Наиболее полное представление о кариотипе можно получить на препаратах дифференциально окрашенных хромосом. Методы дифференциального окрашивания позволяют идентифицировать каждую хромосому набора по специфичному для гомологичной пары линейному рисунку в соответствии с основными типами окрасок: Q, G и R.

1. Методы G-окраски хромосом
1. Метод GTG

Протокол 3.1 [511]
Растворы

1. Буферный раствор SKN, pH 7,8 (для «прямых» препаратов) или GKN, pH 7,8 (для культивированных клеток).
2. 0,25%-й раствор трипсина. Трипсин растворить в буфере SKN, pH 7,8.
3. 5%-й раствор красителя Гимза: 1 мл маточного раствора красителя растворить в 20 мл буфера SKN, pH 7,0.

Техника окрашивания

1. Препараты (свежеприготовленные или хранившиеся при комнатной температуре не более 10 дней) выдержать при 100 °С в течение 30 мин.
2. Охладить приблизительно до 30-40 °С.
3. Обработать 2-5 сек в растворе трипсина.
4. Ополаскивать (10-15 сек) в буфере SKN, рН 9,0.
5. Окрашивать 5-10 мин, нанося на препарат по 2-3 мл красителя.
6. Смыть краситель проточной водой и высушить.

Примечания

1. Необходимо пользоваться свежеприготовленным буферным раствором.
2. Каждый препарат следует окрашивать свежей порцией красителя.

Протокол 3.2 Растворы

1. Раствор GKN, pH 7,0.
2. Раствор версена.
3. 0,25%-й раствор трипсина (на воде или физиологическом растворе).
4. 2%-й раствор красителя Гимза на 0,01 М Na-фосфатном буфере.

Техника окрашивания

1. Свежеприготовленные препараты оставить на ночь, хранившиеся при комнатной температуре 2-3 дня — на 1 час, при +60 °С.
2. Обработать при комнатной температуре в смеси растворов версе- на (30 мл), GKN (24 мл) и трипсина (6 мл). Время обработки подбирать эмпирически для каждой серии препаратов (30 сек — 3 мин).
3. На 15 сек поместить в GKN.
4. Окрашивать 3-7 мин красителем Гимза, нанося на каждый препарат свежую порцию красителя.
2. Методы G-окраски без применения трипсина

Протокол 3.3

1. На свежеприготовленные препараты из клеточной суспензии нанести по 2-3 мл 2%-го раствора красителя Гимза, заблаговременно (за 6-8 часов) приготовленного на стандартном фосфатном буфере, рН 6,8.
2. Окрашивать в течение 5-7 мин.
3. Промыть проточной водой и высушить.

Протокол 3.4 [283]

1. На свежеприготовленные или хранившиеся при комнатной температуре не более 10 дней препараты нанести под покровные стекла 0,4-0,5 мл буферного раствора 2xSSC и облучать в течение 15-25 мин под ультрафиолетовой лампой. Источник УФС типа ОКН-11 должен находиться на расстоянии 20-25 см, типа ОРК-21 — 45-50 см от поверхности препарата.
2. Покровные стекла смыть проточной или дистиллированной водой.
3. На влажные стекла нанести по 2-3 мл 3-4%-го раствора красителя Гимза на стандартном фосфатном буфере, рН 6,8, окрашивать 5-10 мин.
4. Промыть проточной водой и высушить.

Протокол 3.5 [819]

1. Препараты поместить в раствор 2xSSC и инкубировать в течение 1-2 часов при +60 оС.
2. Дегидратировать в серии спиртов (70°, 80°, 96°), высушить.
3. Окрашивать 3-5%-м раствором красителя Гимза на 0,06 М K-Na- фосфатном буфере, pH 6,8, 5-8 мин.
4. Промыть проточной дистиллированной водой, высушить.