Методы консервирования и ресуспендирования эритроцитной массы позволяют сохранять ее определенное время, после чего использование считается невозможным из-за наступивших морфофункциональных нарушений. В практике службы крови все еще имеет место брак эритроцитной массы из-за истечения срока годности.
Это положение послужило основанием для поиска методов восстановления («омолаживания») эритроцитов, утративших свою полноценность в процессе хранения.
В 1969 г. Valeri С. предложил метод «омолаживания» эритроцитов путем инкубации их с метаболитами обмена веществ (аденин, пируват и фосфат натрия, инозин, глюкоза). В США этот метод прошел клинические испытания.
Мы также изучили возможность применения метаболитов углеводнофосфорного обмена в составе гемоконсервантов.
Разработанный В.А. Аграненко, Н.Н.Тибловой метод восстановления («омолаживания») эритроцитной массы после предельных сроков хранения заключается в 1,5-часовой инкубации при 37 °С эритроцитной массы в восстанавливающем растворе «эритропифаден», содержащем отечественные препараты квалификации «хч» (нетоксичные метаболиты): рибоксин 24,8 мМ, пируват натрия 24,8 мкМ, фосфат натрия 14 мкМ, аденин 1,56 мкМ на основе физиологического раствора хлорида натрия (pH 7,76).
Особенностью рецептуры отечественного восстанавливающего раствора является то, что он безглюкозный, стерилизация его проводится в обычном режиме — 1,2 атм. в течение 30 мин. Это стало возможным в связи с тем, что отечественные гемоконсерванты содержат достаточное количество глюкозы, которого вполне хватает для метаболизма красных клеток крови даже после предельных сроков хранения.
Первые работы в нашей стране в этом направлении (В.А. Аграненко и др., 1976, 1977; Н.Н. Тибилова, 1976; Н.А. Мелкикян, 1977) показали, что применение этого метода к эритотроцитной массе после 21 дня хранения позволяет восстановить концентрацию 2,3-ДФГ до 80% от исходных значений, наблюдаемых в день заготовки крови от донора; концентрация АТФ и величина Р50 восстанавливаются до 100—125%; приживаемость возрастает на

10. 12% от нормы. Значительно улучшаются элекгрокинетические свойства эритроцитов. Реологические свойства эритроцитной массы улучшаются, приближаясь к показателям консервированной крови 7 дней хранения; pH эритроцитной массы (взвеси) возрастает с 6,68 в 21-й день хранения до 6,88 после процедуры «омолаживания».

В процессе инкубации эритроцитной массы с метаболитами не происходит дополнительного нарастания свободного гемоглобина в супернатанте. Морфологическая картина эритроцитов улучшается за счет нарастания количества дискоцитов (с 7% до 22,5%) после «омолаживания» и снижения непереходных форм с 46,0% до 21,0%.
Восстановленная, таким образом, функциональная полноценность эритроцитов после предельных сроков хранения может быть сохранена в течение

3. 4 суток при 4 °С, затем вновь наступает резкое снижение всех параметров красных клеток.

В связи с этим нами были изучены два возможных пути сохранения восстановленных эритроцитов. Первый — это увеличение концентрации всех входящих в состав ингредиентов (Н.Н. Тибилова). Такой подход позволяет сохранить концентрацию основных фосфорорганических соединений (АТФ, 2,3-ДФГ) и величину Р50 до 35—42-го дня последующего хранения эритроцитной взвеси в этом «омолаживающем» растворе.
Однако, по имеющимся в литературе данным, при массивных трансфузиях эритроцитной взвеси в таком растворе существует риск почечных осложнений продуктами метаболизма аденина и инозина. Хотя риск этот незначительный (по данным Bartlett, 1973 и др., для образования кристаллов диоксиаденина в почках необходимо произвести 30—80 трансфузий цельной крови или 200 трансфузий эритроцитной массы), все же его необходимо учитывать. Второй путь — использование метода криоконсервирования «омоложенных» эритроцитов в жидком азоте при -196 °С, явился наиболее перспективным для применения в службе крови.
После размораживания и отмывания «омоложенных» после 21-го дня хранения эритроцитов их функциональная полноценность в течение последующих 24 ч не ухудшалась. Изученное нами хранение «омоложенных» эритроцитов до года в жидком азоте показало, что при этом не снижается содержание 2,3-ДФГ и АТФ в эритроцитах.
По нашим данным и публикациям (Valeri, 1980) можно сделать вывод, что хранение в жидком азоте в течение нескольких лет не оказывало отрицательного влияния на биохимический статус «омоложенных» эритроцитов.
С учетом того, что метод криоконсервирования эритроцитов внедрен в практику службы крови и широко применяется в стране, очевидна целесообразность и возможность криоконсервирования «омоложенных» эритроцитов. Кроме того, в процессе криоконсервирования и последующего размораживания и отмывания клеток практически все неиспользованные эритроцитами метаболиты обмена удаляются и полностью снижается риск почечных осложнений даже при массивных трансфузиях.
Дополнительно проведенные в нашей лаборатории токе и ко-фармакологические исследования на животных (О.И. Лопырева) показали полную безвредность восстанавливающего («омолаживающего») раствора, а клинические исследования на больных доказали эффективность трансфузий «омоложенных» криоконсервированных эритроцитов при острых и хронических анемических состояниях, которая сравнима с эффективностью трансфузий свежезаготовленной эритроцитной массы.
Использование метода криоконсервирования восстановленных после предельных сроков хранения эритроцитов позволит утилизировать большие объемы эритроцитной массы, остающейся в учреждениях службы крови и в настоящее время выбраковывающейся, а также даст возможность создавать ее запасы.
Новые перспективы открывает использование метода «омолаживания» эритроцитов после 7—15 дней хранения. При этом концентрация 2,3-ДФГ, АТФ может быть увеличена в 1,5—2 раза по сравнению со значениями, наблюдаемыми в исходный день хранения (Valeri С., 1972, 1974, 1979) и, следовательно, позволяет повысить кислородтранспортную функцию эритроцитов.
Трансфузии таких эритроцитов с повышенным содержанием 2,3-ДФГ и соответственно с улучшенными кислородтранспортными свойствами могут быть назначены реципиентам с выраженной анемической гипоксией при острой кровопотере и шоке, острых гипоксиях мозга и миокарда и других состояниях, когда необходима быстрая доставка кислорода тканям.
Другое новое и перспективное направление — использование сочетанного метода «омолаживания» и гемосорбции (В.А. Аграненко, А.Л. Белкин, Н.Н. Тибилова, 1981) цельной консервированной крови после предельных сроков ее хранения.
Применением восстанавливающего («омолаживающего») раствора для восстановления полноценности цельной консервированной крови после сверхдлительного ее хранения удавалось «омолодить» лишь красные клетки: содержание в них АТФ, 2,3-ДФГ и Р50 становилось близким к исходному, однако, концентрация кислых метаболитов и свободного гемоглобина в плазме оставалась на том же уровне.
Использование только метода гемосорбции длительно хранившейся консервированной крови неизменно приводило к освобождению плазмы от кислых продуктов метаболизма эритроцитов: удалялся избыток анионов цитрата, значительно улучшался кислотно-щелочной статус крови, снижалось содержание свободного гемоглобина, но при этом функциональное состояние красных клеток не улучшалось (В.А. Аграненко и др. 1979; Н.Н. Тибилова, Н.А. Маркова, 1980).
Наши исследования показали, что раздельное использование «метода омолаживания» и метода гемосорбции не позволяло восстанавливать функциональную полноценность консервированной крови и одновременно удалить кислые продукты метаболизма клеток, свободный гемоглобин, накапливающиеся в процессе длительного хранения.
В консервированной крови, подвергнутой процедурам «омолаживания» и гемосорбции, происходит не только восстановление основных биохимических показателей — содержание АТФ, 2,3-ДФГ и Р50 в эритроцитах, но также и снижение концентрации кислых продуктов метаболизма (молочной, пировиноградной, мочевой кислот), калия, свободного гемоглобина, pH, которые становятся близкими к показателям свежезаготовленной крови.
Известно (Valeri С.), что избыточное содержание в крови метаболитов углеводно-фосфорного обмена (аденина, инозина и др.), применяемых в растворах для «омолаживания » эритроцитов, при введении в массивных дозах может оказывать токсическое действие на организм реципиента.
Нами были поставлены дополнительные стендовые опыты с целью изучения влияния процесса гемосорбции на удаление избыточных концентраций метаболитов и анионов цитрата.
Для этого приготавливали растворы с точным содержанием названных соединений и подвергали их гемосорбции при тех же условиях, что и кровь.
На основании данных предварительных исследований мы полагали, что применение «омолаживающего» раствора даст возможность восстановить функциональную полноценность эритроцитов, утраченную в процессе длительного хранения консервированной крови, а последующая гемосорбция удалит из ее плазмы продукты метаболизма. Таким образом, в конечном итоге можно будет получить восстановленную цельную консервированную кровь.
Концентрация инозина и аденина после гемосорбции снижалась соответственно в 10 и 8 раз (с 6,0 мэкв/л до 0,6 мэкв/л и с 2,0 мэкв/л до 0,25 мэкв/л), а анионов цитрата — в 2,5 раза (с 3,40 мэкв/л до 1,62 мэкв/л).
Такое действие гемосорбции может иметь определенное значение при использовании массивных доз трансфузий консервированной крови, подвергнутой «омолаживанию» и гемосорбции.
В.А. Аграненко, Н.Н. Тибиловой, А.Л. Белкиным (1991) изучена также функциональная полноценность консервированной (восстановленной) крови указанными методами после длительных сроков хранения с помощью метода (Сг51) приживаемости.
Исследования указывают на значительное улучшение (более чем на 20%) приживаемости восстановленной консервированной крови по сравнению с кровью 21-го дня хранения, не подвергнутой обработке. Эти значения (92,5%) аналогичны показателям приживаемости эритроцитов консервированной крови в день ее заготовки.
В результате проведенных нами исследований впервые показано, что разработанный метод совместного применения методов «омолаживания» и гсмосорбции цельной консервированной крови после длительных (21—28 дней) сроков хранения позволяет восстановить ее биологическую, функциональную полноценность и снизить токсичность.
Этот метод дает возможность из выбраковывающейся в настоящее время по срокам хранения цельной консервированной крови получить полноценную трансфузионную среду, в основном не отличающуюся по всем изученным показателям in vitro и in vivo от свежезаготовленной консервированной крови.