Лабораторная работа 3-4 Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов человека

  Последовательность выполнения операций:
• кровь из пальца (или из венозной крови до контакта с антикоагулянтом) в количестве 0,1 мл помещают на тщательно вымытое обезжиренное покровное стекло;
  • покровное стекло выдерживают во влажной камере при 37 °С 45 мин, после чего образовавшийся сгусток осторожно удаляют пинцетом;
  • покровное стекло с прикрепленными нейтрофилами промывают в растворе Хенкса;
  • на покровное стекло наносят фагоцитируемую взвесь и снова выдерживают во влажной камере (клетками вверх) при 37 °С в течение 30 мин (в качестве объекта фагоцитоза могут быть использованы частицы латекса, опсонизированный зимозан,

S.              aureus). На покровное стекло осторожно наносят 0,2 мл суточной культуры лабораторного штамма S. aureus в концентрации 108 бактерий на 1 мл;
  • после инкубации в течение 60 мин стекло промывают в растворе Хенкса для удаления непоглощенных частиц и высушивают;
  • высушенный препарат фиксируют 5 мин в метаноле. Окрашивают гематоксилином Караччи (4 мин) с докраской эозином (30 с);
  • после проведения через гистологическую батарею спирт-ксилол препарат заключают в канадский бальзам;
  • учет фагоцитарной активности осуществляют, определяя процент нейтрофилов с фагоцитированным материалом (фагоцитарное число) и количество поглощенных частиц из расчета на один нейтрофил (фагоцитарный индекс). На каждом стекле для этой цели исследуют не менее 200 клеток.

Источник: под ред. Л. В. Ковальчука, Г. А. Игнатьевой, Л. В. Ганковской., «Иммунология : практикум : учеб, пособие» 2010

А так же в разделе «  Лабораторная работа 3-4 Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов человека »