Болезнь Марека (БМ) — высококонтагиозное лимфопролиферативное заболевание кур. Главные характерные признаки — развитие лимфом и демиелиниза- ция периферических нервов. Классическая форма течения сопровождается парезами и параличами, а иногда лимфомами гонад. Для острой формы характерны лимфоидные опухоли в одном или нескольких органах (тканях). При острой болезни гибель птицы варьирует в широких пределах и иногда превышает 10-15%. При классической форме поражается обычно 10-30% поголовья, а смертность, как правило, ниже, чем при острой форме болезни. По механизму онкогенного действия вирус болезни Марека (ВМБ) незначительно отличается от других онкогенных вирусов. Вирус болезни Марека размножается в Т-лимфо- цитах и вызывает образование внутриклеточных включений. Поскольку первичные лимфомы содержат Т- и В-клетки, а полученные из них линии лимфоблас- тоидных клеток представлены только Т-клетками, считают, что ВМБ трансформирует только Т-лимфоциты. В одной трансформированной клетке выявляют до 20 эквивалентов генома ВМБ.
Болезнь Марека, являясь одной из наиболее распространенных болезней кур, встречается во всех странах мира. Наличие инфекции подтверждено во всех промышленных стадах птицы, которые были обследованы во всех частях света. До широкого применения вакцины в странах с хорошо развитым промышленным птицеводством из каждых 20 кур одна погибла от болезни Марека. Потери США от этой болезни перед началом применения вакцин составляли около 160 млн долларов в год.
За последние 40 лет после изоляции вируса изменилось вызываемое им заболевание. Со временем инфекция становится все более генерализованной, более острой, тяжелой. Расширяется хозяинный спектр. Основная причина изменения патогенности вируса БМ заключается в мутациях специфических вирусных генов, вызывающих изменения времени индукции опухолей, потерю А-АГ, снижение скорости репликации in vitro, снижение цитолитической активности in vivo, потерю способности размножаться в лимфоцитах и т.д. [1637]. Данная эволюция ВБМ, возможно, является результатом иммунологического пресса, вызванного систематической поголовной вакцинацией цыплят, а также возможной рекомбинацией с другими вирусами. Химерные молекулы геномной ДНК вируса бо
лезни Марека, содержащие длинные концевые повторы ретровирусов птиц, образовывались in vivo при смешанной инфекции указанными вирусами [563].
Вирусом БМ цыплята инфицируются спонтанно в первые дни жизни. Размножаясь, вирус вызывает поражение первичных органов лимфосистемы и иммуносупрессию. С инфицированными лейкоцитами вирус попадает в эпителий перьевых фолликулов, где интенсивно размножается и накапливается в больших количествах. Отсюда с чешуйками шелушащейся кожи и выпавшими перьями он выделяется во внешнюю среду [1492]. Возбудитель болезни сохраняется у большинства инфицированных кур в течение всей жизни. Вирус болезни Марека не передается трансовариально, но материнские антитела передаются через желток потомству, обеспечивая снижение заболеваемости и смертности, но не абсолютную защиту от БМ. Материнские антитела обнаруживают у цыплят в течение первых 2—3 недель жизни. Если цыплята при рождении или еще в период эмбрионального развития инфицируются авирулентным штаммом вируса БМ или герпесвирусом индеек, то они приобретают выраженную защиту от развития БМ при последующем инфицировании патогенным штаммом вируса БМ. Защитное действие проявляется примерно в 90% случаях, то есть клиническая картина БМ отсутствует, хотя виремия имеет место. Механизм этого явления неизвестен. Данный феномен, вероятно, обусловлен явлением интерференции вирусов в сочетании с гуморальными и клеточными факторами иммунитета.
Степень выраженности и формы болезни зависят от вирулентности вируса и генетически обусловленной породой чувствительности кур. Одни штаммы вируса обладают высокой патогенностью и вызывают острую форму болезни Марека, другие — менее патогенны и вызывают классическую форму, третьи вообще непатогенны. Такие штаммы вируса могут одновременно встречаться в одном хозяйстве.
В группе антигенно-родственных вирусов болезни Марека, герпесвируса индеек (ВБМ — ГВИ) различают три серотипа. К серотипу 1 относят патогенные штаммы вируса, вызывающие острую и классическую, а также слабовыражен- ную формы болезни. Тип 2 включает естественные авирулентные для кур штаммы ВБМ. К типу 3 относят антигенно-родственный герпесвирус индеек [20]. ГВИ можно обнаружить во многих, если не во всех промышленных хозяйствах, разводящих индеек. ГВИ непатогенен для индеек и кур, в настоящее время широко применяется в качестве вакцины против болезни Марека. С помощью моноклональных антител установлено, что гетероиммунитет обусловлен общими антигенными детерминантами трех гликопротеинов ВБМ (gp 115/100, 63 и 50 кД) и ГВИ (gp 150, 62 и 52 кД). Иммунизация кур и кроликов этими гликопротеинами индуцировала выработку антител, подавляющих репродукцию обоих вирусов [829].
Несмотря на тесное антигенное сродство, гомология ДНК ВБМ и ВГИ не превышает 1—4% [350]. Иммунитет против БМ является тимусзависимым процессом, поскольку вакцинация не защищала бестимусных цыплят от БМ [745]. Опосредованная клетками цитотоксичность носит вирусспецифический харак
тер. Лимфоциты от инфицированных ВБМ кур лизировали клетки-мишени, инфицированные ВБМ, но не ГВИ. В то же время иммунные и неиммунные лимфоциты кур лизировали клетки, инфицированные ВБМ в присутствии антисывороток как против ВБМ, так и против ГВИ [904].
Иммунизация цыплят авирулентными штаммами ВБМ или природными штаммами ГВИ надежно защищает их (в 90% случаев) от последующей спонтанной инфекции вирулентным штаммом ВБМ, то есть клиническое проявление болезни отсутствует, хотя виремия имеет место. Механизм такого защитного действия неизвестен. Возможно, что в основе эффективности применения ГВИ при БМ лежит не только антигенная общность этих вирусов, а также интерференция между ними. В ответ на введение ГВИ у цыплят появляется устойчивость, препятствующая развитию лимфопролиферативных процессов, индуцируемых ВБМ.
Основной мерой борьбы с БМ на сегодня остается специфическая профилактика, осуществляемая с помощью различных живых вакцин. Вакцинируют, как правило, суточных цыплят. Эффективность вакцинации повышается с увеличением интервала между прививкой и спонтанным инфицированием. Защитный эффект (при вакцинирующей дозе gt; 1000 ФОБ) обнаруживают спустя 3—4 дня, он достигает пика через две недели [1259] и сохраняется в течение всей жизни. Хотя вакцинация не создает полной защиты, тем не менее она значительно сокращает естественную инфицированность поголовья и выделение полевого вируса во внешнюю среду.
Необходимо учитывать, что материнские антитела не защищают цыплят от БМ, в то же время их высокий уровень может снижать эффективность применения гомологичной вакцины. С учетом этого обстоятельства для прививки цыплят целесообразнее использовать вакцинный вирус, ассоциированный с живыми клетками, чем внеклеточный, — в виде лиофилизированного препарата. Для снижения отрицательного влияния материнского иммунитета рекомендуется использовать разные вакцины (ГВИ и ВБМ) для иммунизации родителей и потомства.
Для приготовления вакцины БМ используют все три серотипа вируса. Чаще для этой цели применяют аттенуированный серотип 1 (штамм HPRS-16att и CV1-988), естественный неонкогенный штамм SB-1 серотипа 2 и ВГИ штамм FC-126 (серотип 3). Каждый из этих вирусов индуцирует достаточный защитный эффект против БМ. Однако ВГИ слабо эффективен против очень вирулентных вирусов БМ. Аттенуированные штаммы ВБМ (серотип 1) получают путем серийного пассирования в культурах клеток. Искусственно или естественно аттенуированные штаммы ВБМ передаются от привитых кур непривитым, тогда как ГВИ практически не способен к горизонтальной передаче в популяции кур. Хотя аттенуация сопровождается снижением способности ВБМ инфицировать лимфоциты цыплят in vivo и in vitro [1377], такие вакцинные штаммы, как CV-1 - 988 (серотип 1) и SB-1 (серотип 2), хорошо размножаются в организме и культуре клеток, легко передаются горизонтально. Имеется корреляция между способ
ностью аттенуированных штаммов ВБМ передаваться горизонтально и их иммуногенностью [1597]. Способность к такой передаче, вероятно, связана с выраженной репродукцией вакцинного штамма в эпителии перьевых фоликулов. По- ствакцинальная виремия и особенно уровень размножения вируса в эпителиальных клетках перьевых фолликулов привитых цыплят являются хорошим тестом иммуногенности вакцины. Штаммы, длительно пассированные в культуре клеток, снижают способность к приживлению в организме привитых цыплят, а вместе с ней и иммуногенность [1671].
Вакцинные штаммы размножают в первичных культурах эмбрионов птиц (преимущественно куриных эмбрионов) и выпускают в виде жидких или сухих препаратов. В первом случае они представляют собой вирус, связанный с клетками, во втором — внеклеточный. Сухие вакцины имеют существенные преимущества ввиду удобства перевозки, хранения и использования по сравнению с жидкими вакцинами, которые хранят и транспортируют в жидком азоте.
В последние годы выявлена тенденция к снижению эффективности вакцинации [1673]. Циркуляция в природе высоковирулентных вариантов и существование антигенных вариантов ВБМ привели к необходимости совершенствования существующей системы специфической профилактики БМ.
Наряду с такими мерами, как получение аттенуированных штаммов с повышенной иммуногенностью и увеличением дозы вакцины для уменьшения вспышек БМ, ввели вакцинацию 18-дневных эмбрионов для защиты от раннего заражения и применение поливалентных вакцин с целью противодействия заражению вариантными штаммами возбудителя.
Установлено, что наиболее высокие защитные свойства имеют поливалентные вакцины, включающие штаммы вирусов группы ВБМ-ГВИ серотипов 1, 2 и 3 [1377, 1598].
Испытание в производственных условиях трех вакцин против БМ показало, что моно-, би- и поливалентная вакцины защищали соответственно 54,5; 74,5 и 91,5% цыплят [909, 1670, 1672]. Бивалентные и трехвалентные вакцины, включающие вакцинные штаммы ВБМ и ГВИ (серотипы 1 и 3; 2 и 3; 1, 2 и 3), оказались значительно эффективнее по сравнению с моновакцинами, особенно против очень вирулентных штаммов, которые становятся преобладающими в зонах активного птицеводства [909].
Трехвалентная вакцина была эффективной при заражении высоковирулентным штаммом ВБМ даже на фоне материнских антител (защитный эффект 84%). Бивалентная вакцина из штаммов SB-1 (серотип 2) и FC126 (серотип 3) была эффективнее других бивалентных вариантов. In vivo штаммы не проявляли интерференции, но проявили протективный синергизм: эффективность одного возрастала от очень низкой дозы другого, и даже частичные дозы двух штаммов были эффективнее полной дозы одного штамма [1672].
Оказалось, что вакцинация куриных эмбрионов в последней стадии развития защищает цыплят от БМ. При заражении на 16-18-й день инкубации онко- генные и неонкогенные штаммы ВБМ не проявляли значительной реакции в
тканях эмбрионов. ВБМ оставался неактивным в эмбриональный период до вывода цыплят. Вакцинация эмбрионов ГВИ одновременно с заражением ВБМ дала высокий защитный эффект против развития БМ, который значительно снижался в случае вакцинации однодневных цыплят [1393]. У 170-дневных куриных эмбрионов, вакцинированных ГВИ, вирус в высоких титрах накапливался только в тканях легкого и практически не обнаруживался в лимфоидных органах. Клетками-мишенями были фибробластоподобные или эпителиоподобные клетки легких КЭ, но не лимфоидные или макрофагальные клетки, как это имеет место в постэмбриональный период развития.
Вакцинопрофилактика кур против БМ может быть эффективной только при отсутствии вторичных иммунодефицитов. В этом отношении особую опасность представляет инфекционный бурсит птиц, а также инфекционная анемия цыплят [1189].
Имеются сообщения об изготовлении инактивированных вакцин БМ. Обработка глютаральдегидом устраняла инфекционность ВБМ, но сохраняла анти- генность и иммуногенность вирусспецифических компонентов. Опухолевые клетки и лимфоциты инфицированных цыплят, содержащие незначительное количество опухолевоспецифических антигенов, не оказали защитного эффекта, несмотря на высокое содержание вирусного антигена. Вместе с тем клетки лим- фобластоидной линии, содержащие почти в 100% случаях опухолевоспецифические антигены и небольшое количество вирусного антигена, обеспечили высокую резистентность птиц к ВБМ. В других аналогичных опытах с инактивированными вакцинами вирусный антиген обладал более выраженной защитой против БМ, чем опухолевой антиген. Результаты этих исследований показали, что иммунитет при БМ может быть направлен или против репликации и распространения вируса, или процессов, связанных с трансформацией и пролиферацией лимфоидных клеток. Природа опухолевоспецифических антигенов и роль ВБМ в их индукции остается невыясненной [ 1135]. В пользу важной роли опухолевоспецифических антигенов в иммунитете при БМ свидетельствуют также положительные результаты иммунизации цыплят клетками лимфобластоидной линии кур, трансформированной ВБМ, но не продуцирующей его [1547].