Методы выделения аллергенов из природного сырья включают следующие основные этапы:
  • изучение качества аллергенного сырья;
  • экстрагирование сырья (ВСЭ), при котором соблюдается требование максимального извлечения аллергенов при минимальной степени их денатурации и разрушения (на этом этапе могут быть использованы ингибиторы протеаз);
  • высокую степень очистки экстрактов от балластных примесей;
  • выделение и анализ главных и минорных аллергенов и их идентификация;
  • анализ функциональных групп аллергенов;
  • оценку специфичности и безвредности аллергенов.

Аллергены антропогенного происхождения возникают в течение производственных процессов, часто при переработке природного сырья, аллергенный анализ которого представляется в данном сообщении.
Существующие сведения о структуре ряда аллергенов позволяют создавать синтетические и рекомбинантные аналоги природных форм. Молекулярное клонирование аллергенов делает возможным синтез неограниченного количеетва клональ- но чистого белка. В качестве самостоятельного аллергена может быть представлен природный пептид или его рекомбинантный
вариант, если (с учетом всех перечисленных требований Номенклатуры) он идентифицирован.
НОМЕНКЛАТУРА АЛЛЕРГЕНОВ
Номенклатура аллергенов (WHO/IUIS) разработана (под редакцией J.N.Larsen, H.Lowenstein, 1994-99) Международным подкомитетом по Номенклатуре аллергенов. Имеются определенные требования к представлению каждой новой формы аллергена: необходимо описать источник происхождения сырья; представить характеристику молекулярной массы, аминокислотной последовательности в структуре гликопротеина, которая сравнивается способом гомологии с известными последовательностями в существующих аллергенах, веденными в электронный банк данных; определить показатель изоэлектри- ческой точки, характер углеводных компонентов в структуре аллергена, его IgE-связывающую активность с целью квалификации как главного, так и минорного аллергена (103).
С внедрением достижений молекулярной биологии в область идентификации аллергенов были получены новые сведения о структуре разных форм. Параллельно обновлялась и пополнялась новыми сведениями составленная в 1986 году Номенклатура аллергенов. Редакция варианта 1994 года дополнена в 1999 году новым списком включенных в нее аллергенов и их изоформ. Новая редакция составлена с учетом рекомбинантных и синтетических форм и их идентификации с применением метода cDNAb. Сохраняется требование таксономического названия рода, вида источника аллергена. Сокращенное название аллергена составлено таким образом: первые три буквы латинского названия рода, далее — первая буква вида, арабская цифра (Der fl). Одна и та же цифра означает гомологичные аллергены разных видов. Изоформы и их варианты обозначают дополнительными четырьмя цифрами. Первые две из них характеризуют изоаллерген, а следующие две — вариант. Учитывая возможность получения синтетических и рекомбинантных форм аллергенных пептидов, введены дополнительные буквенные маркеры, соответственно: г — рекомбинантная форма, п — аллерген получен на основе природного источника, s — синтетический аналог аллергена.

ПЫЛЬЦЕВЫЕ АЛЛЕРГЕНЫ
Пыльцевые аллергены — важнейшие аллергены растительного происхождения. Пыльца — мужские половые клетки растения. Вегетативные части растения и плоды могут также обладать аллергенными свойствами, но в менее выраженной степени. Пыльца растений образуется в микроспорангиях (пыльниках). Созревшая пыльца с помощью ветра попадает в воздушное пространство. Наиболее аллергенна пыльца ветроопыляемых растений, размеры пыльцевых зерен у которых имеют небольшие размеры, а количественные показатели в десятки раз превышают те же уровни пыльцы насекомоопыляемых растений. Известно, что в структуре пыльцевого зерна наиболее аллергенными являются: экзина, митохондриальные, рибосомаль- ные структуры, ядро. Поверхность экзины имеет разнообразные шипики, выросты, зубчики и др., которые определяют специфическую структуру пыльцевого зерна. Дифференциальная диагностика различных видов пыльцы сложна и требует квалификации медицинского палинолога (24). В средней полосе России, Европы и в ряде других стран наиболее часто аллергические реакции выявляются на аллергены пыльцы деревьев (береза, ольха, орешник и др.), злаков (тимофеевка, рожь и др.), сорных трав (полынь, лебеда и др.). Растения, продуцирующие пыльцу, относят к группе Spermatophyta. Несмотря на большое разнообразие видов этой группы, существуют общие таксономические признаки в пределах семейства и рода. Пыльца при оплодотворении образует пыльцевую трубку, прорастающую в завязь. Все растения имеют типичное строение: корень, ствол, листья, цветки, плоды. Представители Spermatophyta делятся на два отдела: Pinophyta (Голосемянные) и Magnoliophyta (Покрытосемянные). Большинство растений относится к отделу Покрытосемянных.
Аллергены пыльцы березы являются наиболее активными Ал в составе пыльцевого спектра деревьев. Береза относится к семейству Betulaceae (Березовые), роду — Betula L — Береза. Дерево с мощной, но неглубокой корневой системой. Пыльца округло-треугольной или многоугольной формы. Произрастает по всему миру, кроме Африки и Австралии. Пыльца более 10 видов березы описана как аллергенная. Наиболее изучены ал
лергенные свойства двух видов пыльцы: Betula vulgaris и Betu- la verrucosa. Дерево зацветает ранней весной, выбрасывает в атмосферный воздух значительные количества пыльцы, в составе которой обнаружено до 40 белков, 6 из них обладают аллергенной активностью. Это белки с молекулярной массой 17, 25, 27 - 30 kD. В Номенклатуре аллергенов зарегистрированы аллергены Betula verrucosa: Bet v 1 с M=17 и Bet v 2; профилин М=15 (см. раздел «Профилины»). Имеют общие аллергенные эпитопы с пыльцой ольхи (род Alnus) и орешника (род Corulus) (77, 103).
Пыльца диких и культурных злаков (сем. Роасеа — Graminae) также относится к наиболее активным Ал. В составе семейства Злаковых значительная аллергенная активность отмечается у пыльцы дикорастущих растений: тимофеевки (Phleum pratense, Dactylis glomerata и др.). Род Phleum L содержит 17 видов. Растет тимофеевка в умеренном поясе Северного полушария. Наиболее актуальна пыльца Phleum pratense L (Тимофеевка луговая). Многолетнее растение. Пыльцевое зерно овальной формы или сфероидальное до 35 мк. Пыльца тимофеевки имеет 5 аллергенных пептидов с М=11 - 33 kD, Phi pi = 27 kD, Phi p 2, Phi p 5, M=32 kD, Phi p 6, Phi p 11, профилин.
В состав семейства Злаковых входит род Dactylis, представителем которого является Dactylis glomerata (Ежа сборная). Многолетнее растение. Пыльцевое зерно диаметром от 28 до 37 мк. Аллергены Dactylis glomerata (Dac g 1, Dac g 5) являются гликопротеинами с M=31 - 32 kD. Dac g 2 — низкомолекулярный белок-профилин.
Среди сорных трав наиболее актуальной является пыльца амброзии (Ambrosia artemisiifolia, Ambrosia trifida). Растение распространено в южных регионах России. Зарегистрировано 7 аллергенов Amb. artemisiifolia: Amb а 1 (Е) и Amb а 2 (К) с М=38 kD. В состав пыльцы амброзии входит профилин — низкомолекулярный белок (М=11) (88, 96, 100, 114, 115, 124, 125).
В средней полосе России наиболее распространенным растением, относящимся к сорным травам является полынь обыкновенная и полынь горькая (Artemisia vulgaris, Artemisia absinthium). Алергенный профиль пыльцы полыни горькой мало изучен. Высокой аллергенной активностью обладали фракции с М в диапазоне от 35 - 67 KD. Однако в существующую

Международную Номенклатуру аллергенов введен лишь аллерген полыни обыкновенной - Art v 2, имеющий М=35 kD. Специальную группу гликопротеинов, определяющих во многом общие биологические свойства аллергенов разных видов пыльцы и перекрестные реакции у больных на различные пыльцевые аллергены, составляют профилины (34, 88, 123, 124, 125).