(???) Контрольные вопросы по теме
1. С какой целью проводится микробиологическое обследование объектов окружающей среды в аптеках и на предприятиях фармацевтической промышленности?
2. Каковы возможные источники контаминации лекарственных препаратов в аптеках и на предприятиях фармацевтической промышленности?
3. Что подлежит санитарно-микробиологическому обследованию в аптеках, на предприятиях фармацевтической промышленности?
4. Какие требования предъявляются к микрофлоре внешней сре­ды и объектов аптек, исследуемой методом смывов?
5. О чем свидетельствует наличие бактерий группы кишечной па­лочки в исследуемом объекте аптеки?
6. Какие требования предъявляются к микробиологической чисто­те глазных капель?
7. Какие требования предъявляются к микробиологической чисто­те аптечной посуды, вспомогательному материалу (пробкам, во­ронкам, колбам, пипеткам, марлевым салфеткам, фильтроваль­ной бумаге и т. д.)?
8. Что такое метод отпечатков, метод смывов? Их информативные возможности.
9. Какой из методов наиболее приемлем для исследования мик­рофлоры передней поверхности и обшлагов медицинского хала­та; рук персонала; посуды; вспомогательного материала?
(!!!) Задания для практической работы
1. Работа с ситуационными задачами по теме.
2. Анализ методов микробиологического исследования в зависимо­сти от поставленных задач по Приказу № 309 «Инструкция по санитарному режиму аптечных организаций» и Приказу №3182-84 «Методические указания по микробиологическому контролю в аптеках».
Санитарно-микробиологическое обследование объектов и окру­жающей среды аптек проводится для:
1) осуществления контроля за общим гигиеническим состояни­ем (текущий надзор);
2) выявления фекального загрязнения (микробиологический контроль санитарно-гигиенического режима);
3) выявления контаминации патогенными микроорганизмами объектов окружающей среды как возможных факторов пе­редачи возбудителей инфекционных заболеваний (обследо­вание по показаниям).
Правила забора материала зависят от поставленных задач. Микробиологическая контаминация объектов окружающей сре­ды происходит постоянно. Главным источником микробного загряз­нения является человек: выделения верхних дыхательных путей, фекалии, слущивающийся эпидермис, волосы с колоссальным ко­личеством микроорганизмов.
Среди персонала могут быть носители патогенных микроорга­низмов и больные с легкими формами заболевания, которые они переносят на ногах (дизентерия, брюшной тиф, паратифы А и Б, сальмонеллезы и др.). Попавшие на объекты внешней среды мик­роорганизмы, в том числе и патогенные, как правило, не раз­множа­ются на них. Но такие объекты служат пассивными посред­никами при передаче возбудителя. Возможность заражения и забо­левания в таких случаях зависит от концентрации микроба, его ви­рулентности, сроков выживания во внешней среде. Так, патогенные энтеробактерии (сальмонеллы, шигеллы) могут выживать во вне­шней среде 60-80 и 14-36 дней соответственно.
Если микроорганизмы контаминируют субстанции, содержащие органические вещества (органические масла, жировые вещества, глюкоза, кремы, мази и т. п.), происходит размножение и накопле­ние попавших микробов.
Показания для санитарно-микробиологического обследования предприятий фармацевтической промышленности и аптек:
а) текущий санитарный контроль;
б) микробиологический контроль сан-гиг режима;
в) обследование по показаниям — при выявлении патогенных и санитарно-показательных микробов во внешней среде или лекарственных формах.
Принципы отбора проб
Отбор проб для санитарно-микробиологического исследования предметов, аппаратуры, рабочих поверхностей проводится с по­мощью следующих методов:
— смыв с использованием стерильного тампона или салфетки или ополаскивания мелких предметов и внутренней поверх­ности флаконов;
— контактный метод — метод «отпечатков».
Метод смывов. При отборе проб с крупных плоскостей (повер­хности рабочих столов, стен, ванн и др.) используют стерильные ватные или марлевые тампоны размером 2x2 см, не более 2 слоев. Перед употреблением их смачивают физиологическим раствором хлористого натрия или питательной жидкой средой.
Тампоны вмонтированы в пробирки, на дно которых наливается смачивающая жидкость (физиологический раствор, среда Кесслера) в объеме 3-5 мл.
На исследуемую поверхность для ограничения площади обсле­дования накладывают рамку-шаблон площадью 100 см² (10x10 см), изготовляемую из проволоки диаметром 3-5 мм. Перед взятием пробы шаблон стерилизуют пламенем горелки.
Для взятия пробы тампон опускают до дна пробирки, затем влажным тампоном производят смыв и снова погружают его в жидкость. Перед использованием салфеток их также смачивают стерильной жидкостью и после обтирания ими поверхностей пере­носят в колбу для последующего исследования.
Мелкие предметы (пробки, прокладки и т. д.) погружают непос­редственно в питательную среду (10 мл), встряхивают в течение 10 мин. Полученную смывную жидкость используют для посева.
Для забора смывов с рук: увлажненной стерильной марлевой салфеткой размером 5x5 см протирают руки обследуемого, начиная с менее загрязненных участков кожи (тыльная часть ладони, ла­донь, межпальцевые промежутки, ногтевые ложа и подногтевые пространства). Салфетки помещают в колбы с увлажняющей жид­костью и транспортируют в лабораторию с соответствующим сопро­водительным документом.
Смыв с халатов производится с площади 100 см². Обязательно исследуются передняя сторона халата и нижние части рукавов.
Смывы с аптечной посуды проводят путем ополаскивания буты­лок, флаконов и т. д. — 10-30 мл стерильного физиологического раствора с последующим мерным высевом. Одновременно исследу­ется не менее 3-5 емкостей.
Метод отпечатков. Метод применяется для определения мик­робной контаминации ровной гладкой поверхности (как горизон­тальной, так и вертикальной).
Кусочки марли в виде кружков диаметром 3—6 см, мембранные фильтры или полоски фильтровальной бумаги (все должно быть стерильным!) помещают в чашку Петри и заливают расплавленной плотной средой (3%-й МПА или среда Эндо двойной концентра­ции). После остывания стерильным пинцетом забирают кружочки марли, полоски бумаги или фильтры, накладывают стороной, про­питанной средой, на исследуемую поверхность, осторожно прижи­мая пинцетом. Затем переносят в стерильную чашку Петри нижней поверхностью вверх для последующей инкубации в термостате.
Метод отпечатков выгоден тем, что позволяет непосредственно обнаруживать загрязнение объектов.
Определение общего микробного числа
ОМЧ горизонтальных и вертикальных поверхностей, халатов, рук определяют путем мерного высева жидкости или питательной среды, которой производили смыв.
В пробирках с тампонами или в колбах, содержащих салфетки (после проведения смывов), общий объем жидкости доводят до ко­нечного объема, добавляя стерильный изотонический раствор хло­рида натрия, чтобы получилось исходное разведение 1:10. После интенсивного 2-3-минутного встряхивания готовят десятикратные разведения. В зависимости от предполагаемой степени загрязнен­ности посевы производят из нескольких разведений.
Заключение по общей микробиологической чистоте дают на ос­новании подсчетов по формуле:
М = n ^. 10 / S , (дробь)
где М — общее микробное число (КОЕ); п — количество колоний в 1 мл исходного разведения смыва (КОЕ); 10 — количество смачи­вающей жидкости, мл; S — площадь, с которой произведен смыв, см².
При оценке санитарно-гигиенического состояния предметов оби­хода и оборудования можно ориентироваться на критерии, разработанные и предложенные ЛВ Георгиевой (1977).

Степень чистоты объекта	ОМЧ
чистый	до 10 000
умеренно загрязненный	от 10 000 до 100 000
сильно загрязненный	более 100 000

При определении ОМЧ вспомогательных материалов смывную жидкость в количестве 1 мл засевают в 2 чашки Петри с мясо-пептонным агаром, предварительно расплавленным и остуженным до 40 "С, с последующей инкубацией в термостате в течение 18-24 ча­сов при t =37 °С.
Количество микроорганизмов не должно превышать 150 КОЕ с 3 флаконов (колб, цилиндров и т. д.), 5 пробок, 5 прокладок и т. д.
Определение титра бактерий группы кишечной палочки (БГКП) в смывах
Общая характеристика БГКП:
— грамотрицательные бактерии;
— не образуют спор;
— ферментируют лактозу до кислоты и газа (КГ);
— ферментируют глюкозу до КГ;
— не обладают оксидазной активностью.
Выделяются в окружающую среду только из кишечника чело­века и теплокровных животных.
К бактериям группы кишечной палочки (БГКП) относятся 4 представителя семейства энтеробактерий:
— Escherichia coli;
— Klebsiella spp.;
— Enterobacter spp.;
— Citrobacter spp.
При предполагаемой малой степени фекального. загрязнения предварительно производят посев смыва на среду обогащения (сре­ду Кесслера, глюкозо-пептонную среду) при обнаружении БГКП контактным методом или используют среду Эндо, расчет числа БГКП ведут на 1 см2 поверхности иссле­дуемого предмета.
Идентификация выделенных культур БГКП ведется как при исследовании питьевой воды.
Наличие бактерий группы кишечной палочки в смывах не до­пускается.
Исследование смывов на присутствие патогенных бактерий (ста­филококки, сальмонеллы, протеи, синегнойная палочка) проводят по общепринятым методикам санитарно-микробиологического кон­троля пищевых продуктов (3. Н. Кочемасова и др. Санитарная мик­робиология и вирусология. 1987).
Наличие патогенных кишечных бактерий, а также стафилокок­ков и синегнойной палочки в смывах не допускается.
(!!!) Практическая работа
Задание 1
В больничной аптеке проведено исследование оборотной аптеч­ной посуды, возвращающейся из отделений (инфекционного, легоч­ного, гнойной хирургии) до и после ее обработки дезраствором.
Согласно Приказу № 309, такая посуда до мытья погружается в один из дезрастворов:
1%-й активированный раствор хлорамина на 30 минут или
свежеприготовленный 3%-й раствор перекиси водо­рода на 80 минут с последующим мытьем, или
Если дезинфекция прово­дится одновременно с мытьем, для чего посуду погружают:
— в 1%-й (0,5%-й) раствор хлорцина на 120 минут;
— в 0,2%-й (0,1%-й) раствор ДП-2 на 120 минут;
— в 3%-й раствор перекиси водорода + 0,5%, моющего средства.
В данной аптеке обрабатывают 1%-м активированным раствором хлорамина.
Данные смывов представлены на чашках с питательными среда­ми до и после обработки раствором хлорамина: на МПА для опре­деления общей микробной обсемененности, на среде Эндо для оп­ределения БГКП, на среде Сабуро для определения плесневых грибов и грибов рода Candida, на желточно-солевом агаре для оп­ределения стафилококков.
Высевы сделаны мерно из 10-кратных разведений.
Оцените качественный и количественный состав микрофлоры, полученной до и после обработки, и сделайте заключение об эф­фективности предстерилизационной подготовки оборотной посуды в данной аптеке.
Дайте свои рекомендации по улучшению качества обработки.
Какие последствия могут возникнуть при использовании посуды после столь неэффективной обработки и почему?
Задание 2
Из дистиллированной воды до стерилизации (вода взята из кол­бы) выделена кишечная палочк
Параллельно с водой исследован смыв с внутренней поверхно­сти водоприемника, с рук сотрудника, работающего с дистиллято­ром. Из обоих объектов также выделена кишечная палочка.
Для решения вопроса об источнике контаминации воды было проведено колицинотипирование выделенных кишечных палочек.
Определите колицинотипы, данные внесите в таблицу и дайте заключение.
Задание 3
Методом смыва обследован стол для приготовления инъекцион­ных растворов. Обследование проведено на выявление БГКП, синегнойной палочки, стафилококка, дрожжевых и плесневых гри­бов. Для выявления БГКП посевы сделаны на среду Эндо, для вы­явления стафилококка — на желточно-солевой агар, для выявле­ния синегнойной палочки — на МПБ, для выявления дрожжевых и плесневых грибов — на среду Сабуро.
Изучите посевы, определите, выделены ли представители пере­численных групп микроорганизмов.
Предложите мероприятия по предотвращению в последующем попадания патогенных и условно-патогенных бактерий на поверх­ность стола для приготовления инъекционных растворов.