Определение перфорина методом ELISPOT
Белок перфорин является необходимым компонентом лизиса, осуществляемого ЦТЛ и NK-клетками для уничтожения КМ. Метод ELISPOT (см. гл. 4) широко применяется для определения выработки цитокинов антигенспецифическими Т-клетками. Метод ELISPOT достаточно чувствителен для выявления перфорина после активации ЦТЛ соответствующими антигенными эпитопами, например вирусными (потенциально годен для использования любой эпитоп). При выполнении данного метода на дне лунки пластикового планшета фиксируются монАТ к перфорину. Недостаток метода — отсутствие возможности определить фенотип клеток, секретирующей перфорин, что частично компенсируется обогащением фракции ЦТЛ магнитной сепарацией. В экспериментах с использованием иммуномагнитной сепарации показано: основную популяцию клеток, образующих «пятна», составляют CD8+ Т-лимфоциты (80—90%).
А так же в разделе « Определение перфорина методом ELISPOT »
- ОЦЕНКА ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ
- ОЦЕНКА КЛЕТОЧНОЙ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ
- Лабораторная работа 3-1
- Связывание с тетрамерными структурами МНС класса I
- Определение каспаз методом проточной цитофлуорометрии
- Определение цитотоксической активности NK-клеток
- Лабораторная работа 3-2
- Оценка функциональной активности NK-клеток с использованием проточной цитометрии
- Комплементзависимая цитотоксичность
- ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТОВ
- Лабораторная работа 3-3 Определение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов
- Лабораторная работа 3-4 Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов человека
- Метод оценки хемотаксиса нейтрофилов с использованием камеры Бойдена
- Особенности постановки методов оценки хемотаксиса in vitro
- Лабораторная работа 3-5 Получение супернатанта, содержащего цитокины и другие биологически активные молекулы из моноцитов периферической крови человека
- Определение выработки активных форм кислорода и оксида азота
- Описание метода люминолзависимой хемилюминесценции
- Определение содержания NO в супернатантах культуры фагоцитов in vitro
- Оценка киллинга фагоцитов
- Определение активности миелопероксидазы в лейкоцитах периферической крови
- Количественная оценка антителообразующих клеток (метод Йерне)
- Постановка реакции выявления АОК (метод Н. Йерне)