Для проведения гибридизации in situ пригодны цитологические или гистологические препараты клеток любых тканей или органов, приготовленные по стандартным методикам. В условиях клинической цитогенетической лаборатории используют препараты культивированных лимфоцитов периферической крови, клеток цитотрофобласта хорио- нального эпителия, культивированных и некультивированных клеток амниотической жидкости, различных тканей из абортного материала, а также мазков клеток буккального эпителия и крови.
Приготовление препаратов хромосом и интерфазных ядер из культивированных лимфоцитов и др. клеток, а также прямых препаратов хромосом и интерфазных ядер из различных тканей описано выше.
В данном разделе мы приводим методики приготовления препаратов из других типов клеток.
Протокол 5.4 (приготовление мазков буккального эпителия)

1. На чистом, обезжиренном стекле приготовить мазок из соскоба клеток буккального эпителия, равномерно распределив материал шпателем по стеклу.
2. Высушить препарат на воздухе.

Протокол 5.5 (приготовление мазков крови)

1. На чистом, обезжиренном стекле приготовить мазок из капли периферической крови, равномерно распределив материал по стеклу другим стеклом.
2. Высушить препарат при комнатной температуре.
3. Через 2-3 часа на препарат нанести 1-2 мл охлажденного свежеприготовленного фиксатора (метанол + ледяная уксусная кислота, 3 : 1) на 30-60 сек.
4. Поджечь фиксатор и, не дожидаясь его полного сгорания, погасить пламя.
5. Высушить препарат на воздухе.

1. Приготовление препаратов некультивированных клеток амниотической жидкости

Растворы
Гипотонический раствор — 0,56%-й раствор КС1.
Протокол 5.6

1. Образцы амниотической жидкости по 6-8 мл перенести в центрифужные пробирки и центрифугировать при 1000 об/мин в течение 10 мин.
2. Осторожно удалить пипеткой надосадочную жидкость, добавить к осадку по 8 мл гипотонического раствора и перемешать.
3. Инкубировать смесь 1,5 часа в термостате при +37 °C.
4. Центрифугировать при 1000 об/мин в течение 10 мин.
5. Осторожно удалить пипеткой надосадочную жидкость.
6. Фиксировать материал дважды свежеприготовленным фиксатором (метанол + ледяная уксусная кислота, 3 : 1). Фиксацию проводить при +4 °С, первую в течение 10, вторую — 20 мин.
7. Осадить клетки центрифугированием при 1000 об/мин в течение 10 мин.
8. Осторожно удалить пипеткой надосадочную жидкость.
9. К осадку добавить ледяную уксусную кислоту, 8 мл на пробирку, перемешать и выдержать пробирки при + 4 °С 1,5 часа.
10. Осадить клетки центрифугированием при 1000 об/мин в течение 10 мин, и осторожно удалить надосадочную жидкость.
11. Добавить к осадку 6 мл свежеприготовленного фиксатора, перемешать и выдержать смесь 10 мин при +4 °С.
12. Осадить клетки центрифугированием — 1000 об/мин, 10 мин, и осторожно удалить надосадочную жидкость.
13. Добавить к осадку 6 мл охлажденного метанола, перемешать и выдержать смесь 10 мин при +4 °С.
14. Осадить клетки центрифугированием — 1000 об/мин, 10 мин, и осторожно удалить надосадочную жидкость.
15. Добавить к осадку 1,5-2 мл охлажденного метанола и перемешать.
16. Суспензию клеток по 50-100 мкл раскапать на охлажденные чистые и обезжиренные стекла и высушить поджиганием фиксатора.

2. Приготовление препаратов из эякулята [89, 621]

До приготовления препаратов эякулят можно хранить в темном помещении при температуре +4 °С не более 24 часов.
Растворы

1. Гипотонический раствор — 0,038 М раствор КС1.
2. Раствор для деконденсации хроматина сперматозоидов — 0,2 М TRIS-HCl, рН 8,6, 1,25 % папаина, 0,16 % дитиотрейтола (ДТТ) и 0,5 % диметилсульфоксида (ДМСО).
3. Раствор для отмывки — 0,2 М TRIS-HCl, pH 8,6.

Протокол 5.7

1. Образцы спермы (по 0,5 мл) перенести в центрифужные пробирки, добавить в них по 8 мл гипотонического раствора и перемешать.
2. Инкубировать смесь 30 мин в термостате при +37 °C.
3. Центрифугировать 20 мин при 1500 об/мин.
4. Осторожно удалить пипеткой надосадочную жидкость.
5. Фиксировать материал свежеприготовленным фиксатором (метанол + ледяная уксусная кислота, 3:1). Первую фиксацию проводить при +4 °С в течение 30 мин. Затем фиксатор сменить трижды, время каждой фиксации — 15-20 мин.
6. Суспензию клеток по 0,1 мл нанести на охлажденные чистые и обезжиренные стекла.
7. Высушить стекла поджиганием фиксатора.
8. Выдержать препараты двое-трое суток при комнатной температуре в сухом темном месте.
9. Инкубировать препараты в растворе для деконденсации при +37 °С 30 мин.
10. Отмыть препараты в растворе для отмывки при комнатной температуре в течение 10 мин при покачивании.
11. Высушить препараты на воздухе.