ОСНОВНЫЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ОЦЕНКИ ЭРИТРОПОЭЗА, ПОЛУЧАЕМЫЕ НА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ АНАЛИЗАТОРАХ

  RBC (red blood cells) - количество эритроцитов крови (х 10|2/л). Определение количества эритроцитов осуществляется путем вычитания из общего числа клеток в цельной крови тромбоцитов и лейкоцитов. Для исключения из счета тромбоцитов, которые имеют существенно меньшие размеры по сравнению с эритроцитами и лейкоцитами, используются пороговые значения. Считаются все частицы размером более 36 фл. Следует отметить, что в некоторых гематологических анализаторах лейкоциты включаются в подсчет вместе с эритроцитами, но их влияние в норме незначительно, т. к. количество лейкоцитов существенно меньше (на 3 порядка - несколько тысяч) числа эритроцитов (несколько миллионов). В случаях гиперлейкоцитоза ошибка измерения эритроцитов возрастает (табл. 1).
Таблица 1
Возможные ошибки измерения RBC

Ложное завышение

Ложное занижение

• Гигантские тромбоциты

• Агглютинация эритроцитов

(с объемом более 30 фл)

• Выраженный микроцитоз

• Криоглобулинемия

эритроцитов

• Высокий лейкоцитоз (более 50 х 109/л)

• Гемолизированные образцы крови

Присутствие криоглобулинов может вызывать увеличение показателей WBC, RBC или PLT и концентрации HGB. В таких случаях следует прогреть образец крови до 37 °С в течение 30 минут и немедленно провести измерение образца. Криоглобулинемия может наблюдаться у больных миеломой, макро гл обул и нем ией Вальденстрема, злокачественными новообразованиями, лейкозом, лимфопролиферативными и аутоиммунными заболеваниями, вирусным гепатитом, сахарным диабетом.

Агглютинация эритроцитов может привести к занижению показателей RBC, увеличению MCV. Это можно проверить по повышенным значениям МСН и МСНС.
150 клеток (общее количество              45 х 109/л (количество клеток
лейкоцитов и нормобластов, — в 1 мкл, полученное при подсчете полученное при подсчете лейко-              в камере или на анализаторе)
цитарной формулы)

— X (истинный лейкоцитоз крови)
Таким образом, истинное число лейкоцитов в крови составляет 30 х Ю9/л.
В анализаторах фирмы Sysmex (ХЕ-2100, ХТ-2000Г) и Bayer (ADVIA 120) при наличии нормобластов в крови коррекция лейкоцитов проводится автоматически. Следует отметить, что порог чувствительности определения нормобластов в анализаторе Sysmex ХЕ-2100 составляет менее 20/мкл, что с помощью микроскопического исследования определить представляется невозможным.
Нормобласты появляются в периферической крови при онкогематологи- ческих заболеваниях, анемиях (гемолитические, В|2- и фолиеводефицитные), метастатическом поражении костного мозга, тяжелых септических состояниях и интоксикациях. Появление нормобластов в послеоперационном периоде является плохим прогностическим признаком, предсказывающим возможный летальный исход. Наличие в крови нормобластов может расцениваться как маркер гипоксии и воспаления.
HGB (hemoglobin): концентрация гемоглобина (г/дл или г/л) в большинстве гематологических анализаторов определяется фотометрически. Коэффициент вариации при этом не превышает 2%. Причины получения ошибочных результатов приведены в табл. 2.
Таблица 2
Возможные ошибки измерения HGB

Ложное завышение

Ложное занижение
  • Высокий лейкоцитоз (более 100 х 109/л)
  • Присутствие нестабильных гемоглобинов (HbS, НЬС)
  • Гиперлипидемия
  • Гипербилирубинемия
  • Криоглобулинемия
  • Гемолиз (in vivo)
  • Парапротеинемия
  • Резистентные к лизису эритроциты

• Образование микросгустков в пробе крови

Повышение концентрации гемоглобина наблюдается при реактивных и опухолевых эритроцитозах, обезвоживании. Снижение концентрации гемоглобина имеет место при анемиях, гипергидратации.
HCT (hematocrit) - гематокрит. Показатель вычисляется как сумма прямо измеренных объемов эритроцитов в единице объема крови и выражается в %. Таким образом, проблемы «остаточной» плазмы (плазмы, оставшейся между эритроцитами при центрифугировании) в гематологических анализаторах по сравнению с гематокритной центрифугой не существует. Коэффициент вариации для автоматического метода - менее 1% в сравнении с 1-2% при определении показателя методом центрифугирования. В табл. 3 приведены факторы, которые могут привести к ошибкам измерения НСТ.
Таблица 3
Возможные ошибки измерения НСТ

Ложное завышение

Ложное занижение

• Гигантские тромбоциты (с объемом более 30 фл)

• Агглютинация

• Криоглобулинемия

эритроцитов

• Высокий лейкоцитоз (более 50 х 109/л)

• Выраженный микроцитоз

• Гипергликемия (gt;600 мг/дл)

эритроцитов(lt;36 фл)

• Диабетический кетоацидоз


Выраженная агглютинация эритроцитов может привести к получению неправильных значений НСТ, т. к. аплютинаты эритроцитов могут восприниматься прибором как лейкоциты и не учитываться при расчете гематокрита. В таких случаях рекомендуется определение гематокрита на гематокритной центрифуге.
Повышение гематокрита наблюдается при реактивных и опухолевых эритроцитозах, уменьшении объема циркулирующей плазмы (ожоговая болезнь, дегидратация). Снижение гематокритной величины имеет место при анемиях, беременности (второй триместр), гипергидратации.
При гипергликемии и диабетическом кетоацидозе отмечается гипер- осмолярность плазмы крови. При разведении крови in vitro изотоническим раствором происходит быстрое набухание эритроцитов, что и вызывает завышение НСТ. В этих случаях определение гематокрита на гематокритной центрифуге является более точным.
Показатели гематокрита и гемоглобина являются важными параметрами общего состояния здоровья, повышение которых, например, у спортсменов может свидетельствовать о приеме препаратов, вызывающих экзогенную стимуляцию костного мозга (введение эритропоэтина).
MCV (mean corpuscular volume) - средний объем эритроцита, выражается в кубических микрометрах (мкм3) или в фемтолитрах (1 фл = 1 мкм3или 1 х Ю '7л). MCV определяется большинством гематологических анализаторов благодаря прямой зависимости амплитуды электрического импульса °т объема клетки. Вычисляется MCV делением суммы клеточных объемов на число эритроцитов.
В то же время MCV - это средний показатель объема всей популяции эритроцитов, содержащихся в диапазоне 36-360 фл. Поэтому необходимо иметь в виду, что MCV может иметь нормальное значение при наличии у
пациента одновременно выраженного макро- и микроцитоза, большом количестве аномальных эритроцитов (например, при серповидноклеточной анемии, выраженном пойкилоцитозе). В этом случае особую диагностическую важность приобретает анализ эритроцитарной гистограммы и морфология клеток в мазках крови. Возможные причины ошибок в измерении MCV приведены в табл. 4.
Таблица 4
Возможные ошибки измерения MCV

Ложное завышение

Ложное занижение

• Холодовые агглютинины

• Повышенное содержание

• Диабетический кетоацидоз

фрагментов эритроцитов

• Гиперосмолярность плазмы

в крови вследствие

• Гипернатриемия

механического гемолиза
  • Высокий лейкоцитоз (более 50 х 109/л)
  • Длительное хранение крови (более 8 часов)
  • Ретикулоцитоз
  • Макротромбоцитоз

• Коагулопатия потребления

При наличии агшютинации эритроцитов прибор воспринимает их как одну большую клетку, если размер их меньше верхнего порога эритроцитарного канала, что приводит к увеличению MCV. Сохранение крови in vitro и измерение таких проб при 37 °С способствует получению правильных результатов.
MCV является важным показателем в дифференциальной диагностике анемий. На основании MCV анемии разделяют на нормоцитарные (MCV 80- 100 фл), микроцитарные (MCV менее 80 фл) и макроцитарные (MCV более 100 фл).
MCV - показатель, отражающий изменения, возникающие в эритроцитах при длительном хранении крови. Изменения в мембране эритроцитов возникают раньше, чем в лейкоцитах и тромбоцитах, поэтому хранение крови более 8 часов вызывает увеличение MCV.
MCV меняется в течение жизни: у новорожденных достигает 128 фл, в первую неделю снижается до 100-112 фл, к году составляет 77-79 фл, в возрасте 4-3 лет нижняя граница нормы (80 фл) стабилизируется.
МСН (mean corpuscular hemoglobin) - среднее содержание гемоглобина в эритроците (пг). Рассчитывается по формуле:

МСН характеризует среднее содержание гемоглобина в отдельном эритроците в абсолютных единицах. В норме МСН составляет 27-31 пг. МСН - более объективный параметр, чем устаревший цветовой показатель, который не отражает синтез гемоглобина и его содержание в эритроците.
Возможные ошибки измерения. Параметр МСН является расчетным, поэтому к ложноповышенным результатам приводят все факторы, влияющие на увеличение значений гемоглобина и снижение количества эритроцитов. Ложнопониженные результаты МСН получаются вследствие ошибок, связанных с неправильным определением числа эритроцитов (завышения их количества), и занижения концентрации гемоглобина.
Изменения МСН лежат в основе разделения анемий на нормохромные (МСН - 27-31 иг), гипохромные (МСН менее 27 пг) и гиперхромные (МСН более 31 пг). Снижение МСН наблюдается при анемиях, обусловленных нарушением синтеза гемоглобина (железодефицитной анемии, порфирии), повышение - при макроцитарных и особенно мегалобластных анемиях.
МСНС (mean corpuscular hemoglobin concentration) - средняя концентрация гемоглобина в эритроците (г/дл). Вычисляется по формуле:

Различия между двумя последними индексами заключаются в том, что МСН указывает на массу гемоглобина в одном эритроците и выражается в долях грамма (пикограммах). МСНС показывает концентрацию гемоглобина в одном эритроците, т. е. соотношение содержания гемоглобина к объему клетки. Он отражает насыщение эритроцита гемоглобином и в норме составляет 30-38 г/дл. В отличие от МСН параметр МСНС не зависит от клеточного объема и является чувствительным показателем нарушения процессов гемоглобинообразования.
Возможные ошибки измерения. Поскольку параметр МСНС является расчетным, то к ложнозавышенным результатам приводят все факторы, влияющие на завышение значений гемоглобина и занижение гематокрита (последний связан с измерением объема эритроцитов). Ложнопониженные результаты МСНС получаются вследствие неправильного определения MCV (завышения их значения) и занижения концентрации гемоглобина.
Снижение значения МСНС наблюдается при заболеваниях, сопровождающихся нарушением синтеза гемоглобина.
Повышение МСНС выше 38 г/дл встречается редко (врожденный сфероци- т°з), т. к. это может закончиться кристаллизацией гемоглобина и гемолизом эритроцита. Чаще всего увеличение МСНС свидетельствует об ошибках, Допущенных при измерении пробы (погрешности определения гемоглобина или MCV). Поэтому данный параметр часто используется в качестве индикатора ошибок, допущенных на аналитическом или преаналитическом этапах работы.
Анализаторы фирмы Siemens (ADVIA) непосредственно измеряют концентрацию гемоглобина в каждом отдельном эритроците и строят гистограммы распределения клеток не только по объему, но и по концентрации гемоглобина. При этом возрастает точность определения этого параметра и вводится новый показатель - гетерогенность эритроцитов по концентрации гемоглобина (HDW-hemoglobin distribution width). Кроме того, в этих же ана
лизаторах существует ряд дополнительных параметров для характеристики периферического звена эритрона: LHD, %Нуро, %Hyper, %Micro, %Масго.
LHD (low hemoglobin density), % - гемоглобин низкой плотности - новый параметр, который коррелирует с процентом гипохромных эритроцитов. При наличии более 10% гипохромных эритроцитов показатель LHD gt;5,5%.
Показатель LHD является индикатором железодефицитного состояния.
%Нуро - процент гипохромных (содержащих менее 28 пг гемоглобина) эритроцитов, имеет значение в диагностике гш юхромных анемий и мониторинге терапии эритропоэтином (норма до 4%). Более 10% гипохромных эритроцитов является индикатором железодефицитного состояния. Увеличение количества гипохромных эритроцитов наблюдается при ЖДА, талассемии, АХЗ.
%Нурег - процент гиперхромных (содержащих более 41 пг гемоглобина) эритроцитов (норма до 4%).
%Micro - процент микроцитов (эритроцитов с объемом менее 60 фл), имеет значение в диагностике микроцитарных анемий и мониторинге терапии рЭПО.
% Macro - процент макроцитов (эритроцитов с объемом более 120 фл), имеет значение в диагностике макроцитарных анемий.
RDW (redcell distribution width) - показатель гетерогенности эритроцитов по объему, характеризует степень анизоцитоза. Этот показатель вычисляется большинством современных гематологических анализаторов на основании гистограммы распределения эритроцитов как коэффициент вариации объема эритроцитов:
где SD - стандартное среднеквадратическое отклонение объема эритроцита от среднего значения (рис. 17). На этот показатель влияет MCV, поэтому как при микроцитозе, так и при макроцитозе отмечается тенденция к увеличению RDW-CV.
В гематологических анализаторах фирмы Sysmex имеется еще один расчетный показатель RD W - это RDW-SD, который независим от MCV и представляет собой прямое измерение ширины эритроцитарной гистограммы на уровне 20% от базовой линии по оси Y. При этом высота пика RBC-гистограм- мы принимается за 100% (рис. 18). Норма RDW-SD -42 ± 5 фл. Клинически значимое значение, характеризующее анизоцитоз, RDW-SD gt;60 фл.
Рис. 17. Схематическое изображение распределения эритроцитов по объему (MCV), на основании которого рассчитывается показатель анизоцитоза (RDW)

Оба показателя RDW определяют вариабельность эритроцитов по объему. Повышение RDW предполагает присутствие смешанной популяции клеток (нормоциты и микроциты или макроциты и нормоциты). RDW-SD является более чувствительным показателем при наличии минорной популяции макроцитов или микроцитов, т. к. он измеряет нижнюю часть кривой распределения эритроцитов по объему. В то же время этот показатель будет изменяться при высоком ретикулоцитозе в силу их большого объема, что расширяет основание кривой распределения эритроцитов. RDW-CV менее чувствителен к присутствию небольшой популяции микроцитов или макроцитов или ретикулоцитов, но лучше отражает общие изменения в размере эритроцитов при макроцитарной или микроцитарной анемии.
Анизоцитоз улавливается прибором значительно быстрее, чем при визуальном просмотре мазка крови. Оценка степени анизоцитоза под микроскопом сопровождается целым рядом ошибок. При высыхании в мазках диаметр эритроцитов уменьшается на 10-20%. В толстых препаратах он меньше, чем в тонких. В то же время показатель RDW характеризует колебания объема клеток внутри популяции и не связан с абсолютной величиной объема эритроцитов. Поэтому при наличии в крови популяции эритроцитов с измененным, но достаточно однородным размером (например, микроциты) значения RDW могут быть в пределах нормы (11,5-14,5%). В то же время при выраженном анизоцитозе эритроцитов показатель MCV, характеризующий средний объем всей клеточной популяции, является нормальным, a RDW будет повышенным. Таким образом, сочетанное использование двух параметров - RDW и MCV - позволяет точнее характеризовать изменения в периферическом звене эритрона.
FRC (fragment red cells) (RBC-F) - подсчет фрагментов эритроцитов, используется для оценки тромботических микроангиопатий.
Гистограмма - это графическое распределение различных видов клеток по их количеству и объему. Для построения гистограмм гематологические анализаторы подсчитывают миллионы клеток в одном образце, сортируют импульсы по амплитуде и распределяют частицы объемом от 24 до 360 фл по 256 каналам, каждый из которых соответствует объему частиц.

Источник: Долгов В.В., Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е., «Лабораторная диагностика анемий» 2009

А так же в разделе «  ОСНОВНЫЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ОЦЕНКИ ЭРИТРОПОЭЗА, ПОЛУЧАЕМЫЕ НА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ АНАЛИЗАТОРАХ »