Оценка функциональной активности NK-клеток с использованием проточной цитометрии
В качестве метки для КМ применяют флуоресцентный краситель 5-, 6-карбоксифлуоресцеин диацетатсукцинилмидиловый эфир (КФДЭ), который образует прочную ковалентную связь с внутриклеточными белками и в используемой концентрации не влияет на жизнеспособность клетки.
Первоначально нефлуоресцирующий КФДЭ проникает через клеточную мембрану. Карбоксифлуоресцеины связываются с внутриклеточными молекулами, формируя конъюгаты, обеспечивая стойкое флуоресцентное окрашивание клетки. Окрашенные таким образом КМ К-562 смешивают с КЭ и инкубируют в течение нескольких часов. После окончания культивирования клетки окрашивают пропидий йодидом для определения убитых в ходе реакции КМ. По количеству убитых К-562 определяют активность NK-клеток. Анализ проводят на проточном цитофлуориметре и определяют количество КМ, включивших КФДЭ (зеленое свечение), и количество убитых клеток, включивших пропидий йодид (красное свечение).
Антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность
In vivo случается чаще всего в патологических условиях и направлена на безъядерные клетки — эритроциты и тромбоциты, реже на ядросодержащие клетки крови, например нейтрофилы. Проявляются эти процессы в форме гемолитических анемий, тромбоцитопений, нейтропений. Этиология, как правило, либо инфекционная, либо лекарственная.
Первоначально нефлуоресцирующий КФДЭ проникает через клеточную мембрану. Карбоксифлуоресцеины связываются с внутриклеточными молекулами, формируя конъюгаты, обеспечивая стойкое флуоресцентное окрашивание клетки. Окрашенные таким образом КМ К-562 смешивают с КЭ и инкубируют в течение нескольких часов. После окончания культивирования клетки окрашивают пропидий йодидом для определения убитых в ходе реакции КМ. По количеству убитых К-562 определяют активность NK-клеток. Анализ проводят на проточном цитофлуориметре и определяют количество КМ, включивших КФДЭ (зеленое свечение), и количество убитых клеток, включивших пропидий йодид (красное свечение).
Антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность
In vivo случается чаще всего в патологических условиях и направлена на безъядерные клетки — эритроциты и тромбоциты, реже на ядросодержащие клетки крови, например нейтрофилы. Проявляются эти процессы в форме гемолитических анемий, тромбоцитопений, нейтропений. Этиология, как правило, либо инфекционная, либо лекарственная.
А так же в разделе « Оценка функциональной активности NK-клеток с использованием проточной цитометрии »
- ОЦЕНКА ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ
- ОЦЕНКА КЛЕТОЧНОЙ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ
- Лабораторная работа 3-1
- Определение перфорина методом ELISPOT
- Связывание с тетрамерными структурами МНС класса I
- Определение каспаз методом проточной цитофлуорометрии
- Определение цитотоксической активности NK-клеток
- Лабораторная работа 3-2
- Комплементзависимая цитотоксичность
- ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТОВ
- Лабораторная работа 3-3 Определение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов
- Лабораторная работа 3-4 Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов человека
- Метод оценки хемотаксиса нейтрофилов с использованием камеры Бойдена
- Особенности постановки методов оценки хемотаксиса in vitro
- Лабораторная работа 3-5 Получение супернатанта, содержащего цитокины и другие биологически активные молекулы из моноцитов периферической крови человека
- Определение выработки активных форм кислорода и оксида азота
- Описание метода люминолзависимой хемилюминесценции
- Определение содержания NO в супернатантах культуры фагоцитов in vitro
- Оценка киллинга фагоцитов
- Определение активности миелопероксидазы в лейкоцитах периферической крови
- Количественная оценка антителообразующих клеток (метод Йерне)
- Постановка реакции выявления АОК (метод Н. Йерне)