся от исходной только по генам МНС. Схема скрещиваний для получения желаемой линии изображена на рис Л 0.2. Здесь представлены донорская маркирующая линия А (а/а) и основная линия В (b/b), которой внедряется МНС партнера по скрещиванию. От скрещивания гомозиготных особей этих двух линий получают гибриды первого поколения Fi (a/b; генерация No 1). При дальнейшем скрещивании гибридов Fi с особями основной линии В (b/b) получают потомство, состоящее как из гомозигот (b/b), так и гетерозигот (а/b) по комплексу Н-2. В последующих скрещиваниях отбираются только гетерозиготные особи, имеющие признак “а” (Н-2Й), который определяется по приживлению кожного трансплантата от маркирующей линии А и положительной серологической реакции клеток крови с анти-А-сывороткой. По мере продолжения скрещивания a-положительных особей с особями
Рис. 10.2. Получение конгенных линий мышей.
Представлена схема скрещивания мышей, позволяющая внедрить Н-2-ком- плекс одной линии в геном другой инбредной линии. Донорская маркирующая линия обозначена буквой А (генотип а/а), основная линия, воспринимающая Н-2-комплекс донора — буквой В (генотип b/b). От скрещивания гомозиготных особей этих двух линий получают гибрид первого поколения Fi (a/b; генерация №1). При дальнейшем скрещивании гибридов Fi с особями основной линии В получают потомство, состоящее как из гомозигот (b/b), так и гетерозигот (а/Ь). При последующих скрещиваниях отбираются только гетерозиготы, имеющие признак а (Н-2*), который определяется по успешному приживлению кожного трансплантата от маркирующей линии А и положительной серологической реакции клепок крови с анти-§-сывороткой. По мере продолжения скрещивания а-положительных особей с особями основной линии В доля генома линии А постоянно снижается, но при этом для дальнейшего размножения из потомства отбирают только тех особей, которые сохраняют признак а (Н-21). К двенадцатому поколению (генерация № 12) практически весь геном отбираемых после гибридизации мышей представлен основной линией В за исключением признака а, по которому шел отбор. Дальнейшая задача состоит в переводе признака а в гомозиготное состояние. Для этой цели гетерозигот заключительной генерации (а/b) скрещивают между собой и отбирают для дальнейшего размножения только тех особей потомства, хспорые отторгают кожный трансплантат линии Б и не дают реакции с анти-Ё^ыворопсой. Подобный заключительный отбор выявляет особей с отсутствием признака b (Н- 215) и гомозиготность по признаку а (Н-2а). Таким образом, в результате применения представленной схемы скрещивания в геном основной линии В внедряется комплекс Н-2-линии А, С момента перевода комплекса Н-2а в гомозиготное состояние констатируется получение новой конгенной линии

основной линии В доля генома линии А постоянно снижается, но при этом сохраняется признак а (Н-2а). К двенадцатому поколению (генерация № 12) практически весь геном от бираемых после гибридизации мышей представлен основной линией В,за исключением признака а, по которому шел отбор Для этой цели гетерозигот а/b скрещивают между собой и отбирают для дальнейшего размножения только тех особей потомства, которые отторгают кожный трансплантат, взятый от особей линии В, и не дают реакции с анти-В-сывороткой. Подобный отбор выявляет особей с отсутствием признака b (Н-2Ь) и гомозиготностъю по признаку а (11-2®). Таким образом, в результате применения такой схемы скрещивания в геном основной линии В внедряется комплекс Н-2 маркирующей линии А- С момента перевода комплекса Н-2а в гомозиготное состояние констатируется получение новой линии, кон- генной по отношению к основной линии В. Обе линии будут генетически полностью идентичны за исключением МНС.
Помимо конгенных линий мышей в распоряжении исследователей имеются рекомбинантные по МНС линии. Они отличаются друг от друга только отдельными или даже одним локусом комплекса Н-2. Рекомбинантные линии получают при анализе потомков от скрещивания двух конгенных линий. На рис. 10.3 приведен конкретный пример получения рекомбинантных линий мышей.
К настоящему времени выведено несколько сот линий мышей, объединенных в несколько групп, имеющих общий тапло- тип по комплексу Н-2, т.е. идентичный набор генов МНС. В таблице 10.1 даны примеры известных инбредных линий мышей.