В отличие от G- или R-дифференциальной окраски, которые позволяют получить исчерченность вдоль хромосомы и на основе этого рисунка идентифицировать каждую хромосому, методы избирательного окрашивания направлены на выявление отдельных районов хромосом, в частности, прицентромерного гетерохроматина сегментов (С-окрашивание) или активных ядрышкообразующих районов (ЯОР- или NOR-окрашивание).

1. Метод CBG

С помощью С-метода выявляются центромерные районы всех хромосом, а также полиморфные гетерохроматиновые блоки, локализованные в прицентромерных районах акроцентрических хромосом и в длинных плечах хромосом 1, 9, 16 и Y.
Протокол 3.11 [64]

1. Препараты, хранившиеся после приготовления 3-10 дней при +37 °C, инкубировать в 0,2 N HCl при комнатной температуре в течение 1 часа.
2. Промыть проточной дистиллированной водой или в трех сменах воды, слегка подсушить.
3. Инкубировать в насыщенном (5 %) растворе Ва(ОН)2 при 60 °С в течение 3-20 мин (время обработки обратно пропорционально сроку хранения препаратов и раствора Ва(ОН)2. Желательно использовать свежеприготовленный раствор Ва(ОН)2.
4. Промыть препарат в 0,1 N HCl, затем в трех сменах дистиллированной воды и слегка подсушить.
5. Инкубировать в 2xSSC при +60 °С в течение 1 часа (время инкубирования можно увеличивать до суток при комнатной температуре).
6. Окрашивать 10-15 мин в растворе красителя Гимза (40 мл 0,1 М фосфатного буфера, рН 6,8, 1,2 мл метанола и 2 мл красителя).

2. Метод G-11

При этом методе гетерохроматиновые блоки на хромосоме 9 окрашиваются в густой розово-пурпурный цвет в отличие от всех других районов хромосом. Метод особенно удобен при уточнении инверсий этого участка.
Протокол 3.12 [64]

1. Приготовить 2%-й раствор красителя Гимза на дистиллированной воде, рН 11,0, используя 0,1 М раствор NaOH.
2. Нанести на препарат свежеприготовленный раствор красителя и окрашивать в течение 5-10 мин.
3. Смыть краситель проточной водой, высушить.

Примечания

1. Для окрашивания пригодны препараты, хранившиеся 7-10 дней.
2. Для свежеприготовленных препаратов условия (время, вариации рН от 10,5 до 11,6) подбираются эмпирически.

3. Методы с использованием флуорохромов Растворы

1. Цитратно-фосфатный буферный раствор, рН 7,0 и рН 4,0.
2. Раствор метилового зеленого.

Маточный раствор — 1,76 % на буфере, рН 4,0. Раствор можно сохранять при +4 °С в течение нескольких месяцев.
Рабочий раствор (готовить непосредственно перед употреблением) —
маточный раствор развести в соотношении 1 : 50 буферным раствором с рН 7,0.

3. Рабочий раствор флуорохрома Hoechst 33258 (способ приготовления см. в методе QFH).
4. Заключающий раствор (см. там же).

Протокол 3.13 [16]

1. На препараты (свежеприготовленные или хранившиеся несколько дней) нанести по 2-4 мл рабочего раствора метилового зеленого и инкубировать 25-30 мин при комнатной температуре.
2. Промыть проточной дистиллированной водой, высушить.
3. Окрашивать флуорохромом Hoechst 33258 как при QFH-технике.
4. Под покровные стекла нанести по 1 капле заключающего раствора.
5. Анализировать как QFH-исчерченность.

Примечания

1. Метод позволяет выявлять гетерохроматиновые блоки преимущественно на 9, а также на 1, 13-15, 16, 19, 21, 22 и Y хромосомах.
2. При получении тусклой флуоресценции можно докрасить препарат флуорохромом Hoechst 33258 и наоборот.
3. При использовании препаратов, ранее окрашенных для анализа QFH-рисунка, увеличить время обработки метиловым зеленым и сократить до 5 мин повторное окрашивание флуорохромом Hoechst 33258.
4. Препараты, окрашенные ранее красителем Г имза для рутинного анализа, обесцветить в стандартном фиксаторе (этанол — ледяная уксусная кислота, 3:1).