Современный уровень ультразвуковой техники позволяет получать материал плодного яйца с целью пренатальной диагностики на любых сроках беременности (см. главу 9). В настоящее время распространенными являются трансабдоминальные способы получения материала — аспирация ворсин хориона (плаценты), амниоцентез и кордоцентез. Для цитогенетического анализа в I триместре беременности используют препараты из клеток ворсинчатого хориона, во II и III триместрах материалом для исследования служат клетки плаценты, амниотической жидкости и лимфоциты крови плода (см. главу 9).
Особенности происхождения анализируемого материала, а также методы приготовления хромосомных препаратов имеют принципиальное значение для интерпретации результатов пренатальной диагностики. Напомним, что цитотрофобласт хориона, будучи производным трофэктодермы, а также мезодермальная строма ворсин хориона/пла- центы обособляются от внутренней клеточной массы на стадии бластоцисты, т. е. имеют экстраэмбриональное происхождение (см. главу 1). Амнион, формирующийся из первичной эктодермы, а также все эпителиальные клетки амниотической жидкости и лимфоциты пуповинной крови являются эмбриональными структурами. Анализ хромосом в амниоцитах и лимфоцитах плода возможен лишь после культивирования клеток, тогда как митотически делящиеся клетки хориона (плаценты) могут быть получены на «прямых» препаратах, либо после культивирования. При этом «прямой» метод основан на анализе спонтанно делящихся клеток Лангханса (цитотрофобласта), а источником делящихся клеток в культуре хориона являются мезенхимальные клетки стромы ворсин.
Хромосомный мозаицизм, обнаруженный при анализе препаратов, приготовленных любым из перечисленных методов, может оказаться истинным или ограниченным клетками исследуемой ткани. Основной проблемой диагностики с использованием препаратов культивированных клеток является артефактный мозаицизм, т. е. мозаицизм, не отражающий хромосомную конституцию плода. Вероятность диагностических ошибок, вызванных контаминацией образца клетками материнского происхождения и их способностью к клонообразованию, составляет 0,16 % при культивировании клеток амниотической жидкости и 0,4 % при культивировании клеток хориона [749]. Способность к митотическим делениям и темпы пролиферации клеток разного происхождения и с разным кариотипом в условиях in vitro могут существенно варьировать [96]. Псевдомозаицизм, обусловленный особенностями роста клеток в культуре, возникает с частотой 0,6-1,0 %. Псевдомозаицизм может относиться к одному их следующих трех типов: а) часть колонии клеток имеет аномальный кариотип; б) одна и та же хромосомная аномалия представлена во всех клетках одной колонии; в) клетки двух и более колоний в одном культуральном флаконе имеют хромосомную аномалию [749]. Очевидно, что соотношения диплоидных и анеуплоидных клеток в культурах могут значительно отличаться от реально существующих in vivo. Поэтому нам представляется, что доля анеуплоидных клеток, определенная на «прямых» препаратах, более объективно отражает частоту аномальной сегрегации хромосом in vivo. Более того, на «прямых» препаратах из отдельных ворсинок можно выяснить степень распространенности анеуплоид- ной линии, т. е. определить, ограничена она клетками одной ворсины, или представлена в разных ворсинах. При этом, однако, невозможно определить жизнеспособность анеуплоидных клеток, а локализацию анеуплоидных клеток в пределах всей плаценты можно установить лишь при исследовании последа. В специальных исследованиях с использованием метода FISH было доказано, что степень анеуплоидии в разных участках плаценты может заметно различаться [308, 844]. При анализе «прямых» хромосомных препаратов, а также полученных после культивирования, мозаицизм может остаться нераспознанным, так как аспирируется локальный участок хориона, который необязательно содержит клетки обоих клонов. Следовательно, при диагностике с использованием в качестве материала клеток плодных оболочек возможны как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты.
Как уже отмечалось, хромосомный мозаицизм, выявленный в тканях плаценты, как правило, представляет собой ограниченный плацентарный мозаицизм, который лишь в 10 % случаев соответствует истинному кариотипу эмбриона. Несоответствие между кариотипами хориона и плода может быть заподозрено в случаях обнаружения летальных и сублетальных хромосомных аномалий в биоптатах хориона или плаценты, полученных от плода без пороков развития. Вероятность ошибочного диагноза при использовании биоптатов хориона (плаценты) существенно снижается при сочетании «прямого» метода с анализом культивированных клеток.
Однако во всех случаях мозаичного кариотипа в плаценте для установления его типа необходим анализ хромосомного набора самого плода, для чего производится цитогенетическое исследование лимфоцитов пуповинной крови, либо клеток амниотической жидкости. Таким образом, окончательный диагноз ограниченного плацентарного мозаицизма устанавливается только после получения информации о кариотипе в клетках самого плода.