Для изучения механизмов цитолитического действия CD8 Т- клеток используют два основных приема:

• индукцию цитотоксических Т-лимфоцитов in vivo, когда для получения клеток-эффекторов иммунизируют животных антигенами клеток-мишеней (обычно это — аллогенные, или опухолевые клетки);
• индукцию таких клеток in vitro, когда созревание цитотоксических Т-клеток инициируют в смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ).

В последнем случае в качестве стимуляторов для примирова- ния используют клетки лимфоидной ткани, генетически отличающиеся от распознающих предшественников CD8 Т-лимфоцитов, модифицированные вирусом или иным антигеном (например, гап- теном) сингенные клетки, а также сингенные раковые клетки. Клет
ки-стимуляторы облучают суперлетальной дозой или обрабатывают ингибитором клеточного деления для подавления их пролиферации. Предшественники CD8 Т-клеток вносят в культуру интактными. В результате распознавания антигенов клеток-стимуляторов предшественники цитотоксических Т-лимфоцитов вступают в реакцию пролиферации и дифференцировки, что оценивается по включению 3Н-тимидина. Эффективность примирования предшественников CD8 Т-клеток оценивается во вторичной культуре по лизису клеток-мишеней, аутологичных или сингенных клеткам- стимуляторам (рис. 9.3).

Рис. 9.3. Реакция К смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ).
Эта реакция пролиферации развивается in virto при взаимодействии генетически отличающихся (аллогенных) лимфоцитов. Результат реакции состоит в накоплении цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8 Т-клеток), специфичных к антигенам гистосовместимости клеток-стимуляторов. В первичной культуре предшественники ЦТЛ (пр. CD8), представленные в суммарной популяции анализируемых лимфоцитов, после распознавания аллоантигенов клеток-стимуляторов вступают в процесс пролиферации и дифференцировки до зрелых ЦТЛ (CD8). Интенсивность пролиферативной реакции оценивают по включению 3Н-тимидина в размножающиеся клетки. Для созревания пр. CD8. необходима помощь со стороны макрофагов и хелперных CD4 Т-клеток (Тн2), образующихся из антигенраспозна- ющих предшественников (Тн0). Оценку активности накопившихся в первичной культуре CD8 Т-клеток проводят во вторичной культуре (см. рис. 9.1). В качестве мишеней используют те аллогенные клетки, которые в первичной культуре выступали стимуляторами
Установлено, что распознавание антигена предшественниками CD8 Т-клеток недостаточно для генерации функционально активных цитотоксических лимфоцитов: необходима помощь со стороны хелперных CD4 Т-клеток и макрофагов (см. ниже).