предыдущая
к содержанию
следующая

  Методы R-окраски хромосом (RHG, RFA)

  Рисунок хромосом при R-окраске противоположен G-рисунку, что делает его незаменимым для анализа некоторых типов аберраций, особенно при идентификации ломкой Х-хромосомы на дифференциально окрашенных препаратах. Несмотря на то, что метод очень капризен, ему отдают предпочтение как основному методу дифференциального окрашивания в некоторых зарубежных лабораториях.
Растворы
  1. 06.М фосфатный буфер Соренсена.

Протокол 3.6 [875]
  1. Препараты инкубировать в предварительно нагретом буферном растворе. Температуру и время подбирать для каждой партии препаратов эмпирически, увеличивая жесткость обработки в зависимости от времени хранения препаратов (6-10 мин при 85 °С для препаратов 10-30-дневной давности и 60-120 мин при 87 °С для односуточных).
  2. Промыть препараты в порции буфера при комнатной температуре и затем проточной дистиллированной водой.
  3. Провести препараты через серию спиртов повышающейся концентрации (70 °, 80 °, 96 °). Этот этап не является строго обязательным, его используют только в случае чрезмерного разбухания хромосом вследствие предобработки.

Протокол 3.7 (RHG-метод)
  1. Окрашивать препараты красителем Гимза (4-5 % в буфере Соренсена, рН 6,7) 10-12 мин.
  2. Смыть краситель проточной водой, высушить.
  3. Анализировать препараты в проходящем свете с фазово-контрастным устройством.

Протокол 3.8 (RFA-метод)
  1. Окрашивать препараты акридиновым оранжевым (0,01 % в буфере Соренсена, рН 6,5) 4-5 мин.
  2. Промыть препараты тем же буферным раствором 1 мин, заключить под покровное стекло в каплю того же буферного раствора.
  3. Анализировать на люминесцентном микроскопе при длине волны 450-500 нм.

Примечания
  1. Свежеприготовленные препараты нуждаются в более длительной обработке. Однако следует иметь в виду, что при увеличении продолжительности обработки тип окрашивания может видоизменяться в направлении R-, RT-, TC-, С-рисунков.
  2. RHG-метод требует подбора условий для каждой новой партии препаратов и красителя Гимза.
  3. RFA-метод позволяет получить более стабильный рисунок. 
предыдущая
к содержанию
следующая

Источник: Баранов В.С., Кузнецова Т. В., «Цитогенетика эмбрионального развития человека: Научно-практические аспекты» 2007

А так же в разделе «  Методы R-окраски хромосом (RHG, RFA) »