Регистрация генных, хромосомных и геномных мутаций в постнатальном периоде развития человека обычно ограничена исследованием образцов периферической крови.
Разработанный еще в 1960 году [310] метод приготовления препаратов из ФГА-стимулированных лимфоцитов является основным в клинической цитогенетике. Как правило, для кариотипирования используют дифференциальные GTG и CBG окраски. В некоторых лабораториях предпочитают Q- или R-окрашивание. Гораздо реже применяются специальные методы (анализ прометафазных хромосом, репликационные варианты дифференциальной окраски, выявление ЯОР и др.). Широкую популярность завоевал метод FISH, особенно M-FISH, который используется, в основном, для идентификации маркерных хромосом и структурных аберраций. Благодаря развитию этого метода возникло новое направление исследований — интерфазная цитогенетика, достижения которой могут быть использованы в клинической практике для установления формы гетероплоидии (мозаичной или полной) с использованием образцов других тканей (буккальный эпителий, фибробласты кожи, ткани гонад и т. д.). Другие молекулярно-цитогенетические методы (PRINS, CGH, SKY и их разновидности) имеют более ограниченное применение и используются, в основном, при идентификации структурных аберраций [167].
Разработанная недавно технология, позволяющая получить библиотеку ДНК из материала трудно идентифицируемого хромосомного фрагмента путем его микродиссекции непосредственно на хромосомном препарате, является одним из наиболее информативных и экономичных методов для установления природы хромосомной перестройки. Мечение такой ДНК с последующей гибридизацией на контрольных хромосомных препаратах позволяет практически во всех случаях провести точную идентификацию аберрантной хромосомы и даже оценить связана ли конкретная перестройка с потерей или приобретением дополнительного хромосомного материала [167].
Комплекс методов ДНК-анализа (PCR, блот-гибридизация, SSCP, анализ гетеродуплексов и др.) применяют не только для детекции генных мутаций, но и для детального исследования аномального кариотипа и установления механизмов возникновения хромосомных аберраций. В частности, на основе изучения полиморфных локусов ДНК подтверждены цитогенетические наблюдения о высокой частоте возникновения анеуплоидии в оогенезе, показана решающая роль аномальной мейотической рекомбинации в нерасхождении хромосом (см. главу 3).
Основные принципы и методические подходы, разработанные для анализа механизмов возникновения мутаций с использованием образцов биоматериала от индивидов в постнатальном периоде, приемлемы и для исследований с использованием материала плодного происхождения. С учетом специфики получения плодного материала следует отметить, что в качестве материала для метода PCR, как нами было показано ранее [156, 513], могут быть использованы соскобы фиксированных клеток хориона с препаратов, ранее использовавшихся для цитогенетической диагностики.
Кратко рассмотрим методические подходы, используемые для установления происхождения гетероплоидии и структурных аберраций хромосом у постимплантационных зародышей. Следует подчеркнуть, что изучение механизмов возникновения хромосомных аберраций, регистрируемых до или после рождения, носит ретроспективный характер. Методология таких исследований основана на установлении характера мутации (геномная, хромосомная), ее формы (полная, мозаичная) и определении стадии возникновения. Если для идентификации мутации используется доступный биологический материал, то выяснение происхождения хромосомной аномалии неизбежно влечет цитогенетическое и молекулярно-генетическое исследование образцов биоматериала от его родителей.